【摘要】：黃瓜作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物備受青睞。由于黃瓜連作面積越來越大,土傳病害特別是枯萎病逐年加重,黃瓜枯萎病是由Fusarium oxysporum f.sp.cucumerin J.H.Owen(FOC)引起的世界性的土傳病害,嚴(yán)重制約黃瓜的品質(zhì)及產(chǎn)量,造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失�；瘜W(xué)防治特別是施用農(nóng)藥是最常用的防控病害的方法。但是,化學(xué)農(nóng)藥的濫用不僅會(huì)破壞生態(tài)平衡,還會(huì)危害人體健康。此外,化學(xué)試劑的長期施用會(huì)使病原菌產(chǎn)生抗藥性,影響藥劑對病害的防治效果。因此,迫切需要一種安全有效的方法防治枯萎病。近年來,生物防治以其環(huán)境友好、安全有效且可持續(xù)強(qiáng)的特點(diǎn)成為可替代化學(xué)防治的重要方法之一。1.從土壤中篩選到76株可培養(yǎng)的細(xì)菌,8株對黃瓜枯萎病具有拮抗效果,其中菌株HX-140對黃瓜枯萎病菌拮抗最好,抑制率為76.53%;經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、生理生化鑒定和 16S rDNA序列分析,將菌株HX-140鑒定為多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa);分別以黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、亞麻炭疽病菌(Colletotrichum lini)、亞麻枯萎病菌(Fusari lini)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、油茶炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)及馬鈴薯立枯病菌(Rhizoctonia solani)為靶標(biāo)菌,測定菌株HX-140的抑菌譜,菌株HX-140對供試7株病原真菌均有明顯的抑制效果,抑菌率在60%以上;菌株HX-140不產(chǎn)IAA,無產(chǎn)氨能力和解磷能力;菌株HX-140可以在10℃-40℃、含有0%-5%的NaCl和pH2-pH10環(huán)境中生長。2.菌株HX-140的拮抗機(jī)制初步研究發(fā)現(xiàn),菌株HX-140可以分泌蛋白酶、纖維素酶和β-1,3-葡聚糖酶,并產(chǎn)生揮發(fā)性抑菌氣體,其無菌發(fā)酵液無抑菌活性。3.研究菌株HX-140及黃瓜枯萎病對黃瓜防御反應(yīng)酶系(CAT、POD、PPO、PAL、SOD)的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,單獨(dú)施加黃瓜枯萎病菌培養(yǎng)液或HX-140菌懸液,或者同時(shí)施加黃瓜枯萎病菌培養(yǎng)液和HX-140菌懸液均能使黃瓜葉片內(nèi)的CAT、POD、PPO、PAL、SOD等酶活性在48h-72h內(nèi)持續(xù)升高種植達(dá)到峰值。其中同時(shí)施加黃瓜枯萎病菌培養(yǎng)液和HX-140菌懸液在相同時(shí)間內(nèi)比單獨(dú)施加黃瓜枯萎病菌培養(yǎng)液或HX-140菌懸液的峰值更高,黃瓜葉片內(nèi)CAT、POD、PPO、PAL、SOD的酶活性分別為不施加不作處理的黃瓜葉片的6.14、1.57、1.87、1.88、2.73倍。在3 d-4d后,黃瓜葉片內(nèi)的防御酶活性再次不同程度升高。4.通過響應(yīng)面優(yōu)化得到了菌株HX-140最佳產(chǎn)芽孢的培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件:胰蛋白胨19 g·L~(-1),麩皮25 g·-1,Na_2HPO_420·g L~(-1),pH7,接種量3%,裝液量100 mL,轉(zhuǎn)速180 r·min~(-1)'27℃,培養(yǎng)48h,實(shí)測芽孢濃度2.69×107 cfu·mL~(-1),是優(yōu)化前的16.3倍。5.菌株HX-140的室內(nèi)盆栽防病試驗(yàn)表明,菌株HX-140對黃瓜枯萎病的防治效率為55.56%,為田間試驗(yàn)的開展提供了依據(jù)。6.菌株HX-140的田間灌根試驗(yàn)表明,濃度分別為10~6、10~7和10~8cfumL~(-1)的細(xì)菌發(fā)酵液對黃瓜枯萎病的防治效果分別為19.54%、41.10%和50.85%,對土壤中可培養(yǎng)的不同微生物的數(shù)量也產(chǎn)生了較大的影響,提高了土壤中可培養(yǎng)的細(xì)菌和放線菌的數(shù)量,減少了可培養(yǎng)真菌的數(shù)量,為生防菌的應(yīng)用提供一定的理論及實(shí)踐基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S436.421.13
【圖文】：

菌株ＨＸ－１４０在ＮＡ培養(yǎng)基上菌落形態(tài)小而不規(guī)則，邊緣不整齊，呈阿米逡逑巴狀擴(kuò)展，表面凸起且光滑濕潤，顏色呈乳白色，不透明。革蘭氏染色結(jié)果顯示逡逑菌株ＨＸ－１４０呈桿狀，革蘭氏陰性細(xì)菌（圖２．１）。逡逑■邋ＭＭ：逡逑圖２．１邋ＨＸ－１４０的菌落形態(tài)圖（Ａ）及革蘭氏染色圖（Ｂ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１邋Ｃｏｌｏｎｙ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋（Ａ）邋ａｎｄ邋ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋（Ｂ）邋ｏｆ邋ｓｔｒａｉｎ邋ＨＸ－１４０．逡逑２．４．２．２生理生化鑒定逡逑生理生化實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示（表２．４），在糖發(fā)酵反應(yīng)中，闌株ＨＸ－１４０邋ｕｊ以逡逑１９逡逑

邐４０邐４５逡逑溫度（°Ｃ）逡逑圖２．５菌株ＨＸ－１４０的溫度耐受性檢測逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．５邋Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ邋ｔｏｌｅｒａｎｃｅ邋ｔｅｓｔ邋ｏｆ邋ｓｔｒａｉｎ邋ＨＸ－１４０逡逑２３逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2713247