背景膿毒癥(sepsis)是由感染引起的全身性炎癥反應(yīng),表現(xiàn)為宿主反應(yīng)失調(diào)導(dǎo)致的危及生命的器官功能障礙。膿毒癥的病情兇險(xiǎn),臨床致死率高,近幾年,盡管抗感染治療技術(shù)和器官功能支持治療有一定的發(fā)展,但膿毒癥總的病死率仍達(dá)30%以上。目前膿毒癥的治療主要針對免疫調(diào)控和抗感染,但由于膿毒癥患者免疫炎癥反應(yīng)的復(fù)雜性和明顯的個(gè)體差異性,以往針對抗炎治療的臨床試驗(yàn)均未能顯示對臨床預(yù)后有明顯的改善作用。因此,尋找有效治療和預(yù)防膿毒癥發(fā)生發(fā)展的新靶點(diǎn)具有重要意義。毒胡蘿卜素(Thapsigargin,TG)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum,ER)應(yīng)激的誘導(dǎo)物。以往的研究表明,用TG預(yù)適應(yīng)對各種應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。迄今為止,還沒有關(guān)于TG預(yù)適應(yīng)對膿毒癥影響的報(bào)道。目的毒胡蘿卜素在膿毒癥的發(fā)展過程中可能是既有損傷作用又有保護(hù)作用的雙刃劍。以往研究發(fā)現(xiàn)毒胡蘿卜素適度預(yù)適應(yīng)性干預(yù)能夠在不同的疾病模型中起到保護(hù)作用。本課題擬研究毒胡蘿卜素適度預(yù)適應(yīng)性干預(yù)是否能減輕膿毒癥造成的損傷。方法在整體水平,分別使用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)小鼠膿毒癥模型和腹腔盲腸結(jié)扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)方式誘導(dǎo)膿毒癥模型,預(yù)適應(yīng)性應(yīng)用毒胡蘿卜素于LPS處理前15小時(shí)腹腔注射,觀察毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)對生存率和器官功能的影響。用western blot、real-time PCR、ELISA在整體水平和細(xì)胞水平研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激預(yù)適應(yīng)對炎癥反應(yīng)的影響及調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的生物學(xué)機(jī)制。結(jié)果毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)性干預(yù)在昆明小鼠膿毒癥模型和C57/BL6J小鼠膿毒癥模型中能明顯改善生存率。與對照比,在C57/BL6J小鼠膿毒癥模型中經(jīng)預(yù)適應(yīng)處理的小鼠注射LPS后肺臟病理損傷明顯減輕,血清谷草轉(zhuǎn)氨酶,谷丙轉(zhuǎn)氨酶以及乳酸脫氫酶水平明顯降低。同樣,與膿毒癥組相比,毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)降低血清中 interleukin(IL)-6 和 interleukin(IL)-1 β 水平。而腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平?jīng)]有被TG預(yù)適應(yīng)性干預(yù)改變。不僅如此,毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)降低膿毒癥小鼠血清NO含量、血清中氧化應(yīng)激的標(biāo)志物8-iso-prostaglandinF2α水平及脾臟 iNOS 水平。而使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-phenylbutyrate(4-PBA)阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后,毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用依然存在。使用另一種ER應(yīng)激誘導(dǎo)劑衣霉素預(yù)適應(yīng)性干預(yù)后,盡管有較弱的保護(hù)作用,但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示毒胡蘿卜素的保護(hù)作用不是通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的。在體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞RAW264.7中,毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)處理對LPS引起的細(xì)胞炎癥因子IL-6、IL-1β的蛋白表達(dá)水平有明顯抑制作用,而對炎癥因子的mRNA水平作用不明顯。毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)處理對LPS刺激引起的nuclear factor(NF)-κB(NF-κB))和c-Jun N-terminal kinase(JNK)通路激活沒有明顯抑制作用,提示毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)發(fā)揮的抗炎癥作用不是通過影響LPS受體下游信號通路的功能實(shí)現(xiàn)的。另外,我們發(fā)現(xiàn)毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)處理降低炎癥因子的翻譯效率。TG改變炎癥因子翻譯不是通過調(diào)節(jié)因子eIF2α的磷酸化水平,毒胡蘿卜素對炎癥因子翻譯效率的作用可能與mTOR通路有關(guān)。結(jié)論結(jié)果提示毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)性干預(yù)對膿毒癥損傷有保護(hù)作用,毒胡蘿卜素預(yù)適應(yīng)性干預(yù)能夠減輕膿毒癥所致的炎癥反應(yīng),其作用機(jī)制可能是通過影響炎癥因子的蛋白質(zhì)翻譯過程。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

Ｑ?？＂?Ｔ?１?ｉ?？?ｌ￣￣１?１??０?１?２?３?４?５?６?７?（Ｄａｙ）??圖１．２不同劑量ＴＧ預(yù)適應(yīng)對ＬＰＳ誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠生存率的影響（ｎ＝２０）。??與單獨(dú)ＬＰＳ處理相比，＊Ｐ＜０．０５。??２５??

?ｉ??０?１?２?３?４?５?６?７?（Ｄａｙ｝??圖１．１腹腔注射不同劑量脂多糖（ＬＰＳ）對ＫＭ小鼠生存率的影響（ｎ＝２０）。??ＴＧ?（ｍｇ／ｋｇ）??０．１??１０Ｃ］???＾?０．３??０．６??８０＇?—??＾?＾．?〇．３??＾?６０???Ｑ１?ｔｏ??Ｉ?４０＇?丨?－…』、０．６?＂??｜?２０－?＇?、??ｘ?ＬＰＳ?ａｌｏｎｅ??Ｑ?？＂?Ｔ?１?ｉ?？?ｌ￣￣１?１??０?１?２?３?４?５?６?７?（Ｄａｙ）??圖１．２不同劑量ＴＧ預(yù)適應(yīng)對ＬＰＳ誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠生存率的影響（ｎ＝２０）。??與單獨(dú)ＬＰＳ處理相比，＊Ｐ＜０．０５。??２５??

?ｔｉｌｌ??０?１?２?３?４?５?６?７?（Ｄａｙ）??圖１．４用５次連續(xù)ＴＧ?（每天一次）預(yù)適應(yīng)對ＬＰＳ誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠生存率的影??響（ｎ＝２０）。與單獨(dú)ＬＰＳ相比，＊尸＜０．０５。??２６??
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本文編號：2862906