【摘要】：稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病被稱為水稻上的“癌癥”,是水稻生產(chǎn)中一種毀滅性的真菌病害。目前,防治稻瘟病主要以選育抗病品種為主,但自然條件下,由于該病菌致病性易變,致使新選育的抗病品種在短期內(nèi)失效。因此,稻瘟病的防治仍是水稻生產(chǎn)上急需解決的重大難題,而了解該病原菌的生長發(fā)育及致病機理是防治該病害的重要前提。本研究主要對II型肌球蛋白Momyo2在稻瘟病菌生長發(fā)育和致病過程中的功能進行了解析,結果如下:通過篩選稻瘟病菌ATMT突變體庫,從中獲得致病性顯著下降的菌株A115,Southern雜交驗證HPH為單拷貝插入。用Tail-PCR鑒定獲得A115菌株側翼序列,確定A115菌株致病性下降是MGG_03060(GenBank XP_003720621)基因被破壞所致。為進一步明確MGG_03060的功能,對其進行了系統(tǒng)的研究分析。其中,結構域預測表明,MGG_03060編碼的蛋白由位于N端的SH3、MMD(Myosin Motor Domain)、IQ及位于C端的CC(Coiled coil)組成,這與大部分真菌中的Myosin2蛋白類似,因此將該基因命名為Momyo2。研究表明,Momyo2與隔膜發(fā)育相伴而生,定位于隔膜上。通過同源重組方法獲得2個敲除突變體(Momyo2-1和Momyo2-7)。研究發(fā)現(xiàn),該基因在初侵染階段大量表達,營養(yǎng)生長觀察發(fā)現(xiàn),Momyo2突變體生長遲緩,菌絲分支增加,不能正常形成隔膜;突變體產(chǎn)孢量降低,孢子形態(tài)異常;細胞壁不完整;糖原轉移受阻;此外,突變體對過氧化氫耐受性降低,胞外漆酶和過氧化物酶活性顯著下降,清除寄主來源的ROS的能力降低;突變體顯著降低對水稻感病品種Co39的致病性。綜上所述,Momyo2是稻瘟病菌生長發(fā)育及致病過程中的重要調控基因。
【圖文】：

omyo2 在稻瘟病菌中各個階段表達量分析 Phase specific expression of Momyo2 in M. oryzae；B.Momyo2 敲除載體的構建策略tion mutant construction of Momyo2 gene；C. PCR 驗證 Momyo2 缺失突變體 PCR validation of Momyo2 mutants；D.E. Southern 證 Momyo2 突變體 Southern blot assay of Momyo2 mutants；F. RT-PCR 驗證 Semiquantitative RT-PCR validation圖 2 敲除載體構建及突變體驗證

FW 染色 Momyo2 突變體菌絲隔膜 Septa of Momyo2 mutants were stained with CFW；B.菌絲隔膜間距 Measurement of average le-apical cell of vegetative hyphae；C.投射電鏡觀察 Momyo2 突變體隔膜 Septa ultrastructure in the hyphae of Momyo2 mutants圖 4 Momyo2 突變體隔膜形成Fig. 4 Septa development in Momyo2 mutants
【學位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S435.111.41

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本文編號：2674891