本文關(guān)鍵詞：PARI在熱打擊炎癥激活中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 蛋白酶活化受體1 重癥中暑 炎癥 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 粘附

【摘要】：目的：研究蛋白酶活化受體1(protein activated receptor 1)PAR1在熱打擊引起血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)炎癥激活中的作用,闡明PAR1在重癥中暑小鼠全身炎癥反應(yīng)中的作用。方法：1.構(gòu)建體外HUVECs熱打擊模型,采用RT-PCR及ELISA方法分別檢測42℃熱打擊HUVECs 2 h后不同時間段TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平；2.采用熒光顯微鏡觀察單核細(xì)胞對熱打擊HUVECs后粘附的影響；3.采用western blot及RT-PCR方法分別檢測熱打擊HUVECs后不同時間段PAR1蛋白及mRNA的表達(dá)水平；4.采用PAR1 siRNA及腺病毒過表達(dá)預(yù)處理HUVECs,檢測37℃及42℃熱打擊后8h PAR1的表達(dá);5.采用RT-PCR檢測PAR1抑制劑、激動劑、siRNA、PAR1腺病毒過表達(dá)對熱打擊HUVECs 8 h后TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA表達(dá)水平的影響；6.采用ELISA檢測PAR1抑制劑、激動劑、siRNA、PAR1腺病毒過表達(dá)對熱打擊HUVECs 8 h后細(xì)胞上清液中的TNF-α、IL-6、ICAM-1表達(dá)水平的影響；7.采用熒光顯微鏡觀察PAR1抑制劑、激動劑、siRNA、PAR1腺病毒過表達(dá)對熱打擊HUVECs 8 h后對單核細(xì)胞粘附的影響；8.構(gòu)建小鼠中暑模型,免疫組化檢測心、肝、肺和小腸上PAR1蛋白的表達(dá)；9.采用ELISA檢測正常小鼠及重癥中暑、PAR1抑制劑、激動劑對重癥中暑小鼠6h后血清中TNF-α、IL-6、ICAM-1的表達(dá)水平；10.采用HE染色檢測PAR1抑制劑、激動劑對重癥中暑小鼠的臟器損傷的影響；11.觀察PAR1抑制劑、激動劑對重癥中暑小鼠的生存率的影響。結(jié)果：1.熱打擊使HUVECs TNF-α、IL-6、ICAM-1 mRNA表達(dá)增加(圖1.1,表1.1)；2.熱打擊使HUVECs炎癥因子TNF-α/IL-6和粘附因子ICAM-1蛋白分泌增加(表1.2);3.熱打擊使單核細(xì)胞對HUVECs粘附增加(圖2,表2)；4.熱打擊使HUVECs的PAR1 mRNA和蛋白表達(dá)增加(圖3,表3)；5.PAR1 siRNA能有效降低熱打擊后PAR1的表達(dá)/AdPAR1有效增加熱打擊后PAR1的表達(dá)(圖4,表4)；6.抑制或敲低PAR1可降低細(xì)胞因子TNF-α／IL-6和粘附因子ICAM-1 mRNA表達(dá),而激活或過表達(dá)則可增加上述基因(圖5.1,5.2,表5.1,5.2)；7.抑制或敲低PAR1可降低細(xì)胞因子TNF-α/IL-6和粘附因子ICAM-1蛋白分泌,而激活或過表達(dá)則可增加上述蛋白分泌(表5.3,5.4)；8.抑制PAR1可減少單核細(xì)胞對HUVECs的粘附,而激活PAR1則增強(qiáng)這種粘附(圖6.1,表6.1)；9.敲除PAR1可減少單核細(xì)胞對HUVECs的粘附,而PAR1過表達(dá)則增強(qiáng)這種粘附(圖6.2,表6.2)；10.PAR1蛋白在重癥中暑小鼠心、肝、肺和小腸表達(dá)增加(圖7)；11.抑制PAR1可降低重癥中暑小鼠血清TNF-α、IL-6和ICAM-1水平,而激活PAR1則增加上述蛋白水平(表7)；12.抑制PAR1可減輕重癥中暑心、肝、肺、小腸損傷,而激活PAR1則加重上述臟器損傷(圖8)；13.抑制PAR1可提高重癥中暑小鼠72h存活率,而激活PAR1則降低72h存活率(圖9,表8)；1.熱打擊可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞PAR1活化,進(jìn)而導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥激活通路。2.PAR1參與了重癥中暑小鼠全身炎癥激活。
【關(guān)鍵詞】：蛋白酶活化受體1 重癥中暑 炎癥 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 粘附
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 引言11-16
• 第一章 PAR1在熱打擊致血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥激活中的作用的研究16-42
• 1.1 材料16-19
• 1.1.1 實驗材料與主要試劑16-18
• 1.1.2 主要溶液配置18-19
• 1.1.3 主要實驗儀器及設(shè)備19
• 1.2 實驗方法19-26
• 1.2.1 HUVECs的培養(yǎng)19-20
• 1.2.2 THP1細(xì)胞的培養(yǎng)20-21
• 1.2.3 Western blot21-22
• 1.2.4 提取總RNA和RT-PCR22-24
• 1.2.5 PAR1siRNA干擾24
• 1.2.6 腺病毒轉(zhuǎn)染24-25
• 1.2.7 ELISA檢測細(xì)胞上清炎癥及粘附因子25-26
• 1.2.8 單核細(xì)胞粘附26
• 1.2.9 統(tǒng)計學(xué)處理26
• 1.3 實驗方法設(shè)計26-28
• 1.3.1 熱打擊HUVECs后TNF-α、IL-6、ICAM-1的表達(dá)26-27
• 1.3.2 觀察單核細(xì)胞對熱打擊HUVECs后的粘附27
• 1.3.3 熱打擊不同時間對HUVECs PAR1蛋白及mRNA表達(dá)水平27
• 1.3.5 PAR1抑制劑、激動劑、siRNA及過表達(dá)對熱打擊后三種炎癥因子表達(dá)的影響27-28
• 1.3.6 觀察PAR1抑制劑、激動劑、siRNA及腺病毒對熱打擊后白細(xì)胞粘附的影響28
• 1.4 實驗結(jié)果28-38
• 1.4.1 熱打擊使HUVECs TNF-α、IL-6、ICAM-1表達(dá)增加28-30
• 1.4.2 熱打擊使單核細(xì)胞對HUVECs粘附增加30-31
• 1.4.3 熱打擊HUVECs使PAR1 mRNA及蛋白表達(dá)增加31-32
• 1.4.4 PAR1 siRNA能有效降低熱打擊后PAR1的表達(dá)/AdPAR1有效增加熱打擊后PAR1的表達(dá)32
• 1.4.5 抑制或敲除PAR1減輕熱打擊后細(xì)胞因子TNF-α/IL-6和粘附因子ICAM-1 mRNA的表達(dá)；激活或過表達(dá)則可增加上述基因32-35
• 1.4.6 抑制PAR1可減少單核細(xì)胞對HUVECs的粘附,而激活PAR1則增強(qiáng)這種粘附35-38
• 1.5 討論38-42
• 第二章 PAR1在重癥中暑小鼠全身炎癥反應(yīng)中的作用42-49
• 2.1 材料42-43
• 2.1.1 實驗材料與主要試劑42
• 2.1.2 主要溶液配置42
• 2.1.3 主要實驗儀器及設(shè)備42-43
• 2.2 實驗方法43-44
• 2.2.1 預(yù)處理小鼠43
• 2.2.2 熱打擊小鼠43
• 2.2.3 心臟取血43
• 2.2.4 ELISA檢測血清中TNF-α、IL-6、ICAM-1炎癥因子的水平43
• 2.2.5 免疫組化觀察心、肝、肺、腸PAR1的表達(dá)及H & E染色觀察心、肝、肺、腸的損傷43-44
• 2.2.6 各處理組小鼠存活率統(tǒng)計44
• 2.2.7 統(tǒng)計學(xué)處理44
• 2.3 實驗設(shè)計44-45
• 2.3.1 觀察正常及重癥中暑小鼠心、肝、肺、小腸PAR1的表達(dá)44
• 2.3.2 檢測正常對照及重癥中暑小鼠血清中TNF-α、IL-6、ICAM-1的表達(dá)水平44
• 2.3.3 檢測PAR1抑制劑及激動劑對重癥中暑小鼠血清中TNF-a、IL-6、ICAM-1的水平的影響44-45
• 2.3.4 觀察PAR1抑制劑及激動劑對重癥中暑小鼠臟器損傷的影響45
• 2.3.5 觀察PAR1抑制劑及激動劑對重癥中暑小鼠生存率的影響45
• 2.4 實驗結(jié)果45-47
• 2.4.1 PAR1蛋白在重癥中暑小鼠心、肝、肺和小腸表達(dá)增加45
• 2.4.2 抑制PAR1可降低重癥中暑小鼠血清TNF-α、IL-6和ICAM-1水平,而激活PAR1則增加上述蛋白水平45-46
• 2.4.3 抑制PAR1可減輕重癥中暑心、肝、肺、小腸損傷,而激活PAR1則加重上述臟器損傷46-47
• 2.4.4 抑制PAR1可提高重癥中暑小鼠72h存活率,而激活PAR1則降低72h存活率47
• 2.5 討論47-49
• 結(jié)語49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 附錄54-55
• 在校期間發(fā)表文章55-56
• 致謝56-57
• 統(tǒng)計學(xué)審核證明57

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1 周楠 ,何鐵山;重癥中暑15例院前救治體會[J];人民軍醫(yī);2003年04期

2 李園,張若林;重癥中暑搶救成功1例報道[J];中國急救醫(yī)學(xué);2004年01期

3 周從陽,楊繼斌,劉仁樹,肖翔宇;重癥中暑的臨床特征及其昏迷機(jī)制[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

4 施云超;徐建彪;童武華;張繼松;王黎恩;沈錦松;李亞民;顧永良;;重癥中暑患者的救治[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2006年06期

5 張峰銘;米軍麗;呂志斌;劉云潔;李雁紅;郭新梅;王遠(yuǎn)堂;耿堂忠;;重癥中暑11例治療分析[J];臨床軍醫(yī)雜志;2006年05期

6 周漢勇;張文成;杜曉剛;陳恩靜;劉源;;重癥中暑并發(fā)多系統(tǒng)器官功能衰竭1例[J];四川醫(yī)學(xué);2006年12期

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1 楊志蘭;余屯德;;重癥中暑46例救治體會[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文集[C];2010年

2 茅志成;王一鏜;程愛群;程極壯;陶淑英;彭永德;吳建中;尤肇俊;顧壽年;李國忠;鐘正江;張季平;;1995年南京市重癥中暑49例分析[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)學(xué)會第六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1996年

3 楊巧云;劉文明;;重癥中暑患者的臨床分析及集束化治療[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國重癥醫(yī)學(xué)大會論文匯編[C];2011年

4 祝兵兵;萬小芳;許敏;;搶救成功重癥中暑患者1例[A];江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會重癥醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會成立大會暨第一屆長城危重病論壇論文匯編[C];2013年

5 施云超;徐建彪;童武華;張繼松;王黎恩;沈錦松;李亞民;顧永良;;重癥中暑患者的救治[A];2004年浙江省危重病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

6 童華生;唐柚青;蘇磊;;烏司他丁對重癥中暑血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國重癥醫(yī)學(xué)大會論文匯編[C];2011年

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8 張舜玲;李韶光;羅偉良;葉初陽;吳靜黎;;低分子肝素在重癥中暑并全身炎癥反應(yīng)綜合征的應(yīng)用探討[A];2001年全國中西醫(yī)結(jié)合急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

9 高同勝;權(quán)啟鎮(zhèn);張志堅;王明葉;;重癥中暑昏迷并多臟器損害的搶救[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1995年

10 張維新;肖翔宇;陳運和;;醒腦靜注射液治療重癥中暑30例[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會全國第11屆創(chuàng)傷復(fù)蘇中毒學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

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1 保健時報實習(xí)記者 王朝;老人每天應(yīng)喝2升水[N];保健時報;2007年

2 江蘇 醫(yī)學(xué)博士 陳四清;中暑尋常病 急救莫懈怠[N];家庭醫(yī)生報;2004年

3 本報記者 蔣秀娟 通訊員 王繼榮 羅國金;熱射病 異常高溫下的“異常重病”[N];科技日報;2013年

4 健康時報特約記者　 王繼榮 劉泉;中暑要分型 熱射最嚴(yán)重[N];健康時報;2006年

5 特約記者 宋瓊芳 本報記者 胡德榮 俞欣;當(dāng)心熱射病來襲[N];健康報;2013年

6 宋青;夏季需防熱射病[N];健康報;2006年

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1 潘志國;重癥中暑橫紋肌溶解發(fā)病及機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

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1 羅序睿;重癥中暑患者預(yù)后危險因素Logistic回歸分析初探[D];南昌大學(xué);2012年

2 高振平;重癥中暑患者并發(fā)多臟器功能障礙綜合癥的治療分析[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

3 王鄭蓮;PARI在熱打擊炎癥激活中作用的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 馮石軍;集束化治療重癥中暑患者預(yù)后影響因素分析[D];中南大學(xué);2014年

5 張興欽;重癥中暑肝竇內(nèi)皮細(xì)胞損傷的初步研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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