發(fā)布時間：2021-06-09 04:09

　　目的:腹膜纖維化是腹膜超濾過功能衰退和終止腹膜透析的主要原因,而腹膜纖維化是高糖、腹膜炎等因素導(dǎo)致的,而腹膜間皮細(xì)胞（HPMCs）的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）被認(rèn)為是腹膜纖維化的重要機(jī)制。表觀遺傳學(xué)是近年來生物醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn),組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)中重要的修飾方式。最新研究所示,組蛋白乙�；揎棻蛔C實(shí)與多種組織器官的纖維化過程有關(guān),包括肝臟、肺和腎臟等。目前組蛋白乙�；揎検欠駞⑴c腹膜纖維化過程尚無文獻(xiàn)報道。因此,我們試圖通過本研究明確組蛋白乙�；揎棇Ω鼓だw維化的影響及其可能的作用機(jī)制。方法:以腹膜間皮細(xì)胞為研究對象,分別采用高糖和組蛋白乙�；敢种苿〤646干預(yù),以CCK-8分析試驗(yàn)檢測腹膜間皮細(xì)胞增殖活性。采用免疫印跡法（Western Blot）檢測細(xì)胞鈣粘蛋白（E-cad）、a-肌動蛋白（a-SMA）、I型膠原蛋白（Col I）,纖維連接蛋白（FN）、乙�；慕M蛋白H3和H4、TGF-β1和磷酸化-Smad的蛋白質(zhì)表達(dá);采用比色分析試劑盒分析組蛋白乙�；妻D(zhuǎn)酶（HAT）活力;實(shí)時熒光定量試驗(yàn)檢測HAT亞型p300和GCN5 m RNA的表達(dá);用CHIP試驗(yàn)和定量實(shí)時聚合酶鏈反... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 引言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.1 腹膜間皮細(xì)胞的復(fù)蘇
            2.2.1.2 腹膜間皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞增殖分析實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 Western blotting（免疫印跡）分析
            2.2.3.1 腹膜間皮細(xì)胞細(xì)胞總蛋白的提取
            2.2.3.2 BCA法測定蛋白質(zhì)含量
            2.2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
            2.2.3.4 Western免疫印跡檢測
        2.2.4 組蛋白乙酰基移轉(zhuǎn)酶(HAT)活力分析用試樣
        2.2.5 實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（QR T
            2.2.5.1 試劑配置與器皿處理
            2.2.5.2 腹膜間皮細(xì)胞總RNA的提取
            2.2.5.3 細(xì)胞總RNA樣品的測定
            2.2.5.4 QR RT-PCR檢測
        2.2.6 染色質(zhì)免疫沉淀反應(yīng)(CHIP)試驗(yàn)和定量實(shí)時聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)
    2.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.4 總結(jié)性技術(shù)路線
第3章 結(jié)果
    3.1 高糖誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞EMT
    3.2 高糖誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞EMT時，腹膜間皮細(xì)胞組蛋白乙�；疕3增加
    3.3 組蛋白乙�；妻D(zhuǎn)酶抑制劑C646阻斷高葡萄糖誘導(dǎo)的腹膜間皮細(xì)胞EMT
    3.4 組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶阻滯劑C646阻斷TGF-β1/Smad3的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路逆轉(zhuǎn)高糖誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞EMT
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
科研成果
感謝



本文編號：3219896