【摘要】：目的:準(zhǔn)確診斷貴州地區(qū)某蜂場(chǎng)發(fā)生的一起中蜂細(xì)菌性疾病,篩選對(duì)病原菌敏感的中西藥物,為該起蜂病的臨床有效防治提供理論依據(jù),并為中西藥聯(lián)合抑菌提供一定理論基礎(chǔ)。方法:(1)通過分離培養(yǎng)和致病性鑒定,獲得并確定引發(fā)這起蜂病的一株致病性病原菌;應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)、16S rRNA基因的通用引物進(jìn)行測(cè)序,最終確定該株致病菌種屬。(2)采用藥敏片檢測(cè)的方法,對(duì)分離得到的菌株的耐藥性進(jìn)行檢測(cè),選取對(duì)該株細(xì)菌有抑制作用的抗生素藥物和單味中草藥。(3)采用微量肉湯二倍稀釋法檢測(cè)該細(xì)菌分離株對(duì)于選取抗生素和單味中藥的最低抑菌濃度MIC值。(4)運(yùn)用棋盤法進(jìn)行中西藥聯(lián)合抑菌,計(jì)算出最低抑菌濃度指數(shù)FICI值,以確定抗生素和單味中藥聯(lián)合用藥后的聯(lián)合效果。(5)選取實(shí)驗(yàn)抗生素和單味中藥聯(lián)合用藥后效果最好的一組進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),驗(yàn)證其效果。結(jié)果:(1)在病料中分離檢測(cè)出6種細(xì)菌純培養(yǎng)物,通過致病性試驗(yàn),得到其中一株,標(biāo)號(hào)為H1細(xì)菌純培養(yǎng)物為致病菌,通過對(duì)該株細(xì)菌純培養(yǎng)物進(jìn)行檢測(cè)鑒定,這株細(xì)菌純培養(yǎng)物為蜂房哈夫尼菌。(2)通過中藥水煎液進(jìn)行的中藥藥敏實(shí)驗(yàn)中,五倍子與黃連的抑菌效果最為顯著,黃芩、山楂、艾葉和連翹也有較強(qiáng)的抑菌效果,苦參、板藍(lán)根、蒼術(shù)、金銀花、馬齒莧、蛇床子、梔子、青蒿、柴胡和穿心蓮的抑菌效果較弱,大青葉、魚腥草、薄荷和蒲公英沒有抑菌性。西藥藥敏試驗(yàn)中該細(xì)菌對(duì)青霉素、克林霉素、紅霉素、米諾環(huán)素、苯唑西林和頭孢氨芐耐藥;對(duì)于麥迪霉素、四環(huán)素和多西環(huán)素是中敏;對(duì)于慶大霉素、呋喃唑酮、復(fù)方新諾明、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢呋辛、頭孢他啶和頭孢哌酮等均為敏感。最后選取中藥為五倍子、黃連、黃芩、連翹、艾葉和山楂,西藥為硫酸慶大霉素和氨芐西林鈉進(jìn)行MIC值和FICI值的檢測(cè)。(3)中藥水煎液最低抑菌濃度:單獨(dú)使用五倍子、黃連、黃芩、艾葉、連翹和山楂水煎液對(duì)該致病菌的最低抑菌濃度為分別為3.9mg/ml、7.8mg/ml、15.6mg/ml、31.2mg/ml、31.2mg/ml和62.5mg/ml。西藥最低抑菌濃度:單獨(dú)使用硫酸慶大霉素和氨芐西林鈉的最低抑菌濃度分別為2.5μg/ml和20μg/ml。(4)在中西藥聯(lián)合抑菌試驗(yàn)中,效果較好,具有協(xié)同作用的組合為硫酸慶大霉素注射液和五倍子、黃連、黃芩的水煎液聯(lián)用;氨芐西林鈉和黃連、黃芩水煎液聯(lián)用。其中效果最好的組合為硫酸慶大霉素與黃連水煎液進(jìn)行聯(lián)用,其FICI的值為0.18,其他組的藥物組合效果僅為相加和無關(guān)。使用硫酸慶大霉素與黃連水煎液進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)該藥物組合對(duì)蜂房哈夫尼菌引起的中蜂傳染病有良好的療效。結(jié)論:(1)病原菌分離鑒定和致病試驗(yàn)結(jié)果表明,貴州某中蜂場(chǎng)發(fā)生的這起蜂病由蜂房哈夫尼菌感染引起;(2)這株蜂房哈夫尼菌僅對(duì)少部分抗菌藥物耐藥,說明該細(xì)菌在蜂群中的流行時(shí)間不長(zhǎng),該蜂場(chǎng)沒有濫用藥物造成多重耐藥;(3)體外抑菌試驗(yàn)表明,慶大霉素與黃連水煎液聯(lián)合用藥,對(duì)蜂房哈夫尼菌具有良好的抑菌效果。
【圖文】：

各培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到在營(yíng)養(yǎng)瓊潤(rùn)、無色、半透明；在 HE 瓊脂綠色；在 SS 瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌 J 培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落為較小、表落為中等大小、表面光滑、濕潤(rùn)、潤(rùn)、灰白色、無溶血。菌體觀察，標(biāo)號(hào) H1 的細(xì)菌純培）。

貴州大學(xué) 2018 屆碩士研究生學(xué)位論文 病原菌的鑒定M,DL2000 DNAMaker；1,Amplification products;2,Negative control圖 2 H1 16S rRNA 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig 2 Amplification products of H1 16S rRNAgene by PCR3.2.4.2 測(cè)序結(jié)果將膠回收產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，，使用 DNAstar 軟件獲得 H1 基因核苷酸，結(jié)果見圖3。由圖 3 可知，H1 16S rRNA 基因核苷酸序列長(zhǎng)為 1447bp。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S895

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2698309