本文關(guān)鍵詞：人羊膜間充質(zhì)干細胞對急性移植物抗宿主病影響的研究

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【摘要】：目的：間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一種成體干細胞,具有造血支持、免疫調(diào)節(jié)和自我更新的能力,并有多向分化潛能。異基因造血干細胞移植(allo-hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)是血液系統(tǒng)疾病最有效的治療手段之一,而在移植過程中及移植后,難免會遇到諸如造血微環(huán)境的破壞、干細胞歸巢及移植物抗宿主病(graft versus host diease, GVHD)等問題,均影響移植成敗。其中,aGVHD是allo-HSCT后普遍存在的棘手問題,aGVHD的成功防治對提高HSCT成功率具有重要意義。很多研究已經(jīng)證實,MSC能夠通過抑制樹突狀細胞的誘導(dǎo)生成及成熟、降低T細胞增殖及減少細胞毒T細胞的形成等多種機制來發(fā)揮其免疫調(diào)控作用,通過輸注骨髓來源的MSC可安全有效的治療aGVHD,因此,MSC是預(yù)防和治療aGVHD的一種細胞治療途徑。體外研究發(fā)現(xiàn),人羊膜間充質(zhì)干細胞(amniotic mesenchymal stem cells, AMSC)具有和骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BMMSC)相似的免疫表型、多向分化潛能及造血支持作用,有望成為一種更理想的MSC臨床及科研新來源。我們前期的體外研究已經(jīng)證實,AMSC具有低免疫原性,能夠抑制人外周血淋巴細胞的轉(zhuǎn)化,并且此抑制作用具有劑量依賴性。本課題第一部分旨在研究應(yīng)用人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)于NPG小鼠以構(gòu)建異種移植aGVHD模型。第二部分在第一部分成功構(gòu)建小鼠異種移植aGVHD模型的基礎(chǔ)之上,進一步研究人AMSC對異種移植aGVHD的相關(guān)影響。以期為AMSC的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ),同時希望為臨床提高MSC的移植療效提供實驗依據(jù)。方法：第一部分通過尾靜脈將經(jīng)新鮮及庫存來源的健康人外周血分離出的PBMC輸注入經(jīng)亞致死劑量照射后的NPG小鼠體內(nèi),建立NPG小鼠的異種移植物抗宿主病(X-GVHD)模型。觀察輸注后小鼠的日�；顒印Ⅲw重、血象變化,應(yīng)用蘇木素-伊紅(HE)染色技術(shù)給小鼠各臟器做相關(guān)病理學(xué)檢查,比較輸注兩種來源的人PBMC所建立的小鼠異種移植模型的差異性。第二部分采用組織塊法從人羊膜組織中分離并常規(guī)培養(yǎng)AMSC,在第一部分成功建立X-GVHD模型的基礎(chǔ)上給小鼠靜脈注射AMSC,注射后同樣觀察小鼠的日�；顒�、體重、血象變化,應(yīng)用蘇木素-伊紅(H＆E)染色技術(shù)給小鼠各臟器做相關(guān)病理學(xué)檢查,并采用流式細胞術(shù)和免疫熒光技術(shù),檢測人T細胞在小鼠外周血、組織及器官中的浸潤情況,通過比較各指標間的差異性從而確定AMSC對aGVHD的影響及作用。結(jié)果：1、相對于庫庫存血來源的人PBMC,應(yīng)用新鮮血來源的人PBMC尾靜脈注射于NPG小鼠更容易成功建立異種移植aGVHD模型,其建模效果更顯著;2、AMSC靜脈輸注于小鼠異種移植模型能減輕aGVHD癥狀(倦怠、弓背、聳毛、體重減輕等),改善靶器官(肺、肝臟、脾臟、腸)的病理損傷。AMSC共輸注明顯降低了小鼠體內(nèi)人源T淋巴細胞(CD3+、CD45+)比例,提高了CD4+/CD8+T細胞比值。結(jié)論：應(yīng)用新鮮血來源的人PBMC尾靜脈注射于NPG小鼠更容易成功爹立異種移植aGVHD模型,且其建模效果更為顯著;靜脈注射人AMSC于小鼠異種移植aGVHD模型對急性移植物抗宿主病有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：羊膜間充質(zhì)干細胞 人外周血單個核細胞 NPG小鼠 急性移植物抗宿主病 T淋巴細胞
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R457.7
【目錄】：

• 英文縮寫詞一覽表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分 人PBMC對構(gòu)建小鼠異種移植aGVHD模型的研究10-23
• 導(dǎo)言10-11
• 實驗材料11-14
• 實驗方法14-17
• 實驗結(jié)果17-20
• 討論20-23
• 第二部分 人羊膜間充質(zhì)干細胞對急性移植物抗宿主病影響的研究23-41
• 導(dǎo)言23-25
• 實驗材料25-28
• 實驗方法28-31
• 實驗結(jié)果31-38
• 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-46
• 綜述46-55
• 參考文獻51-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況55-56
• 致謝56-57

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本文編號：875991