目的:通過(guò)對(duì)貴州省某三甲醫(yī)院臨床分離的37株耐碳青霉烯類肺炎克雷伯桿菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)進(jìn)行耐藥基因型、耐藥表型檢測(cè)以及同源性分析,為預(yù)防和控制CRKP的感染和暴發(fā)流行及指導(dǎo)臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.以貴州省某三甲醫(yī)院2016年3月-2017年2月從患者痰液、血液、中段尿和腹水中分離的對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥的肺炎克雷伯菌株為研究對(duì)象,在Phoenixtm-100全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)檢測(cè)進(jìn)行細(xì)菌鑒定后,參照美國(guó)臨床和微生物標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)應(yīng)用改良Hodge試驗(yàn)進(jìn)行表型驗(yàn)證,并應(yīng)用EDTA-亞胺培南雙紙片協(xié)同試驗(yàn)對(duì)CRKP菌株產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行篩查。2.根據(jù)CLSI推薦的微量肉湯稀釋法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)13種抗生素的最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC),分析其耐藥譜。3.利用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術(shù)檢測(cè)常見(jiàn)的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯桿菌耐藥基因(包括KPC-2、GES、IMP、VIM、NDM-1、OXA-48),擴(kuò)增產(chǎn)物雙向測(cè)序后與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),確定CRKP菌株攜帶的耐藥基因型。4.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增CRKP菌株的7個(gè)管家基因(gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB、tonB),進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)。5.利用MEGA軟件對(duì)菌株進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建,并通過(guò)eBURST3.0軟件對(duì)MLST結(jié)果進(jìn)行CRKP種群結(jié)構(gòu)分析。6.分析攜帶NDM-1+KPC-2基因的菌株感染者臨床資料,對(duì)ST11組與非ST11組患者的臨床資料進(jìn)行比較。利用SPSS17.0對(duì)所得到數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,年齡、住院時(shí)間等連續(xù)變量的組間比較采用t檢驗(yàn)及非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann-Whiteney U法),其他分類變量項(xiàng)目的組間比較采用Fisher確切概率法檢驗(yàn)(P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。結(jié)果:1.共收集貴州省某三甲醫(yī)院臨床分離的CRKP菌株50株,改良Hodge實(shí)驗(yàn)表型驗(yàn)證后,37株受試菌納入研究。2.37株CRKP中有3株細(xì)菌金屬酶檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性,陽(yáng)性率為10.8%。3.微量肉湯稀釋法結(jié)果顯示:37株CRKP對(duì)碳青霉烯類藥物(亞胺培南、美羅培南)呈現(xiàn)不同程度耐藥,范圍在4~256μg/ml。對(duì)于氨基糖苷類的慶大霉素、3代頭孢菌素頭孢曲松、以及臨床上常用的抗生素聯(lián)合β-內(nèi)酰胺酶抑制劑均出現(xiàn)高水平耐藥,而對(duì)于阿米卡星,耐藥率較低,為81.1%,耐藥范圍在1~256μg/ml;對(duì)于阿奇霉素、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦,耐藥率均為97.3%。4.在37株CRKP中共檢出2種耐藥基因,分別是KPC-2基因檢出率為100%,其次有3株同時(shí)攜帶NDM-1基因,37株細(xì)菌均未檢出OXA-48,GES,IMP,VIM基因。5.MLST及分子遺傳學(xué)結(jié)果分析顯示37株CRKP菌株分為8個(gè)ST型,以ST11(25/37,67.6%)為主,其次為ST789(4/37,10.8%),ST524(2/37,5.4%);ST35、ST29、ST1066及ST244各1株。另外,ST2792(2/37,5.4%)為新ST型并被PubMlst數(shù)據(jù)庫(kù)確認(rèn)收錄。6.種群結(jié)構(gòu)分析提示8個(gè)ST型可分為5個(gè)克隆型(ST29,ST35,ST244,ST11,ST1066)和1個(gè)CC11克隆復(fù)合體(ST11、ST29、ST35、ST224、ST524、ST1066及ST2792),其中ST789為單個(gè)型。7.臨床數(shù)據(jù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),ST11型組與非ST11型組在年齡、性別、感染途徑、抗生素使用情況以及住院時(shí)間等項(xiàng)目上并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;同時(shí)攜帶KPC-2及NDM-1基因的菌株感染患者僅有3例,共同的臨床表現(xiàn)主要為基礎(chǔ)疾病更為嚴(yán)重,住院期間進(jìn)行過(guò)侵入性操作和使用過(guò)多種抗生素聯(lián)合治療,而最終均死亡。結(jié)論:1.KPC-2是該三甲醫(yī)院分離的CRKP中最流行的耐藥基因型。2.ST11型為該醫(yī)院CRKP最流行的克隆型,新發(fā)現(xiàn)的ST2972與其為同一克隆系。在同一區(qū)域不同時(shí)間可能存在相同基因型或克隆群的CRKP的流行,臨床及相關(guān)檢驗(yàn)科室需加強(qiáng)監(jiān)測(cè),避免耐藥菌株的播散。3.細(xì)菌的克隆型并非影響其耐藥性及預(yù)后等臨床相關(guān)情況的重要因素。4.CRKP菌株耐藥性強(qiáng),耐藥種類多,加強(qiáng)耐藥菌株的監(jiān)測(cè)刻不容緩。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R446.5
【部分圖文】：

CRKP菌株在MH瓊脂平板中生長(zhǎng)Fig.1-1TheCRKPstrainwasgrowingonMHplate挑取培養(yǎng)基中同一單一菌落分別接種于LB液體培養(yǎng)基37℃增菌過(guò)夜（圖

挑取瓊脂平板中單一菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中增菌過(guò)夜Fig.1-2PickasinglecolonyintoLBliquidmediumtogrowovernight

改良霍奇實(shí)驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】

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1 豆清婭;鄒明祥;李春輝;李軍;胡詠梅;王海晨;吳安華;;耐亞胺培南肺炎克雷伯菌的耐藥機(jī)制研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2016年13期

2 杭欣;張波;;耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌易感因素分析[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2016年05期

3 毛彩萍;樊t

本文編號(hào)：2834913