目的:評(píng)估高分辨熔解曲線(HRM)技術(shù)用于結(jié)核分枝桿菌對(duì)四類抗結(jié)核藥物(異煙肼、利福平、氟喹諾酮類、二線注射類)耐藥性檢測(cè)的靈敏度和特異度;以Xpert-MTB/RIF為對(duì)照,比較Xpert-MTB/RIF和HRM技術(shù)用于結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)的診斷效能。方法:收集抗酸染色陽(yáng)性的肺結(jié)核患者痰液標(biāo)本300例,對(duì)標(biāo)本進(jìn)行抗酸染色涂片、分枝桿菌培養(yǎng)、Xpert-MTB/RIF檢測(cè)、傳統(tǒng)藥物敏感試驗(yàn),用磁珠法提取結(jié)核分枝桿菌DNA,并進(jìn)行熔解曲線法四類抗結(jié)核藥物的耐藥性檢測(cè);以傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),評(píng)估熔解曲線技術(shù)(HRM)用于結(jié)核分枝桿菌對(duì)四類抗結(jié)核藥物耐藥性檢測(cè)的靈敏度和特異度;以Xpert-MTB/RIF為對(duì)照,比較Xpert-MTB/RIF和HRM技術(shù)用于結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)的診斷效能。結(jié)果:以傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)(比例法)為金標(biāo)準(zhǔn),HRM利福平試劑盒耐藥檢測(cè)的靈敏度為100(4),特異度為79.6(4);異煙肼試劑盒耐藥檢測(cè)的靈敏度為60.7(4),特異度為85.8(4)。氟喹諾酮類試劑盒耐藥檢測(cè)的靈敏度為75.0(4),特異度為94.9(4);二線注射類試劑盒耐藥檢測(cè)的特異度99.0(4);熔解曲線四種檢測(cè)試劑盒的特異度均可,但靈敏度差異較大。利福平熔解曲線耐藥檢測(cè)與Xpert MTB/RIF檢測(cè)比較,兩種方法的一致性85.0(4),熔解曲線利福平耐藥性檢測(cè)的靈敏度高于Xpert MTB/RIF,而特異度偏低。結(jié)論:在本研究條件下,HRM技術(shù)在結(jié)核分枝桿菌對(duì)異煙肼、利福平、氟喹諾酮類、二線注射類抗結(jié)核藥物的耐藥性檢測(cè)中靈敏度相對(duì)較高、特異度強(qiáng)。HRM與Xpert MTB/RIF技術(shù)用于利福平耐藥檢測(cè)的一致性較高,但是以傳統(tǒng)藥敏為金標(biāo)準(zhǔn),HRM靈敏度高而特異性偏低。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R446.5
【部分圖文】：

圖 1 編號(hào) 09226 標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果注：紅色表示陽(yáng)性對(duì)照，綠色表示陰性對(duì)照，藍(lán)色表示待測(cè)樣本圖 2 編號(hào) 09250 標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)陰性結(jié)果注：紅色表示陽(yáng)性對(duì)照，綠色表示陰性對(duì)照，藍(lán)色表示待測(cè)樣本

圖 2 編號(hào) 09250 標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)陰性結(jié)果注：紅色表示陽(yáng)性對(duì)照，綠色表示陰性對(duì)照，藍(lán)色表示待測(cè)樣本圖 3 編號(hào) 09229 標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)樣本抑制結(jié)果注：紅色表示陽(yáng)性對(duì)照，綠色表示陰性對(duì)照，藍(lán)色表示待測(cè)樣本圖 1-3，F(xiàn)AM 通道為 MTB 基因的檢測(cè)通道，該通道上編號(hào) 09226、09250、09229標(biāo)本的陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增信號(hào)均正常，表明擴(kuò)增體系沒(méi)有問(wèn)題；編號(hào) 09226 標(biāo)本有擴(kuò)增信號(hào)，且 Ct 值小于 25，表明該標(biāo)本有結(jié)核分支桿菌復(fù)合群存在；編號(hào) 09250 標(biāo)本 Ct

23圖 3 編號(hào) 09229 標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)樣本抑制結(jié)果注：紅色表示陽(yáng)性對(duì)照，綠色表示陰性對(duì)照，藍(lán)色表示待測(cè)樣本圖 1-3，F(xiàn)AM 通道為 MTB 基因的檢測(cè)通道，該通道上編號(hào) 09226、09250、09229標(biāo)本的陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增信號(hào)均正常，表明擴(kuò)增體系沒(méi)有問(wèn)題；編號(hào) 09226 標(biāo)本有擴(kuò)增信號(hào)，且 Ct 值小于 25，表明該標(biāo)本有結(jié)核分支桿菌復(fù)合群存在；編號(hào) 09250 標(biāo)本 Ct值大于 25，表明該標(biāo)本沒(méi)有 MTB 存在。HEX 通道代表內(nèi)控基因的檢測(cè)結(jié)果，從 1-3圖中看到，編號(hào) 09226、09229 Ct 值均小于 26，而編號(hào) 09229 在 FAM 和 HEX 通道均無(wú)擴(kuò)增，而陽(yáng)性對(duì)照卻正常擴(kuò)增，表明該待測(cè)樣本在擴(kuò)增過(guò)程中發(fā)生了抑制。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2865737