目的:傳統(tǒng)的臨床微生物檢測(cè)方法需要24~48小時(shí),大大降低了臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)病原微生物快速檢測(cè)和鑒定的有效性。同時(shí),對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員的工作經(jīng)驗(yàn)、操作技能和專業(yè)知識(shí)要求極高。此外,近年來(lái)由于廣譜抗菌藥物的濫用,臨床病原微生物的耐藥率逐年增加。這些都將導(dǎo)致在疾病的感染早期不能選擇合適的治療方法而使疾病初始治療不足。因此,快速檢測(cè)和鑒定臨床病原微生物對(duì)疾病的發(fā)病率、死亡率和患者的住院時(shí)間有重要的影響。在臨床醫(yī)學(xué)中,迅速有效地識(shí)別出病原菌的能力受到了高度重視,但這仍然是臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室面臨的挑戰(zhàn)。近年來(lái),拉曼光譜技術(shù)因其快速、靈敏、無(wú)標(biāo)記、無(wú)創(chuàng)、受水干擾小等獨(dú)特優(yōu)勢(shì),在生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域不斷出現(xiàn)新的拓展。本文應(yīng)用共聚焦顯微拉曼光譜技術(shù)檢測(cè)和鑒定臨床病原微生物,探討其在臨床病原微生物快速檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法:(1)利用共聚焦顯微拉曼光譜對(duì)過(guò)夜培養(yǎng)的10株標(biāo)準(zhǔn)純菌株進(jìn)行檢測(cè),包括革蘭陰性菌:大腸埃希菌(ATCC 25922)、鮑曼不動(dòng)桿菌(ATCC 19606)、肺炎克雷伯菌(ATCC 700603);革蘭陽(yáng)性菌:金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)、蘇云金芽孢桿菌(ATCC 10792)、蠟樣芽孢桿菌(ATCC 1778)、枯草芽孢桿菌(ATCC6633);真菌:白色念珠菌(ATCC 10231)、熱帶念珠菌(ATCC 750)、光滑念珠菌(ATCC 64677);(2)將鮑曼不動(dòng)桿菌(ATCC 19606)和大腸埃希菌(ATCC700603)等比例混合過(guò)夜培養(yǎng),應(yīng)用共聚焦顯微拉曼光譜對(duì)混合培養(yǎng)物進(jìn)行檢測(cè)分析;(3)將實(shí)驗(yàn)中獲得的拉曼光譜聯(lián)合主成分分析(principal component analysis,PCA)和層次聚類分析(hierarchical cluster analysis,HCA)多變量化學(xué)計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行分析。結(jié)果:1.應(yīng)用共聚焦顯微拉曼光譜技術(shù)可快速獲得革蘭陰性菌(大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌)、革蘭陽(yáng)性菌(蘇云金芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌)及真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌)的拉曼特征鋒,光譜之間可以通過(guò)肉眼進(jìn)行區(qū)分。2.同一種病原菌種內(nèi)之間通過(guò)多變量化學(xué)計(jì)量學(xué)方法分析獲得了很好的區(qū)分。同時(shí),實(shí)驗(yàn)中的革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌和真菌的拉曼光譜之間實(shí)現(xiàn)了良好的聚類。3.拉曼光譜技術(shù)對(duì)混合菌的檢測(cè)也顯示出了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),對(duì)大腸埃希菌和鮑曼不動(dòng)桿菌的混合培養(yǎng)物實(shí)現(xiàn)了良好的鑒定。結(jié)論:應(yīng)用共聚焦顯微拉曼光譜技術(shù)檢測(cè)和鑒定病原微生物,可獲得單個(gè)細(xì)胞的拉曼光譜。將拉曼光譜技術(shù)與多變量化學(xué)計(jì)量學(xué)分析方法結(jié)合,使10種病原菌獲得了很好的分類。共聚焦顯微拉曼光譜技術(shù)對(duì)臨床病原微生物的快速檢測(cè)具有很好的應(yīng)用前景。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R446.5
【部分圖文】：

共聚焦顯微拉曼光譜儀對(duì)單個(gè)細(xì)胞的檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】

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