【摘要】：目的:測定磷霉素對臨床分離KPC-KP的最低抑菌濃度(MIC)。在此基礎上測定磷霉素聯(lián)合多黏菌素E、替加環(huán)素對KPC-KP的聯(lián)合藥敏及時間殺菌曲線,評價磷霉素聯(lián)合多黏菌素E、替加環(huán)素對KPC-KP的抗菌效果。根據(jù)耐藥突變選擇窗(MSW)理論,測定磷霉素、多黏菌素E、替加環(huán)素單藥及磷霉素分別聯(lián)合兩藥的防突變濃度,測定聯(lián)合用藥防止耐藥發(fā)生能力。初步探究KPC-KP對磷霉素的耐藥機制。方法:(1)使用瓊脂平板倍比稀釋法測定磷霉素對70株KPC-KP的MIC。(2)選取對磷霉素敏感的KPC-KP菌株,使用瓊脂平板倍比稀釋法測定多黏菌素E、替加環(huán)素對25株KPC-KP的MIC,使用微量棋盤稀釋法測定磷霉素分別聯(lián)合多黏菌素E、替加環(huán)素的聯(lián)合藥敏,計算FIC。根據(jù)各藥MIC及藥代動力學,測定并繪制磷霉素、多黏菌素E、替加環(huán)素及磷霉素分別聯(lián)合多黏菌素E、替加環(huán)素對6株KPC-KP的時間殺菌曲線。(3)根據(jù)前部分研究結(jié)果,使用瓊脂平板倍比稀釋法測定磷霉素、替加環(huán)素、多黏菌素E及聯(lián)合用藥對10株對磷霉素敏感KPC-KP的防突變濃度(MPC)。(4)使用PCR技術提取并測定耐藥突變菌株MurA、uhpT、glpT基因,將臨床耐藥菌、臨床敏感菌、體外實驗篩選耐藥菌進行對比。結(jié)果:臨床分離的70株KPC-KP對磷霉素敏感率為35.71%。聯(lián)合藥敏顯示磷霉素聯(lián)合多黏菌素 E 時,FIC≤0.5 占 20%,0.5FIC1 占 52%,FIC=1 占 16%,1FIC≤2占12%,磷霉素聯(lián)合替加環(huán)素時,FIC≤0.5占8%,0.5FIC1占64%,FIC=1占20%,1FIC≤2占8%,未見FIC2。時間殺菌曲線磷霉素聯(lián)合多黏菌素E、替加環(huán)素殺菌效果優(yōu)于單藥,磷霉素聯(lián)合多黏菌素E可完全清除細菌。測定磷霉素、多黏菌素E、替加環(huán)素對KPC-KP的MPC,磷霉素為2048mg/L,多黏菌素E為64至256mg/L,替加環(huán)素為4至32mg/L。磷霉素聯(lián)用多黏菌素E、替加環(huán)素后MPC稍有下降。MPC篩選出磷霉素耐藥突變菌可見MurA、uhpT、glpT基因突變。結(jié)論:(1)臨床分離的70株KPC-KP對磷霉素有一定的抗菌活性。(2)聯(lián)合藥敏結(jié)果提示磷霉素與多黏菌素E、替加環(huán)素對大部分KPC-KP菌株呈協(xié)同作用,對部分菌株呈相加或無關作用,無拮抗作用。時間殺菌曲線發(fā)現(xiàn)磷霉素聯(lián)合多黏菌素E或替加環(huán)素殺菌效果優(yōu)于單藥。(3)磷霉素、多黏菌素E、替加環(huán)素單藥MPC高于血藥濃度,MSW過寬,單獨應用易出現(xiàn)耐藥。磷霉素聯(lián)合多黏菌素E或替加環(huán)素時,MPC下降不明顯,聯(lián)合用藥限制耐藥效果不理想。(4)KPC-KP對磷霉素的耐藥與MurA、uhpT、glpT基因突變相關,上述基因突變可能影響細菌正常功能。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5
【圖文】：

圖１：磷霉素累計耐藥百分比（ｎ＝７０）逡逑用臨床時間長，因其抗菌譜廣、價格低廉廣泛應用于各類染，對包括腸球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌在內(nèi)的多有殺菌活性ｎ７’１８］。肺炎克雷伯菌是常見的院內(nèi)致病菌，臨喹諾酮類、碳青霉烯類抗生素治療，隨著抗生素應用的不種抗生素的耐藥性不斷增強。肺炎克雷伯菌可通過產(chǎn)生藥物作用靶點結(jié)構(gòu)等機制產(chǎn)生耐藥性。產(chǎn)碳青霉烯酶為肺炎性的重要機制，多種碳青霉烯酶如ＫＰＣ、ＭＢＬ、ＮＤＭ－１、ＩＭＰ年美國北卡羅來納首次發(fā)現(xiàn)產(chǎn)肺炎克雷伯碳青霉烯酶的來，ＫＰＣ－ＫＰ臨床分離率逐年升高［２°］。文獻報道肺炎克雷［２１〃２］

邐解放軍醫(yī)學院碩士學位論文邐逡逑單藥ＭＩＣ邋（圖２）。后分別吸取比濁稀釋后的菌液ｌＯＯｕｌ滴入９６孔板中，并記錄各菌逡逑株位置，１號、Ｈ號單藥孔加入５０邋ｕｌ滅菌ＭＨＢ，使９６孔板各孔均有２００邋ｕｌ液體，逡逑最終菌液濃度約為５ｘｌＯｓＣｆｕ／ｍｌ。將９６孔板置于微量振蕩儀振蕩約４５秒，使孔內(nèi)液逡逑體充分混合，后移至恒溫培養(yǎng)箱中以３７°Ｃ溫度培養(yǎng)２０ｈ，觀察并記錄實驗結(jié)果，孔內(nèi)逡逑渾濁或底部可見沉渣判定為有細菌生長，孔內(nèi)液體清亮，底部未見沉渣判定為無細菌逡逑生長。逡逑ＦＩＣ邐９６孔板逡逑

加環(huán)素、多黏菌素Ｅ單藥對ＫＰＣ－ＫＰ的ＭＩＣ結(jié)果按ＣＬＳＩ及ＦＤＡ標果如表２所示。替加環(huán)素ＭＩＣｍ＝邋ｌｍｇ／Ｌ，ＭＩＣｍ＝２邋ｍｇ／Ｌ，多黏菌素？邋５ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９ｆｌ＝邋０．邋５ｍｇ／Ｌ。逡逑表２：磷霉素、多黏菌素、替加環(huán)素對ＫＰＣ－ＫＰ單藥ＭＩＣ邋（ｎ＝２５）逡逑藥物邋ＭＩＣ５０邋ＭＩＣ９０邋Ｓ逡逑磷霉素邐６４邐６４邐１００逡逑多黏菌素Ｅ邋０．５邐０．５邐１００逡逑替加環(huán)素邋１邐２邐１００逡逑素聯(lián)合替加環(huán)素、多黏菌素Ｅ藥敏結(jié)果，磷霉素聯(lián)合替加環(huán)素時，ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９（）＝３２ｍｇ／Ｌ，替加環(huán)素邋ＭＩＣＭ＝ｌｍｇ／Ｌ，邋ＭＩＣ９［）＝２ｎｉｇ／Ｌ，磷霉素時，磷霉素邋ＭＩＣｗ＝８ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣＭ＝３２ｍｇ／Ｌ，多黏菌素邋ＭＩＣｍ＝０．邋１２

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 崔俊昌;抗菌藥物防突變濃度及其臨床意義[J];國外醫(yī)學(呼吸系統(tǒng)分冊);2003年06期

本文編號：2804375