目的:根據(jù)國(guó)際疼痛協(xié)會(huì)的最新定義:疼痛是一種由組織損傷或潛在的組織損傷引起的相關(guān)感覺(jué)、情緒、認(rèn)知和社會(huì)維度的痛苦體驗(yàn),其中痛的情緒情感反應(yīng)現(xiàn)在被認(rèn)為是與感覺(jué)分辨不同的重要疼痛組成,尤其見(jiàn)于持續(xù)頑固性疼痛。前扣帶皮層(ACC)腦區(qū),特別是其吻側(cè)部(rACC)被認(rèn)為是情感回路的關(guān)鍵部分。許多研究表明,電針刺激可以緩解痛感覺(jué),而我們之前的研究表明,電針刺激也可以緩解痛的厭惡情緒(痛情緒),但其機(jī)制目前尚不清楚。眾所周知,電針刺激能激活內(nèi)源性阿片系統(tǒng)來(lái)緩解痛感覺(jué),因此我們推測(cè),電針刺激可以通過(guò)激活rACC神經(jīng)元上的μ-阿片受體減弱痛厭惡情緒。本研究將利用CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛刺激與可辨別的環(huán)境匹配所致的條件性位置回避模型,通過(guò)大鼠的行為學(xué)觀察和在體多通道電生理記錄rACC腦區(qū)神經(jīng)元放電活動(dòng),結(jié)合western-blot蛋白檢測(cè),對(duì)電針刺激緩解慢性炎性痛所致的痛厭惡情緒進(jìn)行探索。方法:1.建立CFA誘導(dǎo)的條件性位置回避模型(C-CPA)利用CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛刺激與特定的環(huán)境進(jìn)行匹配,建立起條件性位置回避模型(C-CPA)。2.檢測(cè)熱縮足反射潛伏期(Paw Withdrawal Latency,PWL)先將熱板溫度升至50℃,然后把大鼠放進(jìn)熱板刺激儀內(nèi),觀察大鼠出現(xiàn)縮足或者舔左側(cè)腳掌的現(xiàn)象,并記錄時(shí)間,重復(fù)三次,每次間隔15-20min,取三次記錄數(shù)值的平均值。3.電針刺激大鼠腳掌注射完CFA/NS后,把針灸針扎入大鼠雙側(cè)環(huán)跳穴(GB30)位置上,將針灸針連接到電針儀,設(shè)定好參數(shù)打開(kāi)電源進(jìn)行電針刺激。4.在體多通道電生理技術(shù)觀察大鼠厭惡情緒觀察并記錄給藥前后rACC腦區(qū)神經(jīng)元放電的活動(dòng)。5.蛋白免疫印跡(western blot)取大鼠rACC腦區(qū)組織樣本,應(yīng)用western blot技術(shù)檢測(cè)大鼠rACC內(nèi)μ-阿片受體和NMDA受體三個(gè)亞基NR1、NR2A和NR2B的磷酸化水平。6.免疫熒光染色通過(guò)免疫熒光檢測(cè)到rACC神經(jīng)元上μ-阿片受體和NMDA受體的三個(gè)亞基NR1、NR2A和NR2B的共表達(dá)。結(jié)果:1.大鼠rACC內(nèi)μ-阿片受體和NR1、NR2A、NR2B的共表達(dá)。通過(guò)免疫熒光檢測(cè)到ACC神經(jīng)元上μ-阿片受體和NMDA受體的亞基NR1、NR2A、NR2B分別共表達(dá)于同一神經(jīng)元。2.CFA誘導(dǎo)的持續(xù)疼痛模型及條件性位置規(guī)避模型(C-CPA)的建立大鼠左側(cè)腳掌注射CFA組與注射N(xiāo)S組相比較,注射CFA組大鼠PWL值在處理后第三天與第一天基礎(chǔ)值相比顯著縮短(P0.05);腳掌注射N(xiāo)S組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間和在第一天停留的時(shí)間相比無(wú)顯著差異(P0.05),注射CFA組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間比第一天停留的時(shí)間顯著縮短(P0.05),注射CFA組比注射N(xiāo)S組的回避分?jǐn)?shù)大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.05)。3.電針刺激可以緩解CFA誘導(dǎo)的條件性位置回避(C-CPA)反應(yīng)。假電針刺激組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間比第一天停留的時(shí)間顯著縮短(P0.05),真電針刺激組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間和在第一天停留的時(shí)間相比無(wú)顯著差異(P0.05),假電針刺激組比真電針刺激組的回避分?jǐn)?shù)大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.05)。4.電針刺激不改變CFA引起的熱痛行為。假電針(shamEA)刺激組與真電針(EA)刺激組,第三天測(cè)量大鼠的熱痛行為反應(yīng),PWL值之間無(wú)顯著差異(P0.05)。5.電針激活rACC內(nèi)μ-阿片受體下調(diào)p-NR1、p-NR2A、p-NR2B的水平。真電針刺激組與假電針刺激組相比,μ-阿片受體蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.05),而p-NR1、p-NR2A、p-NR2B蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05)。6.電針抑制CFA誘導(dǎo)rACC腦區(qū)痛側(cè)放電頻率升高的作用假電針刺激組,條件匹配后第三天痛側(cè)與非痛側(cè)相比,神經(jīng)元放電頻率顯著增強(qiáng)(P0.05),真電針刺激組,條件匹配后第三天痛側(cè)與非痛側(cè)相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.05)。7.ACC內(nèi)注射μ-阿片受體拮抗劑CTOP反轉(zhuǎn)了電針刺激減弱大鼠厭惡情緒的作用大鼠腳掌注射CFA/NS,在ACC內(nèi)給予NS或者μ-阿片受體拮抗劑CTOP,再進(jìn)行電針刺激。注射生理鹽水組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間和在第一天停留的時(shí)間相比無(wú)顯著差異(P0.05),注射CFA和生理鹽水組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間和在第一天停留的時(shí)間相比無(wú)顯著差異(P0.05),注射2 nmol/μl CTOP組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間和在第一天停留的時(shí)間相比無(wú)顯著差異(P0.05),注射5/10/20 nmol/μl CTOP組,大鼠第三天在痛側(cè)的停留時(shí)間比第一天停留的時(shí)間顯著縮短(P0.05)且回避分?jǐn)?shù)比其余兩組明顯增大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.05)。8.rACC內(nèi)注射μ-阿片受體拮抗劑CTOP對(duì)p-NR1、p-NR2A、p-NR2B水平的影響真電針刺激組與假電針刺激組相比,p-NR1、p-NR2A、p-NR2B蛋白量顯著降低(P0.05);注射5/10/20 nmol/μl CTOP組與注射N(xiāo)S組和2 nmol/μl CTOP組相比,p-NR1、p-NR2A、p-NR2B蛋白量顯著升高(P0.05)。9.rACC內(nèi)注射μ-阿片受體拮抗劑CTOP反轉(zhuǎn)了電針抑制CFA誘導(dǎo)rACC腦區(qū)痛側(cè)放電頻率升高的作用注射生理鹽水組,條件匹配后第三天痛側(cè)與非痛側(cè)相比,神經(jīng)元放電頻率無(wú)顯著差異(P0.05),注射CFA和生理鹽水組,條件匹配后第三天痛側(cè)與非痛側(cè)相比,神經(jīng)元放電頻率無(wú)顯著差異(P0.05),注射低劑量2 nmol/μl CTOP組,條件匹配后第三天痛側(cè)與非痛側(cè)相比,神經(jīng)元放電頻率無(wú)顯著差異(P0.05),注射5/10/20 nmol/μl CTOP組,條件匹配后第三天痛側(cè)神經(jīng)元放電頻率與非痛側(cè)相比顯著增強(qiáng)(P0.05),且與其余兩個(gè)組第三天的痛側(cè)神經(jīng)元放電頻率相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.05)。結(jié)論:大鼠腳掌注射CFA引起rACC腦區(qū)p-NR1、p-NR2A和p-NR2B水平增高是神經(jīng)元放電活動(dòng)增強(qiáng)的基礎(chǔ),而后者又是產(chǎn)生CPA反應(yīng)的原因,引起大鼠的痛情緒;給予電針刺激,激活了rACC腦區(qū)μ-阿片受體后,NR1、NR2A和NR2B的磷酸化水平隨之降低,從而逆轉(zhuǎn)了神經(jīng)元電活動(dòng)和大鼠CPA反應(yīng)的增強(qiáng),抑制了痛厭惡情緒的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R402
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文置回避（CPA）裝置介紹et al[20]和 Zhang Y et al[21]的設(shè)計(jì)結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的條件見(jiàn)圖 1。一無(wú)蓋無(wú)底的長(zhǎng)盒（60cm×15cm×25cm），將長(zhǎng)框平均分成兩個(gè)室，一側(cè)室貼有藍(lán)色豎條紋，一的鋼絲網(wǎng)眼孔一側(cè)較疏松，一側(cè)較密集，可使大鼠對(duì)行的過(guò)程中，裝置外懸掛一個(gè) LED 燈，能夠使其中之分。裝置外安裝有攝像頭，并與電腦連接，記錄大

底部的鋼絲網(wǎng)眼孔一側(cè)較疏松，一側(cè)較密集，可使大鼠對(duì)兩室進(jìn)行辨別區(qū)分。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的過(guò)程中，裝置外懸掛一個(gè) LED 燈，能夠使其中一室與另一室的光線(xiàn)有明暗之分。裝置外安裝有攝像頭，并與電腦連接，記錄大鼠在兩室停留的時(shí)間。圖 1 CPA 裝置實(shí)物圖(2)CPA 行為訓(xùn)練過(guò)程C-CPA 訓(xùn)練過(guò)程分三天進(jìn)行，見(jiàn)圖 2：

行為學(xué)和蛋白印跡的數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，電生理學(xué)數(shù)據(jù)不符合參數(shù)檢驗(yàn)的要求，采用中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示。行為學(xué)部分，同一組前后比較采用配對(duì)樣本 T 檢驗(yàn)，兩不同組之間比較采用獨(dú)立樣本 T 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）。蛋白印跡部分，采用單因素方差分析（ANOVA）。電生理學(xué)部分，同一組前后對(duì)比采用 Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)，兩獨(dú)立樣本之間比較采用 Mann-Whitney 秩和檢驗(yàn)，多重比較采用 LSD 分析。P<0.05 時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。2 結(jié) 果2.1.大鼠 rACC 內(nèi)μ-阿片受體和 NR1、NR2A、NR2B 的共表達(dá)通過(guò)免疫熒光檢測(cè)到rACC神經(jīng)元上μ-阿片受體和NMDA受體的亞基NR1、NR2A、NR2B 分別共表達(dá)于同一神經(jīng)元，見(jiàn)圖 3。μ-opioid receptor MergeNMDA

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本文編號(hào)：2821635