液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),尤其是超高效液相色譜聯(lián)用高分辨質(zhì)譜技術(shù)是復雜生物樣品中目標成分定性定量分析的有力工具。超高效液相色譜極大程度提高了色譜的分離能力和效率,為生物樣品中各成分的有效分離提供保證;高分辨質(zhì)譜提供精確的分子量和同位素分布模式,結(jié)合目標成分的二級質(zhì)譜碎片離子特征,提高目標成分定性定量分析的可靠性和準確性。本論文運用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜技術(shù),針對不同的生物樣品(血漿和秀麗線蟲提取物)進行定性定量分析和代謝組學研究。論文第一部分開發(fā)了一種精確測定血漿中內(nèi)、外源性葡萄糖濃度的新方法。傳統(tǒng)測定血糖濃度的方法多數(shù)不能區(qū)分內(nèi)、外源性葡萄糖,并且葡萄糖質(zhì)譜檢測離子化效率較低,限制了液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在葡萄糖定量分析方面的應用。本文采用選擇性的衍生化反應結(jié)合同位素稀釋液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),利用D-[13C6]葡萄糖標記物作為外源性葡萄糖的示蹤物質(zhì),有效改善葡萄糖質(zhì)譜檢測離子化效率,實現(xiàn)血漿中內(nèi)、外源性葡萄糖濃度的同時定量。實驗中采用0.5-20 m M天然葡萄糖(覆蓋健康個體和高血糖個體生理血糖濃度),0.035 m M標記葡萄糖(示蹤物和內(nèi)標物),考察此線性范圍分析方法的日內(nèi)和日間精密度、回收率及穩(wěn)健性。結(jié)果表明回歸曲線線性相關(guān)系數(shù)為0.9969,日內(nèi)、日間精密度均較好(RSDs%5.16%),回收率為85.96-95.92%,該方法具有樣品消耗少(20μL,甚至更少)、靈敏度高、定量準確度高、穩(wěn)健性好等優(yōu)點。論文第二部分內(nèi)容是運用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),從代謝組學的角度研究二甲雙胍對秀麗隱桿線蟲(簡稱秀麗線蟲)的抗衰老作用。代謝組學處于系統(tǒng)生物學的終端,能更敏感的捕捉到機體受刺激或擾動前后體現(xiàn)在代謝物水平的變化。本研究首先培養(yǎng)秀麗線蟲并進行給藥處理、收集線蟲,優(yōu)化線蟲體內(nèi)代謝物的提取方法;采集LC-MS數(shù)據(jù),對數(shù)據(jù)進行預處理、主成分分析和偏最小二乘判別分析及獨立樣本t檢驗,篩選出具有顯著性差異的13個變量,并初步鑒定差異代謝物結(jié)構(gòu);結(jié)果表明差異代謝物均為溶血磷脂酰乙醇胺類化合物,二甲雙胍給藥處理導致線蟲體內(nèi)該類化合物含量上調(diào)。本論文基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),建立復雜生物樣品(血漿和秀麗線蟲提取物)分析的新方法和研究模式,拓展了LC-MS的適用性,為后續(xù)運用LC-MS進行定性定量分析和代謝組研究奠定良好的基礎(chǔ);并將這些方法應用于:(1)健康和II型糖尿病食蟹猴血漿中內(nèi)、外源性葡萄糖的同時精確定量,為葡萄糖代謝相關(guān)疾病的診斷和預防提供客觀依據(jù);(2)秀麗線蟲代謝組學的初步研究,以秀麗線蟲作為模式生物,從代謝組學的角度研究二甲雙胍的抗衰老作用,對于二甲雙胍抗衰老作用機制的研究具有重要的指導意義。
【學位單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：O657.63;R446
【部分圖文】：

復雜生物樣品LC-MS分析流程圖

生物體內(nèi)葡萄糖的來源及代謝Figure3.Sourcesandmetabolismofglucoseinorganisms

糖類化合物的還原胺化反應[1]

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 孔宏偉;戴偉東;許國旺;;基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的代謝組學研究中代謝物的結(jié)構(gòu)鑒定進展[J];色譜;2014年10期

2 許國旺;路鑫;楊勝利;;代謝組學研究進展[J];中國醫(yī)學科學院學報;2007年06期

3 唐惠儒;王玉蘭;;代謝組學:一個迅速發(fā)展的新興學科(英文)[J];生物化學與生物物理進展;2006年05期

本文編號：2816636