第一部分耐氟康唑光滑念珠菌MSH2基因突變分析中文摘要目的分析臨床分離157株光滑念珠菌對5種抗真菌藥物的耐藥率,同時(shí)探討臨床分離的光滑念珠菌MSH2基因突變與氟康唑耐藥的關(guān)系。方法收集2017年7月-2018年7月安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科從臨床標(biāo)本分離獲得的157株光滑念珠菌,并對5種抗真菌藥物的抗性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。從上述菌株中隨機(jī)挑取19株氟康唑耐藥菌株、15株劑量依賴性敏感(S-DD)菌株以及23株敏感菌株,用微量稀釋法對藥物敏感性進(jìn)行驗(yàn)證,對MSH2基因進(jìn)行Sanger測序檢測,并將測序結(jié)果與Gen Bank中已發(fā)表的序列進(jìn)行比對,分析每組MSH2基因突變頻率及相關(guān)突變位點(diǎn)。結(jié)果157株光滑念珠菌對伊曲康唑耐藥率最高,為27.4%,對氟康唑耐藥率為22.9%,對伏立康唑、兩性霉素B耐藥率分別為5.7%、2.5%,所有菌株對5-氟胞嘧啶不耐藥。與敏感組比較,耐藥組、S-DD組MSH2基因突變頻率顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0167)。檢測到MSH2基因存在G622A/A2669T、G715T這3個(gè)突變位點(diǎn),對應(yīng)P208S/N890I、V239L 3個(gè)氨基酸置換位點(diǎn);且P208S/N890I僅出現(xiàn)在耐藥菌株中。結(jié)論臨床分離的光滑念珠菌對唑類耐藥率比兩性霉素B、5-氟胞嘧啶高;光滑念珠菌MSH2基因突變與氟康唑耐藥有一定關(guān)系。第二部分光滑念珠菌MSH2基因m RNA水平的分析目的探討臨床分離的光滑念珠菌MSH2基因m RNA水平與氟康唑耐藥的關(guān)系,進(jìn)一步探討MSH2基因突變與氟康唑耐藥的關(guān)系。方法將第一部分實(shí)驗(yàn)菌株的19株氟康唑耐藥菌株與23株敏感菌株,通過超聲波細(xì)胞破碎機(jī)破壁,Trizol試劑提取總RNA,以標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC MYA-2950為對照組,實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測實(shí)驗(yàn)菌株MSH2基因m RNA的相對量,使用統(tǒng)計(jì)學(xué)原理,分析光滑念珠菌MSH2基因m RNA的相對量在氟康唑耐藥組與敏感組之間是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,同時(shí)MSH2基因突變組與未突變組之間的MSH2基因m RNA的相對量是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增每個(gè)實(shí)驗(yàn)菌株,氟康唑耐藥組MSH2基因m RNA的相對量2-ΔΔCT值與敏感組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在耐藥組MSH2基因相對低水平轉(zhuǎn)錄;15株MSH2基因未突變菌株中,MSH2基因m RNA低水平的菌株所占百分比為33.33%(5/15),27株MSH2基因突變菌株中,MSH2基因m RNA低水平的菌株所占為88.89%(24/27),MSH2基因未突變組出現(xiàn)m RNA低水平的頻率(33.33%)與MSH2基因突變組(88.89%)相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論氟康唑耐藥與MSH2基因m RNA低水平有關(guān),MSH2基因突變的菌株較多會出現(xiàn)MSH2基因低水平轉(zhuǎn)錄,這可能MSH2基因在光滑念珠菌耐藥機(jī)制中發(fā)揮作用的分子基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R446.5
【部分圖文】：

17圖 1 MSH2 基因分段 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果Fig. 1 The results of agarose gel electrophoresis for PCR product of MSH geneA:MSH2 基因片段 1;B:MSH2 基因片段 2;C:MSH2 基因片段 3;M：DNA Marker，

圖 2 基因突變位點(diǎn)及氨基酸序列比對圖Fig. 2 Gene mutation site and amino acid sequence alignment map19 株氟康唑耐藥菌株有 17 株發(fā)生 MSH2 基因突變，2 株未出現(xiàn) MSH變非同義突變，其中涉及 C622T/ A2669T 突變 2 株，涉及 G715T 突變 1

MSH2基因、ACT1基因擴(kuò)增曲線

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