目的:異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)是根治惡性血液系統(tǒng)疾病的有效途徑,然而急性移植物抗宿主病(aGVHD)是移植后主要并發(fā)癥,限制了其廣泛的臨床應(yīng)用。aGVHD的發(fā)生過(guò)程和T細(xì)胞息息相關(guān),研究表明非編碼RNA-miRNA在aGVHD的發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用。我們的前期體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)了miR-155可促進(jìn)T細(xì)胞向Th1、Th9及Th17細(xì)胞分化而抑制向Th2及Treg細(xì)胞分化,參與aGVHD的啟動(dòng)和進(jìn)展。而近些年,眾多研究表明另一類非編碼RNA-lncRNA在調(diào)控T細(xì)胞的分化過(guò)程中也發(fā)揮著必不可少的作用,但目前尚無(wú)有關(guān)lncRNA在aGVHD發(fā)生中扮演角色的研究報(bào)道。LINC01882是一種新發(fā)現(xiàn)的lncRNA,主要在T細(xì)胞中表達(dá),在T細(xì)胞的激活中發(fā)揮重要作用。為了探索lncRNA能否成為診斷和預(yù)測(cè)aGVHD的高敏感性及特異性的非侵入性生物學(xué)指標(biāo),本實(shí)驗(yàn)對(duì)LINC01882的功能展開(kāi)了研究。方法:1、qRT-PCR檢測(cè)PHA或anti-CD3/CD28活化的人外周血CD3~+T細(xì)胞及對(duì)照組LINC01882、ZEB1、PDE7A表達(dá)水平變化。2、磁珠分選未發(fā)生aGVHD與發(fā)生aGVHD異基因造血干細(xì)胞移植患者外周血CD3~+T細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)兩組患者外周血CD3~+T細(xì)胞中LINC01882表達(dá)水平。3、構(gòu)建LINC01882慢病毒過(guò)表達(dá)載體及其陰性對(duì)照,分別轉(zhuǎn)染活化的人外周血CD3~+T細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)LINC01882上調(diào)效率,同時(shí)qRT-PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞中ZEB1、PDE7A、miR-155表達(dá)水平變化,CCK8檢測(cè)兩組細(xì)胞增殖活性差異,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組T細(xì)胞亞群變化。4、利用lipo3000將LINC01882 siRNA及其陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染人外周血CD3~+T細(xì)胞48小時(shí),qRT-PCR檢測(cè)LINC01882敲低效率,同時(shí)檢測(cè)兩組細(xì)胞中ZEB1、PDE7A、miR-155表達(dá)水平變化。結(jié)果:1、與未活化對(duì)照組相比,PHA或anti-CD3/CD28活化的人外周血CD3~+T細(xì)胞LINC01882、ZEB1、PDE7A表達(dá)水平均明顯下調(diào)。2、在異基因造血干細(xì)胞移植患者外周血CD3~+T細(xì)胞標(biāo)本中,與未發(fā)生aGVHD患者相比,aGVHD患者LINC01882表達(dá)水平下調(diào)。3、與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)LINC01882可抑制人外周血CD3~+T細(xì)胞增殖,下調(diào)CD8~+T細(xì)胞比例。4、與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)LINC01882可上調(diào)人外周血CD3~+T細(xì)胞miR-155表達(dá)水平(ZEB1、PDE7A表達(dá)水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。5、與對(duì)照組相比,敲低LINC01882可下調(diào)人外周血CD3~+T細(xì)胞中miR-155、ZEB1、PDE7A表達(dá)水平。結(jié)論:1、LINC01882參與T細(xì)胞的活化,調(diào)控ZEB1、PDE7A表達(dá)。2、LINC01882參與aGVHD的發(fā)生。3、LINC01882可調(diào)控T細(xì)胞增殖及其亞群分化。4、LINC01882可正性調(diào)控T細(xì)胞中miR-155表達(dá)。綜上所述:LINC01882參與T細(xì)胞活化,調(diào)控T細(xì)胞的增殖與分化,參與aGVHD的發(fā)生。但對(duì)于LINC01882的功能研究仍然較少,仍需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R457.7
【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果82 在活化的人外周血 CD3+T 細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào)：珠分選獲得人外周血 CD3+T 細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加入 PHA 5μg/m入相同體積溶劑的陰性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組分別設(shè)為顯微鏡下觀察，與 NC 組相比，PHA 組形態(tài)由小而圓的規(guī)則的細(xì)胞，且細(xì)胞明顯成簇聚團(tuán)生長(zhǎng)。通過(guò) qRT-PCR 檢測(cè) 表達(dá)水平，與 NC 組相比，PHA 組 LINC01882 表達(dá)下調(diào)約.0001，圖 1A 示。anti-CD3 10μg/ml 孵育 96 孔板，與 anti-CD外周血 CD3+T 細(xì)胞 48h，同時(shí)設(shè)置加入相同體積溶劑的對(duì)組分別設(shè)為 anti-CD3/CD28 組與 NC 組。普通顯微鏡28 組與 NC 組明顯不同，且發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞形態(tài)變化與 PHA 組CR檢測(cè)兩組細(xì)胞LINC01882表達(dá)水平，與NC組相比，anti-82 表達(dá)下調(diào)約 74.0%(±5.2%)，P<0.0001，圖 1B 示。

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué)通過(guò)磁珠分選獲得人外周血 CD3+T 細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加入同時(shí)設(shè)置加入相同體積溶劑的對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組。通過(guò) qRT-PCR 檢測(cè)兩組細(xì)胞 ZEB1、PDE7A 表達(dá)水組 ZEB1 表達(dá)下調(diào)約 79.2%（±2.2%），P<0.001，PDE7A1.8%），P<0.0001，如圖 2A、C 示。anti-CD3 10μg/ml 孵育2μg/ml 共同刺激人外周血 CD3+T 細(xì)胞 48h，同時(shí)設(shè)置加組。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組分別設(shè)為 anti-CD3/CD28 組與 NC 組anti-CD3/CD28 組 ZEB1 下調(diào)約 85.7%（±2.4%），P<0.00（±3.7%），P<0.0001 如圖 2B、D 示。

技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) T 細(xì)胞在 anti-CD3/CD28 刺激 48h 后 ZE因表達(dá)水平，β-actin 作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)化胞移植后發(fā)生 aGVHD 患者標(biāo)本中 LINC0因造血干細(xì)胞移植患者新鮮外周血標(biāo)本發(fā)生 aGVHD 患者，分別設(shè)為 non-aGV本中 CD3+T 細(xì)胞。qRT-PCR 檢測(cè)兩組 L比，aGVHD 組患者標(biāo)本中 LINC01882 果如圖 3 所示：
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 婁志義;;聚焦“細(xì)胞分化”試題[J];生物學(xué)教學(xué);2012年02期

2 袁春;細(xì)胞分化的若干疑點(diǎn)淺析[J];中學(xué)生物教學(xué);2003年Z2期

3 劉建峰;淺談細(xì)胞分化[J];中學(xué)生物教學(xué);2004年Z1期

4 馬迪;;也許有一天你可以打印自己的心臟[J];今日中國(guó);2017年05期

5 馮漢茹;陶應(yīng)忠;;《細(xì)胞的分化》教學(xué)設(shè)計(jì)及反思[J];中學(xué)教學(xué)參考;2017年14期

6 江銳;;“細(xì)胞分化形成組織”(第一課時(shí))的教學(xué)設(shè)計(jì)[J];新課程(下);2017年04期

7 趙自然;;新鮮空氣使干細(xì)胞分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年03期

8 ;CD2相關(guān)蛋白在足細(xì)胞分化中的作用[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年04期

9 張傳茂;;細(xì)胞分化 中國(guó)科學(xué)家談科學(xué)[J];科學(xué)觀察;2007年06期

10 張乃群，趙麗英;植物細(xì)胞分化的研究綜論[J];南都學(xué)壇;1996年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李平飛;DAPK1通過(guò)死亡結(jié)構(gòu)域調(diào)控mTORC1活性增強(qiáng)CD8~+T細(xì)胞抗病毒功能[D];華中科技大學(xué);2018年

2 姚銀;皮下特異性免疫治療通過(guò)調(diào)控變應(yīng)性鼻炎患者Tfh和Tfr細(xì)胞的功能發(fā)揮治療作用[D];華中科技大學(xué);2019年

3 韓曉;FoxG1在端腦發(fā)育早期調(diào)控細(xì)胞的命運(yùn)決定[D];東南大學(xué);2019年

4 張沙秋;microRNA對(duì)小鼠CD4~+ T細(xì)胞鈣池操縱性鈣內(nèi)流的影響研究初探[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 王亞男;甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2對(duì)T細(xì)胞的表觀調(diào)控及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2015年

6 周磊磊;IL-6/Stat3通路下調(diào)口腔扁平苔蘚CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2016年

7 魏正萍;CD8~+T細(xì)胞抗感染的功能和調(diào)節(jié)[D];華中科技大學(xué);2019年

8 龍宇;潰結(jié)靈對(duì)體外淋巴細(xì)胞Treg/Th17細(xì)胞失衡的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2019年

9 李曼;Sin1-mTORC2在B細(xì)胞生長(zhǎng)、分化發(fā)育、代謝及功能方面的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2018年

10 趙艷;miR-141調(diào)控丙型肝炎病毒感染肝癌細(xì)胞的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃珍莉;LINC01882調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能參與aGVHD發(fā)病的研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 陳佩娟;過(guò)氧化氫、維甲酸對(duì)A549細(xì)胞p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2019年

3 張立麗;CXCR3~+CD8~+Treg細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中作用機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2016年

4 王敏嬌;Foxc2基因在MC3T3-E1細(xì)胞體外骨向分化過(guò)程中的作用研究[D];上海交通大學(xué);2016年

5 夏歆;circCdyl調(diào)控Th17細(xì)胞分化的體外研究[D];江蘇大學(xué);2019年

6 羅蘭蘭;Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子與RVVC關(guān)系的研究[D];江蘇大學(xué);2019年

7 翁琦;FL1189位修飾衍生物抗腫瘤活性及其機(jī)制研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2019年

8 周劍;人卵巢癌CD8~+PD-1~+T細(xì)胞CD38/CD101的表達(dá)及其臨床意義[D];中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

9 涂曉娟;免疫性卵巢早衰中Treg調(diào)控B細(xì)胞功能的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué);2019年

10 劉振宇;BCL6在CD8~+ T細(xì)胞分化及記憶維持過(guò)程中的作用及機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2855700