【摘要】：根據(jù)《質(zhì)檢總局關(guān)于加強出入境生物物種資源檢驗檢疫工作的指導(dǎo)意見》(國質(zhì)檢動[2013]1號),國家質(zhì)檢總局將出入境生物物種資源檢驗檢疫作為重點工作,野生大豆(Glycine soja)作為我國珍稀種質(zhì)資源,大量隨出口大豆類產(chǎn)品外流,而在檢驗檢疫工作中,由于栽培大豆(Glycine max)與野生大豆之間親緣關(guān)系很近,用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定野生大豆種質(zhì)困難,本項目以遼寧出入境檢驗檢疫出口大豆類貨物取得樣品為主要研究材料,分別采用普通PCR技術(shù)、實時熒光定量PCR技術(shù)、DNA條形碼技術(shù)及環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)技術(shù)對野生大豆種質(zhì)的快速鑒定方法進行研究。(1)普通PCR方法:基于UNK2基因的cDNA序列,設(shè)計普通PCR引物對樣品基因組DNA進行擴增,構(gòu)建PCR反應(yīng)體系,該方法可以區(qū)分大豆和非大豆類其它豆類種質(zhì),但是否能區(qū)分大豆種質(zhì)和非豆類種質(zhì)還有待進一步研究。(2)實時熒光定量PCR方法:以UNK2基因為靶基因,設(shè)計特異性的引物探針,構(gòu)建實時熒光定量PCR反應(yīng)體系,該方法可以特異性地區(qū)分大豆種質(zhì)和其它豆類種質(zhì),但是否能區(qū)分大豆種質(zhì)和非豆類種質(zhì)還有待進一步研究。(3)DNA條形碼技術(shù):以ITS2、trnH-psbA、matK、rbcL為條碼基因,經(jīng)過PCR擴增測序、序列比對分析表明,matK的變異率最大,但其PCR擴增效率及測序成功率較低;ITS2及trnH-psbA多態(tài)性不佳。遺傳距離分析結(jié)果顯示,matK基因序列在大豆屬物種間差異比較大,遺傳距離遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他3種基因種間遺傳距離平均值,ITS2、psbA、rbcL依次遞減。系統(tǒng)進化分析結(jié)果顯示,大豆屬物種間利用上述4種基因不能夠有效區(qū)分,但從擴增的難易程度、片段的大小來看,rbcL是個有潛力的候選片段,可以嘗試和其他片段組合起來使用。(4)環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)技術(shù):以matK、ITS2基因為靶基因,針對野生大豆453設(shè)計特異性的3組引物組合,經(jīng)LAMP試驗檢測結(jié)果表明:引物組1的LAMP反應(yīng)擴增最早,可作為野生大豆453的最優(yōu)LAMP引物,并以引物組1建立最佳LAMP檢測體系。
【圖文】：

15 1 18個豆類種子基因組 DNAUNK2 基因普通 PCR擴增結(jié)果Fig 1 18 results of pcr amplification in UNK2Y1-Y5：野生大豆；M9：越南大豆；V1:綠豆；V2：紅小豆；V2000培種和 5 個野生大豆的基因組 DNA 均僅有一個擴4 個其它的豆類種子：綠豆（V1）；紅小豆（4）沒有擴增產(chǎn)物。結(jié)果初步表明該普通 PCR 方種質(zhì)。

16圖 2 基因 UNK2 普通 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果及與 cDNA序列比較結(jié)果uencing results of ordinary PCR products in UNK2 and comparison results with cDN：unk2mRNA為基因 UNK2 的 cDNA序列，unk2DNA為基因 UNK2 的 DNA序，該兩內(nèi)含子的長度分別為 119 bp 和 194 bp。大內(nèi)含子結(jié)束，含有典型的真核生物 GT-AG-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)，是最常見以 AT 起始，以 TG 結(jié)尾，含真核生物 AU-AG 類次要內(nèi)列在相關(guān)大型基因數(shù)據(jù)庫進行比對，未發(fā)現(xiàn)相同序列，且，表明該基因組序列是新序列。此為首次以該基因新序列法。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S565.1;S41

【參考文獻】

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本文編號：2686835