【摘要】：失血性休克在臨床常見,失血性休克引起的細(xì)胞損傷是發(fā)生急性肺損傷、腸屏障功能障礙乃至多器官功能障礙綜合征等的重要原因,也是發(fā)展為難治性休克一個基本機制。失血性休克引起遠(yuǎn)端器官結(jié)構(gòu)損傷和功能障礙的機制受到關(guān)注。目前認(rèn)為,腸源性毒性物質(zhì)經(jīng)腸淋巴途徑回流到全身,是失血性休克導(dǎo)致無菌性多器官損傷的一個主要途徑。失血性休克后,在腸淋巴液通過胸導(dǎo)管直接流入鎖骨下靜脈、進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的過程中,血管是第一個暴露于休克腸淋巴液(post hemorrhagic shock mesenteric lymph,PHSML)的部位,PHSML引起的細(xì)胞損傷與功能障礙是失血性休克引起血管通透性增高、血管反應(yīng)性降低、器官損傷的主要原因。眾多研究表明,以減少PHSML回流為目標(biāo)的治療措施對于防治重癥休克具有積極意義。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是血管高通透性的基礎(chǔ),PHSML回流參與了失血性休克引起血管高通透性的病理過程,但詳細(xì)的分子機制,還不是非常清楚。為此,本研究應(yīng)用基因轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù),觀察PHSML對人臍靜脈血內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)基因轉(zhuǎn)錄組的影響,通過差異表達(dá)基因的聚類分析(GO)和KEGG通路富集分析,明確PHSML損傷HUVECs的主要信號分子與信號通路,希望能加深對PHSML損傷內(nèi)皮細(xì)胞分子機制的了解,以期針對PHSML為重癥失血性休克的防治提供新的思路。應(yīng)用健康雄性大鼠,常規(guī)方法建立失血性休克模型:股動脈放血,維持血壓40 mm Hg持續(xù)90 min后,液體復(fù)蘇。液體復(fù)蘇結(jié)束后,行腹部手術(shù),常規(guī)方法引流腸淋巴液,為PHSML。另取一組健康雄性大鼠,全身麻醉后,常規(guī)方法引流腸淋巴液,為正常腸淋巴液(normal mesenteric lymph,NML)。隨后,分別應(yīng)用生理鹽水(Control)、NML、PHSML(終濃度為10%)與HUVECs孵育,3 h后留取HUVECs,提取m RNA,采用新一代測序技術(shù)對三組細(xì)胞進(jìn)行測序分析。測序結(jié)果顯示,Control與NML組HUVECs的轉(zhuǎn)錄組幾乎沒有差異;相對于NML,PHSML作用后HUVECs有多個差異表達(dá)基因。進(jìn)一步應(yīng)用GO和KEGG分析PHSML與NML的差異表達(dá)基因,發(fā)現(xiàn)這些差異表達(dá)基因主要與凋亡、應(yīng)激等生物過程相關(guān),主要富集在NOD樣受體(nucleotide oligomerization domain-like receptor,NLR)信號通路、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信號通路和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)信號通路,這三條信號通路以及相關(guān)差異表達(dá)的基因均與炎癥反應(yīng)有關(guān)。為了驗證基因轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序技術(shù)發(fā)現(xiàn)的差異表達(dá)基因,應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測了BIRC3、NFKBIA、CXCL1、ICAM-1、CCL2、TNFAIP3、JUNB等7個差異表達(dá)基因的m RNA表達(dá),結(jié)果顯示這些基因的RT-PCR結(jié)果與RNA-Seq結(jié)果一致。鑒于趨化因子CCL2在細(xì)胞損傷中的作用,本文觀察了CCL2抑制劑對PHSML損傷HUVECs的影響,結(jié)果顯示,CCL2抑制劑可以顯著改善PHSML處理后HUVECs的細(xì)胞增殖狀態(tài)。通過上述研究,初步揭示了PHSML損傷內(nèi)皮細(xì)胞的機制與NLR、NF-κB、TNF信號通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)有關(guān),抑制CCL2有利于減輕PHSML引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。研究結(jié)果加深了休克腸淋巴液損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞分子機制的理解,為防治重癥失血性休克提供了新的視角。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 牛春雨;趙自剛;李繼承;陳瑞華;張靜;張玉平;孫黎;;休克淋巴液對大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用[J];分子細(xì)胞生物學(xué)報;2007年02期

本文編號：2807180