多重實(shí)時(shí)PCR檢測腹膜透析相關(guān)性腹膜炎致病菌的應(yīng)用分析
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【摘要】:目的應(yīng)用多重及單一實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測腹膜透析相關(guān)性腹膜炎(peritoneal dialysis-associated peritonitis,PDAP)常見致病菌分布,將兩種方法結(jié)果相比較,旨在探討實(shí)時(shí)多重PCR檢測腹膜透析相關(guān)性腹膜炎致病菌的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法收集70例患者的腹透液標(biāo)本,分別行傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)與熒光染料法細(xì)菌通用引物RT-PCR檢測。根據(jù)70例樣本培養(yǎng)結(jié)果及相關(guān)參考文獻(xiàn),選取最常見的6種PDAP致病菌作為檢測菌,設(shè)計(jì)各檢測菌特異引物,分別采用單一及多重?zé)晒馓结樂≧T-PCR,針對通用RT-PCR法檢出的陽性樣本進(jìn)行檢測。將通用引物RT-PCR與傳統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行比較、單一RT-PCR與多重RT-PCR結(jié)果進(jìn)行比較,用SPSS16.0對病例一般臨床資料進(jìn)行分析。結(jié)果1.傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果:70例標(biāo)本陽性率為65.71%(46/70),G+球菌占71.74%(33/46),G-桿菌占28.26%(13/46);其中表皮葡萄球菌9例、金黃色葡萄球菌3例、溶血葡萄球菌10例、草綠色鏈球菌6例、大腸埃希菌5例、銅綠假單胞菌3例。2.臨床資料結(jié)果,70例患者均有腹痛、壓痛反跳痛或腹透液渾濁等臨床癥狀和體征,入院時(shí)培養(yǎng)陰性組腹透液WBC計(jì)數(shù)、多核比及CRP水平明顯低于陽性組(P0.05),而血白蛋白水平明顯高于陽性組(P0.05),其余各項(xiàng)資料兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.通用RT-PCR結(jié)果:70例樣本陽性率為81.42%(57/70),其中2例培養(yǎng)陽性樣本通用RT-PCR為陰性。以傳統(tǒng)培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn),通用RT-PCR方法對PDAP致病菌檢測的特異性為45.83%,敏感性為95.65%,且檢出率明顯高于傳統(tǒng)培養(yǎng)法,二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.對通用RT-PCR法檢出的57例陽性樣本行單一及多重RT-PCR檢測,兩者均檢出38例樣本在6種檢測菌范圍內(nèi),兩種方法檢測結(jié)果一致,1例RT-PCR結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不符,剩余19例菌種在6種檢測菌范圍以外。5.通用RT-PCR可在4~6 h內(nèi)明確是否存在細(xì)菌感染;針對6種致病菌的檢測,單一RT-PCR可在6~9 h內(nèi)完成,多重RT-PCR僅需3 h即可明確菌種。結(jié)論與傳統(tǒng)培養(yǎng)法比較,RT-PCR方法具有較高靈敏度和特異性,多重RT-PCR因可同時(shí)檢測多種致病菌,較單一RT-PCR更加迅速、簡便、經(jīng)濟(jì)。
【關(guān)鍵詞】:腹膜透析相關(guān)性腹膜炎 致病菌 實(shí)時(shí)熒光 PCR 傳統(tǒng)培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R692.5
【目錄】:
- 中英文縮略詞表5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-10
- 前言10-11
- 材料與試劑11-12
- 實(shí)驗(yàn)方法12-17
- 結(jié)果17-23
- 討論23-33
- 結(jié)論33-34
- 參考文獻(xiàn)34-38
- 附錄38-39
- 致謝39-40
- 綜述40-50
- 參考文獻(xiàn)48-50
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