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基于表面增強(qiáng)拉曼光譜的香梨病原菌檢測(cè)方法的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-05-28 12:54
【摘要】:庫爾勒香梨是新疆特色林果產(chǎn)業(yè)的重要組成部分,是新疆出口創(chuàng)匯的主要產(chǎn)業(yè)。然而香梨采摘后貯藏期間易受病原菌的侵染,擴(kuò)展青霉和鏈格孢是導(dǎo)致腐爛的主要病原菌,造成果實(shí)品質(zhì)下降,腐爛率上升。因此庫爾勒香梨病原菌的檢測(cè)對(duì)香梨合理利用、增加產(chǎn)品附加值等具有較大應(yīng)用價(jià)值。表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)(Surface-enhanced Raman Spectroscopy,SERS)具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高等特點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)領(lǐng)域。本論文對(duì)香梨青霉病和黑斑病的單一菌落開展基于SERS技術(shù)進(jìn)行定性分析研究,主要研究?jī)?nèi)容如下:1、以PDA作為培養(yǎng)基,對(duì)青霉病和黑斑病病原菌進(jìn)行活化和提取,直至培養(yǎng)出單一菌落為止。培養(yǎng)成功的菌落配制成一定濃度的孢子懸浮液,利用檸檬酸三鈉還原法制備金、銀溶膠,對(duì)其性能進(jìn)行了紫外光譜表征,得到了分布較均勻的溶膠,并對(duì)其增強(qiáng)效果進(jìn)行分析,得到金、銀溶膠對(duì)香梨病原菌有增強(qiáng)效果。2、以金、銀溶膠為增強(qiáng)基底,對(duì)香梨青霉病和黑斑病病原菌水溶液普通拉曼光譜和SERS光譜對(duì)比分析。青霉病和黑斑病病原菌水溶液的普通拉曼本身不會(huì)產(chǎn)生信號(hào),以金溶膠作為增強(qiáng)基底時(shí)增強(qiáng)效果弱,以銀溶膠作為增強(qiáng)基底時(shí)兩種病原菌均出現(xiàn)了拉曼信號(hào)。青霉病病原菌水溶液在551cm~(-1)、702cm~(-1)、1016cm~(-1)、1151cm~(-1)、1484cm~(-1)、1590cm~(-1)處出現(xiàn)了拉曼峰,黑斑病病原菌在624cm~(-1)、693cm~(-1)、780cm~(-1)、936cm~(-1)、1210cm~(-1)、1237cm~(-1)、1315cm~(-1)、1386cm~(-1)、1466cm~(-1)、1597cm~(-1)、1701cm~(-1)處出現(xiàn)了拉曼峰,這些峰可作為判定香梨青霉病和黑斑病病原菌水溶液分子存在的依據(jù)。3、采集兩種病果普通拉曼光譜和SERS光譜,分析病果的拉曼光譜信號(hào)。感染青霉病和黑斑病病原菌的香梨果實(shí)本身檢測(cè)不到拉曼信號(hào)。以金溶膠為增強(qiáng)基底時(shí)兩種病果拉曼信號(hào)較弱,而以銀溶膠為增強(qiáng)基底時(shí)兩種病果均出現(xiàn)了明顯的拉曼峰。銀溶膠基底的病果拉曼峰分別與對(duì)應(yīng)水溶液拉曼峰基本相似。青霉病病果在586cm~(-1)、700cm~(-1)、934cm~(-1)、1315cm~(-1)、1572cm~(-1)處的拉曼峰最明顯,其中586cm~(-1)為C-O-C的彎曲振動(dòng),700cm~(-1)為較強(qiáng)的=C-H面外彎曲振動(dòng),934cm~(-1)為C-C的伸縮振動(dòng),1315cm~(-1)為C-N的伸縮振動(dòng),1572cm~(-1)為C=C的伸縮振動(dòng);黑斑病病果在785cm~(-1)、1009cm~(-1)、1392cm~(-1)、1468cm~(-1)處出現(xiàn)了拉曼峰,其中758cm~(-1)為O-H的面外彎曲振動(dòng),1009cm~(-1)為C-C的伸縮振動(dòng),1392cm~(-1)為C-N的伸縮振動(dòng),1468cm~(-1)為=C-H的面內(nèi)彎曲振動(dòng)。對(duì)比發(fā)現(xiàn),青霉病與黑斑病病果的拉曼峰并未重合,可作為兩種病果拉曼區(qū)分的依據(jù)。4、對(duì)感染病原菌后貯藏不同時(shí)間的香梨果實(shí)進(jìn)行色差分析。隨著感染時(shí)間延長(zhǎng),色差的L值呈下降趨勢(shì),而a和b呈上升趨勢(shì)。說明香梨在貯藏過程中果實(shí)色澤由綠色逐漸變黃色、變淡和變暗,病原菌梨比健康梨的變化速度更為迅速。
【學(xué)位授予單位】:塔里木大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:S436.612.1

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