【摘要】：腺苷作為一種遍布人體細(xì)胞的內(nèi)源性核苷,在心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)中發(fā)揮著極其重要的信號(hào)功能。腺苷作為潛在的腫瘤生物標(biāo)志物,在早期監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展中有重要意義。因此,在生理?xiàng)l件下監(jiān)測(cè)腺苷濃度變化將有助于進(jìn)一步說(shuō)明它們?cè)诎┌Y臨床診斷和治療中的功能。但是傳統(tǒng)的分析方法不僅需要昂貴的儀器和復(fù)雜的操作,更是缺乏靈敏度,所以構(gòu)建高選擇性和高靈敏度的腺苷快速分析方法具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。本論文為實(shí)現(xiàn)生物樣品中痕量腺苷的檢測(cè),構(gòu)建了高選擇性和高靈敏度的熒光檢測(cè)平臺(tái)。首先利用腺苷適配體1(ABA1)標(biāo)記的Fe_3O_4磁性納米顆粒(Magnetic Nanoparticles,MNPs)作為磁性分離工具,腺苷適配體2(ABA2)標(biāo)記的Ag納米顆粒(Nanoparticles,NPs)作為信號(hào)探針,并將兩者混合形成復(fù)合探針。在目標(biāo)物腺苷的存在下,復(fù)合物探針可以特異性地識(shí)別并結(jié)合腺苷,進(jìn)而形成穩(wěn)定的三明治結(jié)構(gòu)(Fe_3O_4 MNPs-ABA1-腺苷-ABA2-Ag NPs)。將三明治結(jié)構(gòu)磁性分離并加入一定量的CdTe量子點(diǎn)(Quantum Dots,QDs)溶液,混合后測(cè)定其熒光強(qiáng)度。三明治結(jié)構(gòu)中的Ag NPs作為腺苷的標(biāo)記信號(hào),通過(guò)內(nèi)濾效應(yīng)和電子轉(zhuǎn)移與捕獲過(guò)程對(duì)CdTe QDs表現(xiàn)出強(qiáng)烈的熒光猝滅作用,最終導(dǎo)致熒光信號(hào)隨腺苷濃度的增加而逐漸下降。試驗(yàn)優(yōu)化了Fe_3O_4 MNPs-COOH的反應(yīng)濃度,ABA1的反應(yīng)濃度以及Ag NPs對(duì)CdTe QDs的猝滅時(shí)間等條件,最后通過(guò)傅立葉紅外光譜、紫外光譜、電化學(xué)方法以及高分辨透射電鏡對(duì)所制備的腺苷傳感平臺(tái)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和形貌表征以證明其成功構(gòu)建。選擇性和干擾試驗(yàn)表明所構(gòu)建的腺苷傳感平臺(tái)具有良好的選擇性。研究結(jié)果表明,在最佳試驗(yàn)條件下,當(dāng)腺苷的濃度在0.1-30 nM范圍內(nèi),構(gòu)建的生物傳感平臺(tái)的熒光猝滅程度與腺苷的濃度呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.99,檢測(cè)限為0.06 nM。在該方法成功建立的基礎(chǔ)上,采用加標(biāo)回收試驗(yàn)法,檢測(cè)三位健康志愿者尿液樣品中的腺苷含量,測(cè)定結(jié)果均在正常值范圍,且結(jié)果已用高效液相色譜法驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明構(gòu)建的腺苷傳感平臺(tái)能夠滿足復(fù)雜生物樣品中腺苷的分析測(cè)定要求,且該方法測(cè)定只需要40 min,這是迄今報(bào)道的基于適配體的檢測(cè)方法中用時(shí)最短的。該平臺(tái)以其高效率和低成本的優(yōu)勢(shì),在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和臨床診斷中監(jiān)測(cè)各種靶分子具有巨大潛力。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 黎舒懷;陶慧林;徐銘澤;覃亞福;;新型量子點(diǎn)“開(kāi)關(guān)”測(cè)定痕量諾氟沙星[J];分析化學(xué);2012年09期

本文編號(hào)：2807127