本文關(guān)鍵詞：99mTc-GSA對(duì)肝臟缺血再灌注損傷評(píng)估的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：引言我國是肝炎尤其是乙肝高發(fā)國家,肝炎后肝硬化肝癌的發(fā)生率較高,肝癌的手術(shù)切除治療具有根治意義。在肝臟相關(guān)手術(shù)中,通常需要不同程度地阻斷肝血流,這就可能會(huì)發(fā)生肝臟缺血再灌注損傷(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)。HIRI的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,目前研究認(rèn)為HIRI由多種因素共同作用導(dǎo)致大量的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞功能受損甚至死亡,是手術(shù)后肝功能衰竭的重要原因之一,故肝臟缺血再灌注后肝功能的準(zhǔn)確預(yù)估對(duì)臨床醫(yī)生評(píng)估患者預(yù)后,制定治療方案,提高患者術(shù)后恢復(fù)及生存率有一定臨床價(jià)值。肝功能的評(píng)估方法很多,其中基于肝臟去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)顯像的肝功能評(píng)估方法可以動(dòng)態(tài)觀察肝細(xì)胞的攝取、代謝、排泄等功能過程,并可以計(jì)算功能肝細(xì)胞量,被認(rèn)為是目前正確評(píng)估肝功能很有前途的方法。目前較受關(guān)注的去唾液酸糖蛋白受體顯像劑是99m Tc-GSA,其可與肝細(xì)胞膜表面的ASGPR特異性結(jié)合而進(jìn)行肝臟顯像,ASGPR的數(shù)量和功能與肝細(xì)胞的功能呈正相關(guān),通過檢測(cè)肝細(xì)胞ASGPR的數(shù)量和活性,可評(píng)估肝的功能狀況。肝臟發(fā)生缺血再灌注損傷時(shí),肝細(xì)胞發(fā)生不同程度的凋亡和壞死,肝細(xì)胞膜表面的ASGPR的數(shù)量和活性不同程度地下降,通過ASGPR顯像可了解肝功能狀況,評(píng)估HIRI造成的損傷,以便及時(shí)采取治療措施及評(píng)估預(yù)后。此外,99m Tc-GSA肝臟SPECT/CT平面加斷層顯像還可評(píng)價(jià)區(qū)域肝功能,方法為在每個(gè)SPECT橫斷面上劃線模擬肝切除,計(jì)算剩余或區(qū)域肝功能占整體肝功能的比例,該指標(biāo)可評(píng)估肝臟儲(chǔ)備功能,預(yù)測(cè)手術(shù)風(fēng)險(xiǎn),對(duì)臨床工作幫助很大,但計(jì)算操作較為復(fù)雜,為了適應(yīng)臨床需要,北京協(xié)和醫(yī)院建立了計(jì)算機(jī)程序,得到含有肝臟管道解剖結(jié)構(gòu)的三維立體功能影像,可用此程序模擬手術(shù)切除,計(jì)算出各部分肝臟的功能,使肝功能及區(qū)域肝功能的評(píng)估方法更具操作性,目前該程序正處于研究完善階段。本研究通過構(gòu)建不同程度的兔肝臟缺血再灌注損傷模型,獲取肝臟不同損傷程度下的肝酶和病理結(jié)果,而后進(jìn)行99m Tc-GSA兔肝顯像實(shí)驗(yàn),獲取顯像結(jié)果,分析顯像結(jié)果與肝酶和病理結(jié)果的相關(guān)性,探討99m Tc-GSA對(duì)肝臟缺血再灌注損傷評(píng)估的可靠性,為臨床應(yīng)用99m Tc-GSA預(yù)測(cè)肝臟缺血再灌注損傷以制定合理治療方案包括手術(shù)措施提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分兔肝缺血再灌注損傷模型的建立目的采用新西蘭大白兔制作肝臟不同程度缺血再灌注損傷模型,探討肝不同缺血時(shí)間再灌注后的血清肝酶生化檢驗(yàn)指標(biāo)和組織病理的變化情況,以及術(shù)后第3d、第7d上述指標(biāo)的變化情況,為肝缺血再灌注后99m Tc-GSA肝顯像評(píng)估肝功能提供病理學(xué)基礎(chǔ)。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組將體重沒有明顯差異、雌雄不拘的健康成年新西蘭大白兔隨機(jī)分為A、B、C、D四組,每組8只,設(shè)置三個(gè)缺血時(shí)間段:30min、45min、60min,其中A組設(shè)為假手術(shù)組,B組為缺血30min組,C組為缺血45min組,D組為缺血60min組,假手術(shù)組僅解剖肝十二指腸韌帶,不阻斷血供。2.兔肝缺血再灌注模型的制作及取材采用無損傷血管夾夾閉兔肝蒂,按照分組分別阻斷30min、45min、60min,取出血管夾,恢復(fù)肝血流灌注1h后,取肝組織、采血。而后,在術(shù)后第3d和第7d對(duì)該四組兔子分別進(jìn)行采血及超聲引導(dǎo)下肝臟穿刺取肝組織。3.標(biāo)本處理(1)血生化,取血后分離血清,測(cè)定ALT含量。(2)組織經(jīng)福爾馬林固定后送往病理科進(jìn)行HE染色觀察。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)及積分以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)形式表示,統(tǒng)計(jì)處理采用一般線性模型重復(fù)測(cè)量方差分析,先進(jìn)行球形檢驗(yàn)分析各組重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)之間是否存在相關(guān)性,而后采用相應(yīng)的方差分析模型,檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以P0.05認(rèn)為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.血清酶學(xué)假手術(shù)組,ALT基本在正常范圍內(nèi)。缺血再灌注組B、C、D組間比較,術(shù)后同一天,D組ALT水平最高,即血流阻斷1h組,其次是阻斷45min組,最后是30min組。缺血再灌注組組內(nèi)ALT水平均是阻斷血流再灌注1h后最高,術(shù)后第3d下降,至術(shù)后第7d基本恢復(fù)至正常水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.肝組織HE病理HE病理結(jié)果顯示,假手術(shù)組及術(shù)前肝組織病理形態(tài)正常,胞質(zhì)均勻,核深染;缺血再灌注組肝組織細(xì)胞不同程度地被損害,以夾閉60min組損害最重,其次是夾閉45min組,最后是夾閉30min組。缺血再灌注組組內(nèi)均是夾閉血管再灌注1h后肝細(xì)胞損害最重,第3d損害程度有所減輕,至第7d進(jìn)一步恢復(fù),B組基本恢復(fù)至正常水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論兔肝缺血再灌注模型制作簡單、成功率高,制得的模型隨缺血時(shí)間的延長,肝酶升高,組織病理損害程度增加,缺血再灌注組再灌注1h損害最重,術(shù)后第3d、第7d逐漸恢復(fù),這一梯度病理損害變化過程能很好地滿足下一步影像功能研究的需要。第二部分肝臟缺血再灌注損傷99m Tc-GSA顯像的實(shí)驗(yàn)研究目的結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝酶及病理指標(biāo)變化情況,探討99m Tc-GSA肝顯像評(píng)估HIRI后肝功能的價(jià)值。材料與方法1.動(dòng)物分組及HIRI模型的制作實(shí)驗(yàn)兔分為假手術(shù)組和缺血再灌注組,再灌注組根據(jù)缺血時(shí)間再分為三組(缺血30min、45min、60min),并在術(shù)后第3和第7d繼續(xù)隨訪實(shí)驗(yàn)。2.99m Tc-GSA的制備及顯像參數(shù)采用GSA試劑盒,按照文獻(xiàn)描述的方法制備99m Tc-GSA并檢測(cè)放化學(xué)純度,合格后用于顯像。對(duì)A、B、C、D四組術(shù)前、術(shù)后1h、術(shù)后3d及術(shù)后7d分別進(jìn)行顯像。處理顯像結(jié)果,獲得肝臟攝取率(LHL15)與血液清除指數(shù)(HH15)。3.血生化及病理檢驗(yàn)采血及病理檢查見第一部分。4.結(jié)果處理分析顯像結(jié)果,數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理同第一部分,將顯像結(jié)果與血清肝酶及組織病理結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)分析相關(guān)性。結(jié)果1.LHL15缺血再灌注組肝臟攝取率最低的時(shí)間點(diǎn)均是T2,即阻斷血流再灌注1h后最低,其次是術(shù)后3d,術(shù)后7d有所恢復(fù),假手術(shù)組攝取率基本處正常水平;組間比較,同一時(shí)間,D組攝取率最低,即血流阻斷1h組,其次是阻斷45min組,再次是30min組,假手術(shù)組基本處于正常水平。2.HH15組間比較,同一時(shí)間,D組HH15最大,即血流阻斷1h組,其次是阻斷45min組,再次是30min組,假手術(shù)組基本處于正常水平;缺血再灌注組顯像劑血液清除指數(shù)值最大的時(shí)間點(diǎn)均是T2,即阻斷血流再灌注1h后值最大,其次是術(shù)后3d,術(shù)后7d減小,假手術(shù)組HH15基本處正常水平。3.顯像結(jié)果與病理及肝酶的相關(guān)性分析LHL15、HH15、ALT、HE組織病理評(píng)分這四個(gè)變量的Pearson相關(guān)檢驗(yàn)結(jié)果示:LHL15與HH15呈高度負(fù)相關(guān),r=-0.967,p0.01;LHL15與HE呈高度負(fù)相關(guān),r=-0.957,p0.01;LHL15與ALT呈高度負(fù)相關(guān),r=-0.934,p0.01;HH15與HE呈高度正相關(guān),r=0.959,p0.01;HH15與ALT呈高度正相關(guān),r=0.942,p0.01。即這四個(gè)指標(biāo)彼此高度相關(guān)。結(jié)論99m Tc-GSA肝顯像得到的LHL15、HH15參數(shù)與肝酶、組織病理有很好的相關(guān)性,能準(zhǔn)確反映HIRI后肝損害程度和肝功能的變化。
【關(guān)鍵詞】：缺血再灌注損傷 肝臟 去唾液酸糖蛋白受體 99mTc-GSA
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R657.3;R817.4
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-17
• 中英文縮略詞表17-18
• 前言18-23
• 第一部分 兔肝不同程度缺血再灌注損傷模型的建立及相關(guān)檢驗(yàn)、病理結(jié)果分析23-31
• 1 引言23
• 2 材料與方法23-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-29
• 4 討論29-30
• 5 小結(jié)30-31
• 第二部分 肝臟缺血再灌注損傷 99MTC-GSA顯像的實(shí)驗(yàn)研究31-38
• 1 引言31
• 2 材料與方法31-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-35
• 4 討論35-37
• 5 小結(jié)37-38
• 附圖38-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 綜述 肝缺血再灌注損傷機(jī)理及 99MTC-GSA肝功能評(píng)估的研究進(jìn)展43-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果53-54
• 致謝54

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1 尤麗;GSA：LTE終端數(shù)在過去12個(gè)月翻番[N];人民郵電;2013年

2 尚興;GSA：全球共有666款LTE終端上市銷售[N];人民郵電;2013年

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1 龍葉;99mTc-GSA對(duì)肝臟缺血再灌注損傷評(píng)估的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2016年

2 陸珂;以DNA和RNA為鍵合配體的樹枝狀大分子修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱的制備與應(yīng)用研究[D];北京化工大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：555394