【摘要】：為提高煙草抗黑脛病育種效率,為煙草抗黑脛病育種提供理論依據(jù),為分子輔助選擇提供有效的SSR分子標(biāo)記。本實驗以抗黑脛病品種巖煙97和自育高鉀感黑脛病品系GK2為親本進(jìn)行雜交,對其親本、F1代、F2代、BC1代群體進(jìn)行人工接種黑脛病抗性鑒定,依據(jù)鑒定結(jié)果分析其遺傳規(guī)律。提取各世代煙株樣品基因組DNA,利用SSR分子標(biāo)記方法進(jìn)行篩選,獲得與煙草黑脛病抗性基因連鎖的SSR分子標(biāo)記。結(jié)果如下:(1)菌谷接種法大田處理16株發(fā)病,發(fā)病率80%;盆栽處理20株發(fā)病,發(fā)病率100%。創(chuàng)傷接種法大田處理18株發(fā)病,發(fā)病率90%;盆栽處理19株發(fā)病,發(fā)病率95%,卡方檢驗結(jié)果表明不同栽培措施下兩種接種方式的接種效果一致。(2)抗病親本巖煙97對煙草黑脛病0號生理小種表現(xiàn)高抗,單株鑒定結(jié)果符合抗感比例1R:0S;感病親本GK2高感煙草黑脛病,單株鑒定結(jié)果符合抗感比例0R:1S;雜交F1代中感煙草黑脛病,單株鑒定結(jié)果符合抗感比例0R:1S;F2代分離群體中感煙草黑脛病,單株鑒定結(jié)果符合抗感比例1R:3S;BC1代4個組合A:♂巖煙97×♀(♂巖煙97×♀GK2)、C:♂巖煙97×♀(♂GK2×♀巖煙97)表現(xiàn)為抗病,單株鑒定結(jié)果均符合抗感比例1R:1S;B:♂GK2×♀(♂GK2×♀巖煙97)、D:♂GK2×♀(♂巖煙97×♀GK2)均表現(xiàn)為中抗,單株鑒定結(jié)果均符合抗感比例0R:1S。(3)SSR-PCR選擇前、后引物0.4μL、ddH_2O 13.5μL、dNTP 2μL、10×PCR buffer2μL、rTaq酶0.2μL、DNA模板1.5μL的反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物條帶清晰明亮。(4)318對SSR引物中有25對在抗、感親本間表現(xiàn)出多態(tài)性差異,多態(tài)率為7.86%。25對在親本間具有多態(tài)性差異的SSR引物,經(jīng)F2代單株篩選獲得SSR引物PT54175_(-216)在抗病單株和感病單株間的多態(tài)性差異與親本一致。PT54175_(-216)位于煙草第六號染色體短臂端,與親本巖煙97的黑脛病抗性基因連鎖,PCR擴(kuò)增條帶大小為216bp。(5)PT54175_(-216)在F2代群體中進(jìn)行驗證,40株抗病、98株感病,抗感基因型分離比例符合期望比1R:3S,X2c=0.30,P0.05=0.950。菌谷接種法進(jìn)行人工接種抗性鑒定的結(jié)果可靠有效,適用于大量大田煙株進(jìn)行黑脛病抗性鑒定;巖煙97對煙草黑脛病0號生理小種的抗性基因遺傳可能受一對隱性基因控制;SSR標(biāo)記PT54175_(-216)在親本及抗感分離單株間呈現(xiàn)穩(wěn)定的多態(tài)性差異,與抗性基因連鎖遺傳。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S435.72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2714080