目的:異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)是根治惡性血液系統(tǒng)疾病的有效途徑,然而急性移植物抗宿主病(aGVHD)是移植后主要并發(fā)癥,限制了其廣泛的臨床應(yīng)用。aGVHD的發(fā)生過程和T細胞息息相關(guān),研究表明非編碼RNA-miRNA在aGVHD的發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用。我們的前期體內(nèi)外實驗均證實了miR-155可促進T細胞向Th1、Th9及Th17細胞分化而抑制向Th2及Treg細胞分化,參與aGVHD的啟動和進展。而近些年,眾多研究表明另一類非編碼RNA-lncRNA在調(diào)控T細胞的分化過程中也發(fā)揮著必不可少的作用,但目前尚無有關(guān)lncRNA在aGVHD發(fā)生中扮演角色的研究報道。LINC01882是一種新發(fā)現(xiàn)的lncRNA,主要在T細胞中表達,在T細胞的激活中發(fā)揮重要作用。為了探索lncRNA能否成為診斷和預(yù)測aGVHD的高敏感性及特異性的非侵入性生物學(xué)指標,本實驗對LINC01882的功能展開了研究。方法:1、qRT-PCR檢測PHA或anti-CD3/CD28活化的人外周血CD3~+T細胞及對照組LINC01882、ZEB1、PDE7A表達水平變化。2、磁珠分選未發(fā)生aGVHD與發(fā)生aGVHD異基因造血干細胞移植患者外周血CD3~+T細胞,qRT-PCR檢測兩組患者外周血CD3~+T細胞中LINC01882表達水平。3、構(gòu)建LINC01882慢病毒過表達載體及其陰性對照,分別轉(zhuǎn)染活化的人外周血CD3~+T細胞,qRT-PCR檢測LINC01882上調(diào)效率,同時qRT-PCR檢測兩組細胞中ZEB1、PDE7A、miR-155表達水平變化,CCK8檢測兩組細胞增殖活性差異,流式細胞術(shù)檢測兩組T細胞亞群變化。4、利用lipo3000將LINC01882 siRNA及其陰性對照轉(zhuǎn)染人外周血CD3~+T細胞48小時,qRT-PCR檢測LINC01882敲低效率,同時檢測兩組細胞中ZEB1、PDE7A、miR-155表達水平變化。結(jié)果:1、與未活化對照組相比,PHA或anti-CD3/CD28活化的人外周血CD3~+T細胞LINC01882、ZEB1、PDE7A表達水平均明顯下調(diào)。2、在異基因造血干細胞移植患者外周血CD3~+T細胞標本中,與未發(fā)生aGVHD患者相比,aGVHD患者LINC01882表達水平下調(diào)。3、與對照組相比,過表達LINC01882可抑制人外周血CD3~+T細胞增殖,下調(diào)CD8~+T細胞比例。4、與對照組相比,過表達LINC01882可上調(diào)人外周血CD3~+T細胞miR-155表達水平(ZEB1、PDE7A表達水平變化無統(tǒng)計學(xué)意義)。5、與對照組相比,敲低LINC01882可下調(diào)人外周血CD3~+T細胞中miR-155、ZEB1、PDE7A表達水平。結(jié)論:1、LINC01882參與T細胞的活化,調(diào)控ZEB1、PDE7A表達。2、LINC01882參與aGVHD的發(fā)生。3、LINC01882可調(diào)控T細胞增殖及其亞群分化。4、LINC01882可正性調(diào)控T細胞中miR-155表達。綜上所述:LINC01882參與T細胞活化,調(diào)控T細胞的增殖與分化,參與aGVHD的發(fā)生。但對于LINC01882的功能研究仍然較少,仍需進一步研究。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R457.7
【部分圖文】：

實驗結(jié)果82 在活化的人外周血 CD3+T 細胞中表達明顯下調(diào)：珠分選獲得人外周血 CD3+T 細胞，實驗組加入 PHA 5μg/m入相同體積溶劑的陰性對照組。實驗組與對照組分別設(shè)為顯微鏡下觀察，與 NC 組相比，PHA 組形態(tài)由小而圓的規(guī)則的細胞，且細胞明顯成簇聚團生長。通過 qRT-PCR 檢測 表達水平，與 NC 組相比，PHA 組 LINC01882 表達下調(diào)約.0001，圖 1A 示。anti-CD3 10μg/ml 孵育 96 孔板，與 anti-CD外周血 CD3+T 細胞 48h，同時設(shè)置加入相同體積溶劑的對組分別設(shè)為 anti-CD3/CD28 組與 NC 組。普通顯微鏡28 組與 NC 組明顯不同，且發(fā)現(xiàn)其細胞形態(tài)變化與 PHA 組CR檢測兩組細胞LINC01882表達水平，與NC組相比，anti-82 表達下調(diào)約 74.0%(±5.2%)，P<0.0001，圖 1B 示。

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué)通過磁珠分選獲得人外周血 CD3+T 細胞，實驗組加入同時設(shè)置加入相同體積溶劑的對照組。實驗組與對照組組。通過 qRT-PCR 檢測兩組細胞 ZEB1、PDE7A 表達水組 ZEB1 表達下調(diào)約 79.2%（±2.2%），P<0.001，PDE7A1.8%），P<0.0001，如圖 2A、C 示。anti-CD3 10μg/ml 孵育2μg/ml 共同刺激人外周血 CD3+T 細胞 48h，同時設(shè)置加組。實驗組與對照組分別設(shè)為 anti-CD3/CD28 組與 NC 組anti-CD3/CD28 組 ZEB1 下調(diào)約 85.7%（±2.4%），P<0.00（±3.7%），P<0.0001 如圖 2B、D 示。

技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) T 細胞在 anti-CD3/CD28 刺激 48h 后 ZE因表達水平，β-actin 作為內(nèi)部標準化胞移植后發(fā)生 aGVHD 患者標本中 LINC0因造血干細胞移植患者新鮮外周血標本發(fā)生 aGVHD 患者，分別設(shè)為 non-aGV本中 CD3+T 細胞。qRT-PCR 檢測兩組 L比，aGVHD 組患者標本中 LINC01882 果如圖 3 所示：
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本文編號：2855700