背景:臨床上重要疾病的篩查,對(duì)于疾病的診斷、治療和預(yù)防至關(guān)重要,�？梢越档图膊『笃谥委煶杀尽⒏纳祁A(yù)后,甚至避免危害的發(fā)生。通過特定的技術(shù)對(duì)疾病早期代謝或篩查標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè),實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的早期篩查和預(yù)防,已成為現(xiàn)代公共衛(wèi)生服務(wù)的重要內(nèi)容,例如新生兒遺傳代謝性疾病篩查,是當(dāng)前轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究的重要方向。目的:本研究嘗試?yán)觅|(zhì)譜技術(shù)篩選臨床常見疾病,血紅蛋白病(Hemoglobinopathy)及前列腺癌(Prostate cancer,PCa)的代謝及篩查標(biāo)志物,以期建立標(biāo)志物快速、高通量及低成本檢測(cè)的新方法,實(shí)現(xiàn)對(duì)血紅蛋白病及PCa的早期篩查及預(yù)防。方法:(1)以液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)為基礎(chǔ),研究干濾紙血片(Dried blood spot,DBS)樣本微量血紅蛋白提取的新方法,借助胰酶裂解血紅蛋白,對(duì)Hemoglobinopathy患者血紅蛋白進(jìn)行分析,篩選和鑒定α地中海貧血(Hb H)、β地中海貧血、異常血紅蛋白病(Hb E)等多種類型血紅蛋白病的標(biāo)志肽段,研究建立基于LC-MS/MS技術(shù)系統(tǒng)、高效篩查血紅蛋白病的新方法。(2)利用LC-MS/MS技術(shù)和氣相質(zhì)譜技術(shù)(GC-MS)對(duì)PCa患者血液、尿液中的氨基酸、�；鈮A以及有機(jī)酸等110余種代謝物進(jìn)行了分析,并結(jié)合對(duì)不同類型PCa細(xì)胞及藥物處理后各系細(xì)胞培養(yǎng)液的分析,篩選腫瘤特異性的代謝產(chǎn)物,并評(píng)價(jià)其用于PCa篩查及預(yù)后的臨床價(jià)值。結(jié)果:(1)本研究收集各類血紅蛋白病臨床樣本1600余例,建立了干濾紙血片(Dried blood spot,DBS)樣本微量血紅蛋白提取方法,并篩選和鑒定出多種類型的α地中海貧血(Hb H)、β地中海貧血、異常血紅蛋白病(Hb E)的標(biāo)志肽段,利用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)標(biāo)志肽段進(jìn)行定性、定量分析,初步建立了基于LC-MS/MS技術(shù)篩查血紅蛋白病的新方法,并完成對(duì)新方法的方法學(xué)評(píng)價(jià)及應(yīng)用評(píng)估。(2)通過對(duì)55例PCa患者血液、尿液中代謝物的分析,篩選出多種氨基酸、酰基肉堿及有機(jī)酸類特異代謝產(chǎn)物,初步評(píng)價(jià)證實(shí)了這些異常代謝物用于PCa篩查及分型的臨床價(jià)值,并最終用體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了異常代謝物的腫瘤源性,為進(jìn)一步建立篩查或診斷方法提供了依據(jù)。結(jié)論:(1)本研究所建立的LC-MS/MS技術(shù)系統(tǒng)、高效篩查血紅蛋白病新方法用于血紅蛋白病、特別是地中海貧血篩查,靈敏度和特異性均高于98%,采樣速度快(60秒/例),檢測(cè)通量高,成本低廉。(2)本研究篩選出血液及尿液前列腺癌特異性的代謝產(chǎn)物,并進(jìn)一步驗(yàn)證了所篩選異常代謝物的腫瘤特異性,初步揭示了PCa的代謝特征,為進(jìn)一步探索PCa病理機(jī)制和治療方法奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R446
【部分圖文】：

可利用 LC-MS/MS 實(shí)現(xiàn)對(duì)珠蛋白鏈的定性、定量分析。LC-MS/MS 用于血紅蛋白病檢測(cè)，其檢查原理如下：珠蛋白基因突變引起 β 珠蛋白鏈合成缺陷，或是產(chǎn)出分子量（M）改變了的異常珠蛋白（異常血紅病），或是造成珠蛋白鏈合成缺失或不足（地中海貧血）（圖 1.1，圖 1.2-MS/MS 可以將血紅蛋白經(jīng)蛋白酶消化后的肽段按質(zhì)荷比的不同進(jìn)行分離排成含質(zhì)荷比和離子峰強(qiáng)度信息的質(zhì)譜圖，用以反映突變前后珠蛋白鏈合成量子質(zhì)量的變化[16]；數(shù)據(jù)分析時(shí)，找出離子峰發(fā)生改變（消失、出現(xiàn)或信號(hào)改質(zhì)荷比所代表的特定珠蛋白鏈或肽段，分析其組合、響應(yīng)強(qiáng)度，確定血紅蛋異體的類型；結(jié)合使用個(gè)性化合成的多肽同位素內(nèi)標(biāo)，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)正常血白、異常血紅蛋白的定性定量分析，對(duì)疾病的類型做出判斷。國(guó)際上有報(bào)道 LC-MS/MS 檢測(cè)鐮狀細(xì)胞貧血癥（Sickle cell disorders，SCD）[17]，而對(duì)于其見的血紅蛋白病，如 地中海貧血、β 地中海貧血等，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)

圖 1.2 β 地中海貧血發(fā)病機(jī)制Fig 1.2 The pathogenesis of β thalassemia因此，第一部分?jǐn)M研究：（1）適于規(guī)�；Y查的標(biāo)本制備。一項(xiàng)好的疾方法要求取材容易，標(biāo)本便于保存，可長(zhǎng)距離運(yùn)輸。干血濾紙片標(biāo)本僅需樣即可制備，試驗(yàn)前處理簡(jiǎn)單，適應(yīng)于疾病規(guī)模化篩查。（2）地中海貧血液中血紅蛋白定性、定量分析標(biāo)志物的篩選。珠蛋白鏈水解后產(chǎn)生眾多肽須找到 鏈、β 鏈各自的特征肽段，并結(jié)合突變類型，從這些特征肽段中選響應(yīng)最好的肽段，即標(biāo)志性肽段。（3）LC-MS/MS 篩查地中海貧血采樣方。（4）LC-MS/MS 篩查地中海貧血方法的臨床效能評(píng)價(jià)。好的篩查方法應(yīng)確鑒別患病與否的能力，在重復(fù)使用時(shí)應(yīng)有高的可靠性，而且檢測(cè)成本要低

圖 1.5 鏈 T1(729.4m/z)肽段的 MRM 模式鑒定Fig 1.5 Identification of peptide T1 (729.4 m/z) from globin by MRM mode.6 血紅蛋白病篩查指標(biāo)設(shè)計(jì)（1）篩查指標(biāo)設(shè)計(jì)原理運(yùn)行構(gòu)建好的 LC-MS/MS 采樣方法，得到所檢測(cè)標(biāo)本的原始數(shù)據(jù)，即儀器物的響應(yīng)值及相應(yīng)的質(zhì)荷比信息，原始數(shù)據(jù)，通過軟件分析，轉(zhuǎn)化為篩查指于臨床決策。珠蛋白基因突變引起 a 或 β 珠蛋白鏈合成缺陷，或是產(chǎn)出分子量（M）改異常珠蛋白（異常血紅蛋白�。蚴窃斐芍榈鞍祖満铣扇笔Щ虿蛔悖ǖ刂校�。實(shí)驗(yàn)時(shí)，珠蛋白鏈可以用完全酶解后的每個(gè)特征片段代表，如 β-T1 VHLTP
【參考文獻(xiàn)】

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1 彭煒;劉繼紅;;前列腺癌基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀及展望[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2017年12期

2 李燕;姚麗平;蒙丹華;韋秋芬;潘新年;王蘭秀;廖丹;;廣西地區(qū)地中海貧血在新生兒期的早期臨床特點(diǎn)分析[J];中華地方病學(xué)雜志;2017年04期

3 王燕燕;李曉輝;徐西華;;地中海貧血診治進(jìn)展與我國(guó)現(xiàn)狀[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2013年06期

4 王躍;周文生;;前列腺癌診斷方法及研究進(jìn)展[J];中華全科醫(yī)學(xué);2010年03期

5 馬麒;單玉喜;;經(jīng)直腸超聲診斷前列腺癌的研究進(jìn)展[J];中國(guó)介入影像與治療學(xué);2009年06期

本文編號(hào)：2854208