登革熱在全球范圍分布廣泛,是傳播最快的蟲媒病之一,對公共醫(yī)療衛(wèi)生造成了極大的負擔。而超過半數的登革熱患者表現(xiàn)為普通發(fā)熱的癥狀或者無癥狀,所以僅僅通過臨床癥狀上來判斷是否被登革病毒（Dengue Virus,DENV）感染有很大難度,因此建立一種靈敏度高、特異性強的DENV檢測方法就變得很重要。環(huán)介導的等溫擴增（LAMP）恒溫反應、反應時間短、靈敏度高、特異性強,被廣泛用于檢測各種流行性疾病。然而,引物（特別是3’端）與模板之間的錯配將顯著削弱LAMP的效率,限制其對于基因多樣性的病原微生物的應用。本研究針對這一問題,對傳統(tǒng)LAMP體系進行優(yōu)化,首次將具有3’-5’的外切酶活性的高保真酶應用于DENV的RT-LAMP檢測中。當LAMP引物的3’端出現(xiàn)各種錯配時,錯配堿基都會因為高保真酶的3’-5’的外切酶活性而被切除,該方法展現(xiàn)出了對錯配極佳的抗性。在每25μl的LAMP體系中,本研究通過優(yōu)化,高保真酶的量為0.15 U時效果最佳。當檢測30000拷貝/反應的DENV-4野生型與突變型模板時,改良過的新型抗突變RT-LAMP的檢測閾值比傳統(tǒng)RT-LAMP快了5.6-22.6 min,新型... 

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 研究綜述
    1 蟲媒病毒的傳播
    2 登革熱概述
    3 DENV檢測現(xiàn)狀
    4 環(huán)介導等溫擴增技術
    5 本研究擬解決的問題及研究目標
第二章 實驗材料與方法
    1 實驗材料
    2 實驗方法
第三章 實驗結果與分析
    1 新型抗突變LAMP方法的原理
    2 新型DENV抗突變RT-LAMP的原理驗證
    3 抗突變RT-LAMP優(yōu)化結果
    4 DENV1-4型毒株檢測結果
    5 DENV新型RT-LAMP的特異性
    6 DENV新型RT-LAMP的靈敏度與檢測限
    7 可視化檢測
    8 使用臨床樣本評估抗突變RT-LAMP對DENV的檢測效果
第四章 討論
    1 抗突變RT-LAMP原理
    2 抗突變RT-LAMP檢測DENV1-4型毒株
    3 DENV抗突變RT-LAMP方法的特異性與靈敏度
    4 抗突變RT-LAMP的可視化檢測
    5 抗突變RT-LAMP檢測臨床樣本
第五章 研究總結
參考文獻
碩士期間發(fā)表論文及參與課題
致謝



本文編號：3724605