【摘要】：天麻(Gastrodia elata Bl.)為蘭科腐生草本植物,具有治療頭暈頭痛,癲癇痙攣,手足抽搐等功效,是我國名貴的中藥材之一。但在其生長和栽培過程中常因受到病害的侵染而嚴(yán)重影響其產(chǎn)量和品質(zhì)。隨著農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展對傳統(tǒng)病害防治提出的新要求,微生物農(nóng)藥受到研究者廣泛關(guān)注,其具有高效低毒、環(huán)保及來源廣等優(yōu)點。病原微生物是導(dǎo)致天麻病害的重要原因,摸清天麻病原微生物的主要種類及其傳染作用的強弱,進而找出流行面廣的病原菌,是防治天麻病害待解決的首要問題。而尋找這些病原微生物的拮抗內(nèi)生菌是解決天麻病害的重要手段。因此,本研究首先,以染病的天麻塊莖為試驗材料,進行了病原菌的分離鑒定,并對其主要病原微生物的流行病學(xué)進行了比較,從而確定天麻病菌的主要種類及其流行面廣的菌株;其次,以健康天麻塊莖為試驗材料,進行了內(nèi)生菌的分離鑒定,進而確定天麻內(nèi)生菌的主要種類,獲得針對性強的天麻生物防治菌;再次,對內(nèi)生菌與病原菌相互作用進行評價,確定內(nèi)生菌抑菌作用的強弱,病原菌傳染作用的強弱;最后,通過回接試驗驗證內(nèi)生菌的抑菌效果。主要結(jié)果如下:1.天麻病原菌的分離鑒定及其流行病學(xué)研究:采集染病的天麻,對其塊莖進行表面消毒以去除附著菌,組織印記法進行培養(yǎng),菌絲頂端純化法及劃線培養(yǎng)法純化。在適宜培養(yǎng)基上共分離得到3株病原菌,經(jīng)菌落形態(tài)、顯微與染色結(jié)合分子生物學(xué)綜合鑒定,3株病原菌分別屬于天麻草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)JY.TM-2、天麻假單胞菌(Pseudomonas)JY.TM-1、天麻酵母菌(Candida vartiovaarae)JY.TM-3;對這3株病原菌進行了流行病學(xué)研究,選取遺傳距離較遠的豆科植物黃芪、草木犀為材料,證明天麻草酸青霉菌為流行面廣的病原微生物。2.天麻內(nèi)生菌的分離與鑒定:采用常規(guī)的表面消毒法去除健康天麻組織表面的附著菌,組織印記法進行培養(yǎng),菌絲頂端純化法及劃線培養(yǎng)法純化。分別在適宜培養(yǎng)基上共分離得到3株內(nèi)生菌,經(jīng)菌落形態(tài)、顯微與染色結(jié)合分子生物學(xué)綜合鑒定,3株內(nèi)生菌分別屬于天麻草螺菌(Herbaspirillum)JY.TM-4、天麻普城沙雷菌(Serratia plymuthica)JY.TM-5、天麻枝頂孢菌(Acremonium)JY.TM-6。菌株JY.TM-4與JY.TM-5遺傳距離較近。3.天麻內(nèi)生菌與病原菌相互作用的研究:采用濾紙片抑菌圈法測定天麻內(nèi)生菌的抑菌直徑,以探究天麻內(nèi)生菌與病原菌相互作用。結(jié)果表明,內(nèi)生菌對病原菌的作用為:與PDB對照組相比,天麻草螺菌、天麻普城沙雷菌及天麻枝頂孢菌對天麻草酸青霉菌、黃芪草酸青霉菌及草木犀草酸青霉菌均有顯著抑菌作用(P0.05),其中,天麻草螺菌抑菌效果最好(P0.05),抑菌率分別為87.64%,85.98%,75.73%;天麻普城沙雷菌及天麻枝頂孢菌對天麻酵母菌有顯著抑菌作用,其中,天麻普城沙雷菌抑菌效果最好(P0.05),抑菌率為86.94%;天麻枝頂孢菌對天麻假單胞菌有明顯抑菌作用(P0.05),抑菌率為45.77%。病原菌對內(nèi)生菌的作用為:與PDB對照組相比,天麻假單胞菌對3種內(nèi)生菌的侵染程度為天麻普城沙雷菌、天麻草螺菌天麻枝頂孢菌;天麻酵母菌對3種內(nèi)生菌的侵染程度為:天麻草螺菌天麻枝頂孢菌天麻普城沙雷菌;天麻草酸青霉菌、黃芪草酸青霉菌及草木犀草酸青霉菌對3種內(nèi)生菌的侵染程度均為:天麻枝頂孢菌天麻普城沙雷菌天麻草螺菌。4.天麻內(nèi)生菌與病原菌相互作用的回接試驗:采集健康天麻,在無菌條件下分別回接天麻內(nèi)生菌及3種植物源病原菌于表面徹底消毒的天麻塊莖上,觀察其發(fā)病情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),內(nèi)生菌對病原菌的回接驗證作用為:與PDB組對照相比天麻草螺菌對天麻草酸青霉菌、黃芪草酸青霉菌及草木犀草酸青霉菌均有抑菌作用(P0.05),抑菌率分別為83.33%,50.00%,66.67%;天麻普城沙雷菌對天麻酵母菌、天麻草酸青霉菌、黃芪草酸青霉菌及草木犀草酸青霉菌均有抑菌作用,其中對黃芪及草木犀草酸青霉菌抑菌效果最好(P0.05);天麻枝頂孢菌對天麻酵母菌、天麻假單胞菌、天麻草酸青霉菌、黃芪草酸青霉菌及草木犀草酸青霉菌均有抑菌作用,抑菌率分別為16.67%,66.67%,33.33%,50.00%,33.33%,對天麻假單胞菌的抑菌效果最好(P0.05)。病原菌對內(nèi)生菌的回接驗證結(jié)果為:5種病原菌侵染天麻草螺菌的強弱程度為:天麻假單胞菌天麻酵母菌黃芪草酸青霉菌草木犀草酸青霉菌天麻草酸青霉菌;侵染天麻普城沙雷菌的強弱程度為:天麻草酸青霉菌天麻假單胞菌天麻酵母菌黃芪草酸青霉菌、草木犀草酸青霉菌;侵染天麻枝頂孢菌的強弱程度為:天麻假單胞菌天麻草酸青霉菌、草木犀草酸青霉菌黃芪草酸青霉菌天麻酵母菌。綜上,本試驗從天麻中分離鑒定出3株病原菌,3株內(nèi)生菌。其中,病原菌草酸青霉菌為流行面廣的病原菌;內(nèi)生菌草螺菌的抑菌作用最具廣譜性;并闡明了分離的內(nèi)生菌與病原菌間的相互作用規(guī)律。
【圖文】：

圖 1-1 天麻病原菌初步分離形態(tài)Fig. 1-1 Preliminary morphology of G. elata, A. membranaceus and M. officinalis pathoge(A: JY.TM-1, B: JY.TM-2, C: JY.TM-3)圖 1-2 天麻病原菌菌落形態(tài)鑒定Fig. 1-2 Morphology identificationof G. elata, A. membranaceus and M. officinalis pathog(A: JY.TM-1, B: JY.TM-2, C: JY.TM-3)AB

圖 1-1 天麻病原菌初步分離形態(tài)Fig. 1-1 Preliminary morphology of G. elata, A. membranaceus and M. officinalis pathogens(A: JY.TM-1, B: JY.TM-2, C: JY.TM-3)
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S435.672

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本文編號：2676666