【摘要】：囊狀幼蟲病毒(SBV)廣泛存在于西方蜜蜂(Apis mellifera)中,而在東方蜜蜂(Apis cerana)中獨特演化出一 SBV毒株,中蜂囊狀幼蟲病(中囊病)病毒(Apis cerana SBV,AcSBV),導致幼蟲在化蛹前死亡,常使蜂群群勢下降蜂群崩潰,是中蜂生產(chǎn)中最嚴重的病害,幾乎所有東方蜜蜂的自然棲息地都有AcSBV存在。臺灣地區(qū)中蜂在2015年之前沒有相關研究報道,當?shù)胤滢r(nóng)也沒有被囊狀幼蟲病毒影響過,直到2016年臺灣中部飼養(yǎng)中蜂的蜂農(nóng)發(fā)現(xiàn)了 SBV類似癥狀。我們用RT-PCR方法檢測了該地區(qū)患病蜂群蜜蜂幼蟲的樣本,并對臺灣北部地區(qū)沒有發(fā)病癥狀的蜂場進行了調(diào)查。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示,從中國臺灣中部蜂群中分離的AcSBV應為外源引入;所有分離得到的AcSBV的基因序列與在中國大陸、越南和韓國的AcSBV基因組序列具有高度的相似性,但與中國臺灣鑒定出的SBV序列有明顯的區(qū)別�；疾》淙褐械目傮w流行性較低,在無癥狀的蜂群中未發(fā)現(xiàn)潛伏感染,AcSBV可能尚未達到其最高的流行病潛力。囊狀幼蟲病毒在蜜蜂中能造成致死疾病,它屬于軟腐病病毒科,是一種單鏈正股RNA病毒,僅編碼一個開放閱讀框(Open reading frame,ORF),翻譯成一個多聚蛋白后在宿主細胞中再進行切割成單一有功能的蛋白。目前沒有反向遺傳學研究數(shù)據(jù),很難在不影響單個ORF的前提下,創(chuàng)建具有人為引入突變或報告基因的感染性克隆。在本研究中,我們構建了一種模擬dicistrovirus基因組結(jié)構的雙順反子中囊病病毒克隆,兩個ORFs由基因間區(qū)IRES(IGR-IRES)劃分。黑王臺病毒的基因間區(qū)IRES在克隆后整合到中囊病病毒基因組3'-端非編碼區(qū)之后,后再接上EGFP基因與polyA區(qū)。轉(zhuǎn)錄后,將病毒RNA注射到蜜蜂幼蟲體內(nèi),產(chǎn)生帶蛋白殼的克隆病毒,并作為經(jīng)口接種源兩代以上。接種后的幼蟲表現(xiàn)出典型的中囊病病狀和EGFP熒光,證明了組建的雙順反子中囊病病毒克隆是穩(wěn)定的,功能與野生型中囊病相同。此外,研究結(jié)果顯示,表明SBV的3'端非編碼區(qū)不影響IGR-IRES的功能以及其后人為引入序列的復制。我們的SBV克隆含有易于追蹤的EGFP熒光表達可以有助于更好地理解中囊病病毒的反向遺傳學、致病機理以及傳染機制。中囊病病毒有典型軟腐病毒基因組結(jié)構,與其他軟腐病毒有高度相似的基因組序列,相同的方法能適用于其他蜜蜂或昆蟲的軟腐病毒可隆。
【圖文】：

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【學位授予單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S895.133

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1 熊翠玲;林躍文;梁勤;鄭燕珍;徐細建;張f棠，

本文編號：2659189