【摘要】：蘋果樹腐爛病作為一種枝干性真菌病害,極大地阻礙著我國蘋果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,該病害發(fā)生面積廣、為害程度重、防治困難,被稱之為蘋果樹“癌癥”。目前,蘋果樹腐爛病的研究主要集中在細(xì)胞壁降解酶、效應(yīng)蛋白和次級(jí)代謝產(chǎn)物等方面。蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)全基因組測(cè)序結(jié)果顯示,基因組里含有大量的NRPS基因,且有13個(gè)NRPS基因在病菌侵染枝條初期呈現(xiàn)明顯的上調(diào)表達(dá),這表明,NRPS基因在致病過程中扮演著重要角色。本研究前期通過敲除5個(gè)NRPS基因,隨后通過致病力篩選,著重對(duì)NRPS基因Vm G10在生長發(fā)育和致病機(jī)理方面進(jìn)行初步探究。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.運(yùn)用q RT-PCR分析Vm G10在腐爛菌侵染枝條不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量,結(jié)果顯示,同在野生型菌株03-8中表達(dá)量相比,Vm G10在腐爛菌侵染枝條6 h時(shí)上調(diào)表達(dá)7.12倍;隨后通過PEG介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化及引物檢測(cè)得到敲除突變體2個(gè)、過表達(dá)突變體6個(gè),通過一步克隆及最終引物檢測(cè)得到回補(bǔ)突變體4個(gè);2.觀察PDA上菌絲生長速率及生長形態(tài),發(fā)現(xiàn)VmG10的敲除影響菌絲生長形態(tài),但不影響菌絲生長速率,敲除突變體ΔVm G10-19的菌絲邊緣同03-8相比會(huì)產(chǎn)生更多的分支;產(chǎn)孢實(shí)驗(yàn)顯示,同03-8相比,ΔVm G10-19產(chǎn)孢數(shù)下降約50%;致病力分析發(fā)現(xiàn),ΔVm G10-19在葉片上致病力同03-8相比下降72.17%,在枝條上幾乎不致病。過表達(dá)突變體致病力有不等程度的增強(qiáng),其中Q15增加21.73%,Q16增加12.50%;黑色素表型觀察及與黑色素轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)6個(gè)基因定量結(jié)果顯示,ΔVm G10-19中黑色素含量高于03-8,且ΔVm G10-19中與黑色素轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)6個(gè)基因在菌絲生長2、3、4、5 d中的表達(dá)量均高于在03-8中的表達(dá)量;3.在0.5 M KCl,18 m M H2O2,200 mg/L CR,0.01%SDS四種非生物脅迫條件下,ΔVm G10-19比03-8受到的抑制程度更強(qiáng),尤其是在18 m MH2O2條件下,抑制率較03-8提高44.44%;將03-8和ΔVm G10-19與蘋果樹上其他4種腐生菌做皿內(nèi)對(duì)峙實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),ΔVm G10-19較03-8拮抗能力更弱,尤其在與蘋果輪紋和炭疽對(duì)峙時(shí);次級(jí)代謝產(chǎn)物分離結(jié)果顯示,ΔVm G10-19發(fā)酵液處理過的煙草葉片產(chǎn)生的壞死斑較03-8發(fā)酵液處理過的煙草葉片產(chǎn)生的壞死斑面積減小32.8%,將發(fā)酵液稀釋100倍再處理,結(jié)果基本一致;游離氨基酸含量測(cè)定結(jié)果顯示,03-8發(fā)酵液中的天冬氨酸含量是ΔVm G10-19發(fā)酵液中的4倍,谷氨酸和精氨酸是其2倍;液相質(zhì)譜鑒定發(fā)現(xiàn),Vm G10的敲除的確影響了腐爛菌某種或某些次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成,但不一定是短桿菌肽;發(fā)酵液處理萵苣種子,結(jié)果顯示,小于1 KD的發(fā)酵液分離段處理過的萵苣種子,二者發(fā)芽率有明顯差別,ΔVm G10-19發(fā)酵液小于1KD的分離段處理過的萵苣種子發(fā)芽率達(dá)63.3%,03-8發(fā)酵液小于1KD的分離段處理過的萵苣種子發(fā)芽率為23.7%,ddH2O處理的對(duì)照發(fā)芽率為86.7%。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S436.611.11

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10 ;蘋果樹腐爛病疤的橋接技術(shù)與桃小食心蟲的測(cè)報(bào)及防治經(jīng)驗(yàn)[A];河北省果樹學(xué)會(huì)1978年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文選編[C];1978年

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4 臧睿;中國蘋果樹腐爛病菌的種群組成、分子檢測(cè)及其ISSR遺傳分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2669100