【摘要】：蓮藕(Nelumbo nucifera Gaertn.)是睡蓮科蓮屬多年生宿根水生草本植物,是我國(guó)重要的特色水生蔬菜。蓮藕中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),受到國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者的喜愛。在我國(guó)蓮藕主產(chǎn)區(qū),發(fā)生地下莖瘦小僵硬、表面出現(xiàn)深入皮層的黑褐色點(diǎn)斑和條斑的“僵藕”問題,前期研究表明,“僵藕”極有可能是由病毒侵染引起的。目前,已報(bào)道的在蓮藕上發(fā)生的病毒主要有:蓮藕潛隱病毒(暫定名)(Lotus latent virus,LLV),黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、蓮藕條斑病毒(Lotus streak virus),芋花葉病毒(Dasheen mosaic virus,DsMV)和蘋果莖溝病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)。本實(shí)驗(yàn)室前期在對(duì)上述病毒的初步研究中發(fā)現(xiàn)LLV的發(fā)生最普遍,分布最廣泛,但該病毒的穩(wěn)定的檢測(cè)技術(shù)尚未建立。為此,本論文研究了基于實(shí)時(shí)熒光定量和等溫核酸擴(kuò)增的該病毒的檢測(cè)技術(shù)體系,并利用該檢測(cè)技術(shù)研究了 LLV在蓮藕中的分布。主要結(jié)果如下:1、建立了 RT-qPCR、LAMP和RPA 3種LLV檢測(cè)體系,其中,RT-qPCR檢測(cè)體系靈敏度最高,最低檢測(cè)限度為7×10~1拷貝.μl~(-1),是RT-PCR的100倍,適用于脫毒蓮藕種苗的檢測(cè)鑒定;LAMP檢測(cè)體系最低檢測(cè)限度為7×10~3拷貝·μl~(-1),與RT-PCR一致,且具有可視化特點(diǎn),適用于田間診斷;RPA檢測(cè)體系反應(yīng)時(shí)間短,速度快,最低檢測(cè)限度為7x10~3拷貝·μl~(-1),可作為大量蓮藕樣品檢測(cè)時(shí)的有效手段。2、利用靈敏度最高的RT-qPCR檢測(cè)技術(shù),分別對(duì)“僵藕”樣品不同部位進(jìn)行LLV定量檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),LLV在“僵藕”頂芽后第一節(jié)地下莖中濃度最高,并且逐節(jié)遞減。對(duì)“僵藕”做種后新結(jié)蓮藕的地下莖的表皮層、氣孔周圍基本組織、維管束組織以及中央薄壁細(xì)胞的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在維管束和氣孔周圍基本組織中LLV的濃度顯著高于表皮層及中央薄壁細(xì)胞。
【圖文】：

７５０邋＇逡逑圖２－２蓮藕潛隱病毒ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)結(jié)果逡逑Ｍ：分子量標(biāo)記；Ｐ：陽性對(duì)照；Ｎ：陰性對(duì)照逡逑１－８：頂芽、莖１、節(jié)１、莖２、節(jié)２、莖３、節(jié)３、莖４逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＬＬＶ邋ｂｙ邋ＲＴ－ＰＣＲ逡逑Ｍ：邋Ｍａｒｋｅｒ；邋Ｐ：邋Ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ；邋Ｎ：邋Ｎｅｇａｔｉｖｅ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑１－８：邋ａｐｉｃａｌ邋ｂｕｄ，邋ｓｔｅｍ邋１，邋ｎｏｄｅ邋１，邋ｓｔｅｍ邋２，邋ｎｏｄｅ邋２，邋ｓｔｅｍ邋３，邋ｎｏｄｅ邋３，邋ｓｔｅｍ邋４逡逑表２－５蓮藕潛隱病毒序列比對(duì)結(jié)果逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－５邋Ｔｈｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＬＬＶ邋ｓｅｑｕｅｎｃｅ邋ａｌｉｇｎｍｅｎｔ逡逑分離物名稱邐序列覆蓋率Ｅｉ；邋相似度逡逑Ｉｓｏｌａｔｅ邋ｎａｍｅ邐Ａｃｃｅｓｓ

揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文。逡逑３邐５邐７逡逑１逡逑２邐４邐６邐８逡逑圖２－１蓮藕取樣部位示意圖逡逑１－８：頂芽、莖１、節(jié)１、莖２、節(jié)２、莖３、節(jié)３、莖４逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｌｏｔｕｓ邋ｒｏｏｔ邋ｓａｍｐｌｉｎｇ邋ｓｉｔｅ逡逑１－８：邋ａｐｉｃａｌ邋ｂｕｄ，邋ｓｔｅｍ邋１，邋ｎｏｄｅ邋１，，邋ｓｔｅｍ邋２，邋ｎｏｄｅ邋２，邋ｓｔｅｍ邋３，邋ｎｏｄｅ邋３，邋ｓｔｅｍ邋４逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S436.45

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本文編號(hào)：2672236