發(fā)布時間：2020-05-18 07:32

【摘要】：苦瓜枯萎病是一種為害苦瓜的土傳病害,生產(chǎn)上主要通過施用化學農(nóng)藥防治該病害,但化學防治存在農(nóng)藥殘留、抗藥性及環(huán)境污染等問題。目前市場上銷售的對西瓜、香蕉和甜瓜等枯萎病具有良好防效的農(nóng)藥及微生物制劑對苦瓜枯萎病的防治效果不是很理想,因此,研究一種安全有效的防治措施十分必要。本研究主要分為三方面:(1)以苦瓜枯萎病高發(fā)地土壤為模型,借助熒光定量PCR技術(shù)和Illumina Miseq高通量測序平臺,以16S rDNA、ITS基因為標靶,定位研究施用化學熏蒸劑威百畝處理前后不同深度土壤中的枯萎病菌和土壤微生物數(shù)量、多樣性、群落結(jié)構(gòu)及土壤酶和pH值的垂直分布變化。(2)通過盆栽試驗篩選出綠針假單胞菌(Pseudomonas chlororaphis)G5菌株與殺菌劑惡霉靈(Hymexazol,Hym)復配施用最優(yōu)組合,測定該組合對苦瓜葉片防御酶活性的影響。(3)研究在威百畝熏蒸區(qū)域施用生防菌G5與惡霉靈最優(yōu)組合對苦瓜枯萎病的防治效果及土壤酶活性的影響。主要研究結(jié)果如下。在苦瓜枯萎病高發(fā)地,5-40 cm土層每克土壤中鐮孢菌分生孢子的數(shù)量在10~3-10~4 cfu,且隨著土壤深度的增加逐漸降低;威百畝熏蒸后5-30 cm土層鐮孢菌的數(shù)量均下降,而對40 cm土層鐮孢菌數(shù)量無顯著影響。熏蒸處理后5-30 cm土層細菌16S rDNA基因拷貝數(shù)顯著上升,在5 cm達到最大值;5-30 cm真菌ITS基因拷貝數(shù)較未熏蒸前顯著降低,且各土層真菌基因拷貝數(shù)無顯著差異,但都明顯高于40 cm土層。Beta多樣性分析結(jié)果顯示,威百畝熏蒸后,5 cm、10 cm土層真菌、細菌群落結(jié)構(gòu)明顯不同于熏蒸處理前,20 cm以下土層真菌、細菌群落結(jié)構(gòu)變化不明顯;5-40 cm土層pH升高;5-30 cm土層土壤脲酶(S-UE)、蔗糖酶(S-SC)、過氧化氫酶(S-CAT)、酸性磷酸酶(S-CAP)的活性總體呈現(xiàn)顯著下降趨勢,而對40 cm土層土壤酶活性無顯著影響。研究發(fā)現(xiàn)G5菌株能夠在苦瓜體內(nèi)及根際土中定殖。平板對峙試驗表明,生防菌G5能夠顯著抑制苦瓜枯萎病菌菌絲的生長。不同稀釋倍數(shù)的惡霉靈對苦瓜枯萎病菌菌絲生長及分生孢子萌發(fā)均有抑制作用,隨著稀釋倍數(shù)增大,抑制效果下降。G5菌株與農(nóng)藥惡霉靈室內(nèi)相容性試驗結(jié)果顯示,標準使用濃度(稀釋4000倍)下,惡霉靈對生防菌G5不僅沒有抑制作用,反而能夠促進土壤中G5的繁殖。G5菌株與惡霉靈復配盆栽最適濃度篩選試驗結(jié)果顯示,B菌劑(1×10~9 cfu/mL G5菌懸液)與不同濃度惡霉靈的組合對苦瓜枯萎病的防治效果高于A菌劑(1×10~8 cfu/mL G5菌懸液)與惡霉靈各濃度的組合。B+0.75Hym(1×10~9 cfu/mL G5菌懸液+惡霉靈標準使用濃度的75%)對苦瓜枯萎病的防病效果為81.60%高于其它各項處理,與對照相比該組合能夠顯著提高苦瓜幼苗莖粗、株高、葉面積、干重、鮮重。在枯萎病菌的脅迫下,B、Hym及B+0.75Hym處理均可誘導苦瓜葉片苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)活性的升高。兩年的田間防病試驗結(jié)果顯示,B+0.75Hym對苦瓜枯萎病的防治效果高于單一施用B或Hym。表明盆栽試驗篩選出的菌藥組合B+0.75Hym,不僅能夠更好的防治苦瓜枯萎病,而且降低了惡霉靈的使用量。施用威百畝熏蒸處理后整個苦瓜生長周期內(nèi)土壤脲酶、蔗糖酶、過氧化氫酶的活性均高于未熏蒸處理,45-60 d未熏蒸處理三種土壤酶的活性均下降,而熏蒸處理三種土壤酶仍保持較高的活性。60 d時威百畝熏蒸處理對苦瓜枯萎病的防治效果達到73.86%,威百畝熏蒸后施加B+0.75Hym組合對苦瓜枯萎病的防治效果為92.15%,有效地控制了苦瓜枯萎病的發(fā)生。綜上所述,在苦瓜枯萎病發(fā)病區(qū)施用威百畝熏蒸,并配合施用B+0.75Hym組合能夠有效的降低苦瓜枯萎病的發(fā)病率,具有一定的生產(chǎn)實用價值。
【圖文】：

圖 1 質(zhì)粒 pDSK-GFPuv 的結(jié)構(gòu)圖Fig. 1 Structural chart of plasmid pDSK-GFPuv(Wang et al.，2007 41 號，購自福建農(nóng)科農(nóng)業(yè)良種開發(fā)有限公司。霉靈可濕性粉劑（hymexazol）簡稱 Hym，濰百畝水劑（metham-sodium）簡稱 MS，江蘇利培用土白胨 10 g，酵母浸膏粉 5 g，氯化鈉 5 g，，加去n。蛋白胨 10 g，酵母浸膏粉 5 g，氯化鈉 5 g，瓊

均勻撒施在土壤中，施藥后立即用塑料薄膜密封。熏蒸25天后，揭開薄膜，釋放剩余異硫氰酸甲酯氣體。圖2 威百畝熏蒸示意圖Fig. 2 Metham-sodium fumigation diagram注：A為俯視圖，B為剖面圖。Note: A is the top view, B is the profile.
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S436.429;S476

【參考文獻】

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本文編號：2669381