研究目的:1.通過(guò)對(duì)2012～2015年江蘇省人源、食品源以及動(dòng)物源腸炎沙門(mén)氏菌的耐藥情況測(cè)試,耐藥譜分析,研究腸炎沙門(mén)氏菌的耐藥特點(diǎn)。為指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理選擇使用抗生素,同時(shí)為有效預(yù)防沙門(mén)氏菌感染以及控制疾病流行提供科學(xué)參考。2.根據(jù)腸炎沙門(mén)氏菌β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、氯霉素類(lèi)、磺胺類(lèi)/甲氧芐胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)以及喹諾酮/氟喹諾酮類(lèi)耐藥表型以及相關(guān)耐藥基因檢測(cè)結(jié)果,了解耐藥基因在腸炎沙門(mén)氏菌中的分布情況以及耐藥表型和基因型之間的關(guān)系,分析探索多重耐藥性腸炎沙門(mén)氏菌產(chǎn)生的原因。3.利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)技術(shù)對(duì)腸炎沙門(mén)氏菌進(jìn)行分子分型及溯源分析,比較不同來(lái)源腸炎沙門(mén)氏菌同源性,確定江蘇省腸炎沙門(mén)氏菌主要分子型別以及分子型別與耐藥表型及基因型間關(guān)系,為監(jiān)測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌流行及疾病暴發(fā)溯源提供參考。研究方法:1.參照GB4789.4-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》中方法,對(duì)2012～2015年江蘇省地區(qū)動(dòng)物源(雞、豬專(zhuān)項(xiàng))基線調(diào)查專(zhuān)項(xiàng)、食源性疾病哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)腹瀉病人及食品行業(yè)從業(yè)人員健康體檢共93株腸炎沙門(mén)氏菌分離株進(jìn)行血清型鑒定;參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所CLSI標(biāo)準(zhǔn)推薦的Kirby-Bauer(K-B)紙片法對(duì)腸炎沙門(mén)氏菌進(jìn)行β-內(nèi)酰胺類(lèi)(氨芐西林、阿莫西林/克拉維素、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢吡肟)、氨基糖苷類(lèi)(鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星)、喹諾酮類(lèi)(萘啶酸、環(huán)丙沙星)、磺胺類(lèi)(磺胺甲惡唑)、氯霉素類(lèi)(氯霉素)、四環(huán)素類(lèi)(四環(huán)素),共計(jì)16種抗生素敏感性試驗(yàn)。2.通過(guò)PCR方法檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌分離株β-內(nèi)酰胺類(lèi)(blaTEM-1-like、blaCTX-M、blaOXA-1-like、blaCMY-2、blaPSE-1、blaSHV)、氨基糖苷類(lèi)(aadA1-like、aadA2、aadB、cC4、aac(6')-1b、氯霉素類(lèi)(catA1、cmlA1、floR)、甲氧芐胺類(lèi)(dfrA1-like、dfrA12、dfrA17)、磺胺類(lèi)(sul1、sul2、sul3)、四環(huán)素類(lèi)(tet(A)、tet(G)、tet(B)、tet(C))以及喹諾酮/氟喹諾酮類(lèi)(qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD)共29種耐藥基因攜帶情況。3.參照國(guó)際Pu1seNet沙門(mén)氏菌脈沖場(chǎng)凝膠電泳分子分型標(biāo)準(zhǔn)操作方案,對(duì)所有受試腸炎沙門(mén)氏菌進(jìn)行分子分型。選擇限制性?xún)?nèi)切酶XbaI消化菌株基因組,經(jīng)脈沖場(chǎng)凝膠電泳后,使用凝膠成像系統(tǒng)獲取電泳圖像,通過(guò)國(guó)家致病菌識(shí)別網(wǎng)軟件對(duì)圖像條帶進(jìn)行處理、分析。研究結(jié)果:1.耐藥表型結(jié)果:腸炎沙門(mén)氏菌對(duì)萘啶酸、氨芐西林、鏈霉素以及頭孢哌酮耐藥率較高,其耐藥率分別為 93.55%(87/93)、74.19%(69/93)、65.59%(61/93)和 51.61%(48/93)。93株腸炎沙門(mén)氏菌對(duì)16種抗生素共形成22種耐藥譜,菌株主要表現(xiàn)對(duì)4～5種抗生素耐藥;部分菌株形成固定耐藥譜型:AMP-CFP-STR-NA-TE(21/93)、AMP-STR-NA-TE(15/93)、AMP-CFP-STR-NA(10/93),對(duì)3類(lèi)及3類(lèi)以上藥物耐藥即MDR多重耐藥菌株比例為75.27%(70/93)。2.耐藥基因PCR檢測(cè)結(jié)果:sul2和sul3基因攜帶率最高,超過(guò)80%,其次為blaTEM-1-like、tet(A)、tet(G)、blaCTX-M和aac(6')-1b基因,檢出率分別為 75.27%、40.86%、35.48%、12.90%和9.8%。sul1基因與磺胺類(lèi)耐藥表型符合率為93.55%,blaTEM-1-like基因與青霉素類(lèi)耐藥表型符合率為91.40%,tet(A)、tet(G)與四環(huán)素耐藥表型符合率為66.67%。3.PFGE分型結(jié)果:PFGE聚類(lèi)分析可分為A和B兩個(gè)大聚類(lèi),共形成PFGE-XbaⅠ 28個(gè)型別。B19和B23為主要PFGE型別,來(lái)源于不同地區(qū),且多數(shù)菌株來(lái)源于動(dòng)物源(雞源)。B19型別菌株耐藥表型主要為AMP-CFP-STR-NA-TE,攜帶的耐藥基因主要為blaTEM-1-like、sul2、sul3以及tet(A);B23型別菌株耐藥表型主要為AMP-CFP-NA-TE,攜帶的耐藥基因主要為blaTEM-1-like、sul2、sul3、tet(A)和tet(G)。結(jié)論:1.腸炎沙門(mén)氏菌普遍對(duì)萘啶酸、氨芐西林及鏈霉素等抗生素耐藥,且多重耐藥性情況嚴(yán)重,菌株主要以耐4類(lèi)抗生素為主,最多可對(duì)10種抗生素耐藥,部分菌株形成固定型別耐藥譜型:AMP-CFP-STR-NA-TE、AMP-STR-NA-TE、AMP-CFP-STR-NA。2.耐藥基因sul2、sul3、blaTEM-like、tet(A)、tet(G)在腸炎沙門(mén)氏菌中攜帶率較高。耐藥基因與耐藥表性之間存在一定的關(guān)聯(lián)性;攜帶全部或部分耐藥基因簇blaTEM--1-like/blaCTX-M-tet(A)/tet(G)-sul1-aac(6)-Ib是導(dǎo)致腸炎沙門(mén)氏菌多重耐藥性王要原因。3.PFGE結(jié)果顯示腸炎沙門(mén)氏菌分化程度不高,優(yōu)勢(shì)PFGE型別為B19、B23,其所包含的菌株耐藥表型、基因型存在明顯相似性。溯源結(jié)果表明不同來(lái)源(人源、食品源以及動(dòng)物源)以及不同地區(qū)腸炎沙門(mén)氏菌可形成相同PFGE帶型,表明同一菌株克隆腸炎沙門(mén)氏菌,可在不同宿主及不同地區(qū)之間流行傳播。
【學(xué)位單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R446.5
【部分圖文】：

圖１－１腸炎沙門(mén)氏菌菌株多重耐藥怙況逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｍｕｔｉｌｄｒｕｇ邋ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋ｏｉ＇Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ邋ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ逡逑

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本文編號(hào)：2812305