表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白是普遍存在于細胞膜的一種跨膜蛋白,與細胞的信號轉(zhuǎn)導有關(guān),研究表明EGFR在許多實體腫瘤中存在高表達或異常表達。EGFR是研究非小細胞肺癌的一個重要靶點。EGFR基因發(fā)生突變導致EGFR蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,使小分子靶向藥物如厄洛替尼(特羅凱)與EGFR結(jié)合力發(fā)生變化,結(jié)合力的減弱或增強將直接影響厄洛替尼(特羅凱)的療效。因此,肺癌患者在使用EGFR小分子靶向藥物前對EGFR基因進行突變診斷是有必要的。在本文中,采用突變擴增凝滯(amplification refractory mutation system,ARMS)技術(shù)和TaqMan探針檢測技術(shù)聯(lián)合實現(xiàn)對EGFR基因突變的檢測。采用重疊延伸法構(gòu)建29種EGFR基因突變質(zhì)粒,參考品采用質(zhì)粒與基因組DNA的混合物,質(zhì)粒采用構(gòu)建的突變型質(zhì)粒,基因組DNA采用正常人細胞中提取的基因組DNA,按照一定比例混合,使用這種混合物來模擬非小細胞肺癌患者的EGFR突變病理標本。針對不同的EGFR基因型設(shè)計了特異性的ARMS引物以及與之對應的TaqMan探針。為了方便檢測,我們將29種EGFR基因突變分為E18、E19、E20、E21,T790M,S768I共6管反應來進行檢測。本文構(gòu)建的EGFR突變檢測試劑盒,可檢測EGFR基因的29個突變,占EGFR總突變的99%以上。EGFR突變試劑盒的檢測靈敏度達到10 copies,分辨率達到1%(10~4 copies基因組背景下)。通過對109例臨床標本進行了檢測,該EGFR突變檢測試劑盒能很好的區(qū)分EGFR基因突變陽性和陰性,特異性良好。與測序法相比(檢測靈敏度10%)其靈敏度達到1%,且操作簡單、耗時短,只需2小時即可完成檢測和結(jié)果分析,更符合臨床檢測要求。
【學位單位】：長春理工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R440
【部分圖文】：

圖 1-1 WHO 癌癥致死統(tǒng)計對于女性來說，肺癌在新發(fā)現(xiàn)的癌癥中排第 3 位，死亡率更是達到了第二位，僅次乳腺癌的致死率，而且中國女性肺癌的發(fā)病率（每 10 萬婦女 20.4 例）是要高于一些洲國家女性的比率[2]。導致肺癌的因素很多，如煙草、煤炭燃燒的室內(nèi)空氣污染、爐灶和烹飪油煙等，還

圖 2.1 EGFR 基因四個外顯子 PCR 克隆電泳圖M: DNA Marker DL2000; 1-4,EGFR 基因四個外顯子 PCR 擴增產(chǎn)物取鑒定

質(zhì)粒提取電泳結(jié)果
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉詠梅;趙倩;唐源;張衍;李艷瑩;王永生;盧鈾;;EGFR-TKI治療EGFR敏感突變的晚期肺鱗癌的療效分析[J];腫瘤防治研究;2015年09期

2 鐘芳芳;唐喜玉;王璟;沈麗娟;周煒根;;運用ARMS法檢測非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變[J];昆明醫(yī)科大學學報;2015年09期

3 王迪;甄春英;劉寶剛;;T790M突變與EGFR-TKI耐藥后治療策略[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2015年19期

4 鄭鳳霞;傅芬;蔡勇;葉稱連;;EGFR、蛋白激酶B在宮頸癌中表達及EGFR胞外區(qū)基因突變的研究[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2015年07期

5 樊平;白鑫;李翔;田國慶;王曉明;;胃癌EGFR表達與EGFR基因突變的比較[J];中國醫(yī)藥導刊;2015年07期

6 荊超;陳龍;胡艷芬;謝賢和;;外周血檢測中國非小細胞肺癌患者EGFR基因突變的Meta分析[J];福建醫(yī)科大學學報;2015年03期

7 王紅;郭瑞;張力予;;TKI耐藥后針對T790M突變治療[J];中國肺癌雜志;2015年04期

8 余宗陽;莫享陽;歐陽學農(nóng);;非小細胞肺癌T細胞CTLA-4免疫靶向治療基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化性研究現(xiàn)狀的思考[J];臨床腫瘤學雜志;2015年04期

9 張紅晨;張勇;劉穎斌;全志偉;龔偉;;EGFR信號通路與膽囊癌靶向治療[J];外科理論與實踐;2015年02期

10 支修益;楊躍;王長利;何建行;高樹庚;陳海泉;張?zhí)m軍;;原發(fā)性肺癌診療規(guī)范(2015年版):外科部分[J];中國醫(yī)學前沿雜志(電子版);2015年02期

本文編號：2849985