【摘要】：目的:準確診斷貴州地區(qū)某蜂場發(fā)生的一起中蜂細菌性疾病,篩選對病原菌敏感的中西藥物,為該起蜂病的臨床有效防治提供理論依據(jù),并為中西藥聯(lián)合抑菌提供一定理論基礎。方法:(1)通過分離培養(yǎng)和致病性鑒定,獲得并確定引發(fā)這起蜂病的一株致病性病原菌;應用形態(tài)學觀察、生理生化實驗、16S rRNA基因的通用引物進行測序,最終確定該株致病菌種屬。(2)采用藥敏片檢測的方法,對分離得到的菌株的耐藥性進行檢測,選取對該株細菌有抑制作用的抗生素藥物和單味中草藥。(3)采用微量肉湯二倍稀釋法檢測該細菌分離株對于選取抗生素和單味中藥的最低抑菌濃度MIC值。(4)運用棋盤法進行中西藥聯(lián)合抑菌,計算出最低抑菌濃度指數(shù)FICI值,以確定抗生素和單味中藥聯(lián)合用藥后的聯(lián)合效果。(5)選取實驗抗生素和單味中藥聯(lián)合用藥后效果最好的一組進行動物試驗,驗證其效果。結果:(1)在病料中分離檢測出6種細菌純培養(yǎng)物,通過致病性試驗,得到其中一株,標號為H1細菌純培養(yǎng)物為致病菌,通過對該株細菌純培養(yǎng)物進行檢測鑒定,這株細菌純培養(yǎng)物為蜂房哈夫尼菌。(2)通過中藥水煎液進行的中藥藥敏實驗中,五倍子與黃連的抑菌效果最為顯著,黃芩、山楂、艾葉和連翹也有較強的抑菌效果,苦參、板藍根、蒼術、金銀花、馬齒莧、蛇床子、梔子、青蒿、柴胡和穿心蓮的抑菌效果較弱,大青葉、魚腥草、薄荷和蒲公英沒有抑菌性。西藥藥敏試驗中該細菌對青霉素、克林霉素、紅霉素、米諾環(huán)素、苯唑西林和頭孢氨芐耐藥;對于麥迪霉素、四環(huán)素和多西環(huán)素是中敏;對于慶大霉素、呋喃唑酮、復方新諾明、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢呋辛、頭孢他啶和頭孢哌酮等均為敏感。最后選取中藥為五倍子、黃連、黃芩、連翹、艾葉和山楂,西藥為硫酸慶大霉素和氨芐西林鈉進行MIC值和FICI值的檢測。(3)中藥水煎液最低抑菌濃度:單獨使用五倍子、黃連、黃芩、艾葉、連翹和山楂水煎液對該致病菌的最低抑菌濃度為分別為3.9mg/ml、7.8mg/ml、15.6mg/ml、31.2mg/ml、31.2mg/ml和62.5mg/ml。西藥最低抑菌濃度:單獨使用硫酸慶大霉素和氨芐西林鈉的最低抑菌濃度分別為2.5μg/ml和20μg/ml。(4)在中西藥聯(lián)合抑菌試驗中,效果較好,具有協(xié)同作用的組合為硫酸慶大霉素注射液和五倍子、黃連、黃芩的水煎液聯(lián)用;氨芐西林鈉和黃連、黃芩水煎液聯(lián)用。其中效果最好的組合為硫酸慶大霉素與黃連水煎液進行聯(lián)用,其FICI的值為0.18,其他組的藥物組合效果僅為相加和無關。使用硫酸慶大霉素與黃連水煎液進行動物試驗,發(fā)現(xiàn)該藥物組合對蜂房哈夫尼菌引起的中蜂傳染病有良好的療效。結論:(1)病原菌分離鑒定和致病試驗結果表明,貴州某中蜂場發(fā)生的這起蜂病由蜂房哈夫尼菌感染引起;(2)這株蜂房哈夫尼菌僅對少部分抗菌藥物耐藥,說明該細菌在蜂群中的流行時間不長,該蜂場沒有濫用藥物造成多重耐藥;(3)體外抑菌試驗表明,慶大霉素與黃連水煎液聯(lián)合用藥,對蜂房哈夫尼菌具有良好的抑菌效果。
【圖文】：

各培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到在營養(yǎng)瓊潤、無色、半透明；在 HE 瓊脂綠色；在 SS 瓊脂培養(yǎng)基上長出菌 J 培養(yǎng)基上長出菌落為較小、表落為中等大小、表面光滑、濕潤、潤、灰白色、無溶血。菌體觀察，標號 H1 的細菌純培）。

貴州大學 2018 屆碩士研究生學位論文 病原菌的鑒定M,DL2000 DNAMaker；1,Amplification products;2,Negative control圖 2 H1 16S rRNA 基因 PCR 擴增產(chǎn)物電泳圖Fig 2 Amplification products of H1 16S rRNAgene by PCR3.2.4.2 測序結果將膠回收產(chǎn)物進行測序，，使用 DNAstar 軟件獲得 H1 基因核苷酸，結果見圖3。由圖 3 可知，H1 16S rRNA 基因核苷酸序列長為 1447bp。
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S895

【參考文獻】

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本文編號：2698309