發(fā)布時(shí)間：2020-09-11 11:51

　　 液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),尤其是超高效液相色譜聯(lián)用高分辨質(zhì)譜技術(shù)是復(fù)雜生物樣品中目標(biāo)成分定性定量分析的有力工具。超高效液相色譜極大程度提高了色譜的分離能力和效率,為生物樣品中各成分的有效分離提供保證;高分辨質(zhì)譜提供精確的分子量和同位素分布模式,結(jié)合目標(biāo)成分的二級(jí)質(zhì)譜碎片離子特征,提高目標(biāo)成分定性定量分析的可靠性和準(zhǔn)確性。本論文運(yùn)用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜技術(shù),針對(duì)不同的生物樣品(血漿和秀麗線蟲(chóng)提取物)進(jìn)行定性定量分析和代謝組學(xué)研究。論文第一部分開(kāi)發(fā)了一種精確測(cè)定血漿中內(nèi)、外源性葡萄糖濃度的新方法。傳統(tǒng)測(cè)定血糖濃度的方法多數(shù)不能區(qū)分內(nèi)、外源性葡萄糖,并且葡萄糖質(zhì)譜檢測(cè)離子化效率較低,限制了液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在葡萄糖定量分析方面的應(yīng)用。本文采用選擇性的衍生化反應(yīng)結(jié)合同位素稀釋液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),利用D-[13C6]葡萄糖標(biāo)記物作為外源性葡萄糖的示蹤物質(zhì),有效改善葡萄糖質(zhì)譜檢測(cè)離子化效率,實(shí)現(xiàn)血漿中內(nèi)、外源性葡萄糖濃度的同時(shí)定量。實(shí)驗(yàn)中采用0.5-20 m M天然葡萄糖(覆蓋健康個(gè)體和高血糖個(gè)體生理血糖濃度),0.035 m M標(biāo)記葡萄糖(示蹤物和內(nèi)標(biāo)物),考察此線性范圍分析方法的日內(nèi)和日間精密度、回收率及穩(wěn)健性。結(jié)果表明回歸曲線線性相關(guān)系數(shù)為0.9969,日內(nèi)、日間精密度均較好(RSDs%5.16%),回收率為85.96-95.92%,該方法具有樣品消耗少(20μL,甚至更少)、靈敏度高、定量準(zhǔn)確度高、穩(wěn)健性好等優(yōu)點(diǎn)。論文第二部分內(nèi)容是運(yùn)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),從代謝組學(xué)的角度研究二甲雙胍對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)(簡(jiǎn)稱(chēng)秀麗線蟲(chóng))的抗衰老作用。代謝組學(xué)處于系統(tǒng)生物學(xué)的終端,能更敏感的捕捉到機(jī)體受刺激或擾動(dòng)前后體現(xiàn)在代謝物水平的變化。本研究首先培養(yǎng)秀麗線蟲(chóng)并進(jìn)行給藥處理、收集線蟲(chóng),優(yōu)化線蟲(chóng)體內(nèi)代謝物的提取方法;采集LC-MS數(shù)據(jù),對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理、主成分分析和偏最小二乘判別分析及獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),篩選出具有顯著性差異的13個(gè)變量,并初步鑒定差異代謝物結(jié)構(gòu);結(jié)果表明差異代謝物均為溶血磷脂酰乙醇胺類(lèi)化合物,二甲雙胍給藥處理導(dǎo)致線蟲(chóng)體內(nèi)該類(lèi)化合物含量上調(diào)。本論文基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),建立復(fù)雜生物樣品(血漿和秀麗線蟲(chóng)提取物)分析的新方法和研究模式,拓展了LC-MS的適用性,為后續(xù)運(yùn)用LC-MS進(jìn)行定性定量分析和代謝組研究奠定良好的基礎(chǔ);并將這些方法應(yīng)用于:(1)健康和II型糖尿病食蟹猴血漿中內(nèi)、外源性葡萄糖的同時(shí)精確定量,為葡萄糖代謝相關(guān)疾病的診斷和預(yù)防提供客觀依據(jù);(2)秀麗線蟲(chóng)代謝組學(xué)的初步研究,以秀麗線蟲(chóng)作為模式生物,從代謝組學(xué)的角度研究二甲雙胍的抗衰老作用,對(duì)于二甲雙胍抗衰老作用機(jī)制的研究具有重要的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：O657.63;R446
【部分圖文】：

復(fù)雜生物樣品LC-MS分析流程圖

生物體內(nèi)葡萄糖的來(lái)源及代謝Figure3.Sourcesandmetabolismofglucoseinorganisms

糖類(lèi)化合物的還原胺化反應(yīng)[1]

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 孔宏偉;戴偉東;許國(guó)旺;;基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的代謝組學(xué)研究中代謝物的結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)展[J];色譜;2014年10期

2 許國(guó)旺;路鑫;楊勝利;;代謝組學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2007年06期

3 唐惠儒;王玉蘭;;代謝組學(xué):一個(gè)迅速發(fā)展的新興學(xué)科(英文)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2006年05期

本文編號(hào)：2816636