【摘要】：目的:探討臨床分離的大腸埃希菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥機制及同源性。方法:收集2016年1月-2016年3月臨床標本中分離的大腸埃希菌共計112株,Vitek 2-compact全自動微生物分析儀和常規(guī)方法進行細菌鑒定及藥敏檢測,初步篩選碳青霉烯類耐藥大腸埃希菌6株;采用EDTA協(xié)同試驗和改良Hodge試驗檢測碳青霉烯酶表型;運用PCR擴增碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaVIM、blaGES、blaIMP、blaNDM、blaGIM、bla OXA-23/48等)、及其他β-內(nèi)酰胺酶基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M)及及喹諾酮類藥物耐藥基因(qnrA、qnrB、qnrS)。對陽性產(chǎn)物進行測序以確定基因型別;通過質(zhì)粒接合實驗檢測其耐藥基因的轉(zhuǎn)移特性;應(yīng)用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對耐碳青霉烯類大腸埃希菌進行同源性分析;應(yīng)用多位點序列分析(MLST)確定其等位基因編號及基因序列型(ST型),并利用eBURST軟件進行親緣性分析。結(jié)果:共檢測得6株碳青霉烯類耐藥大腸埃希菌,耐藥率為5.4%(6/112),其中3株碳青霉烯類耐藥大腸埃希菌攜帶bla NDM,其中1株攜帶blaNDM-1,1株攜帶blaNDM-1和blaTEM-1,1株菌同時攜帶bla NDM-3、blaCTX-M-15及blaTEM-1基因。3株攜帶blaNDM基因大腸埃希菌經(jīng)EDTA協(xié)同實驗和改良Hodge實驗均為陽性,基因型和表型一致。3株產(chǎn)blaNDM型大腸埃希菌均通過接合試驗將bla NDM基因傳遞給了大腸埃希菌J53感受態(tài)菌,成功轉(zhuǎn)移至受體菌,接合子對碳青霉烯類藥物均為耐藥,PCR擴增接合子并經(jīng)測序確定blaNDM陽性,并使其獲得了相似的耐藥特性。另外3株未檢測出碳青霉烯酶基因的大腸埃希菌中,1株僅攜帶blaCTX-M-65基因,1株僅攜帶blaTEM-1基因,另1株僅攜帶bla CTX-M-15基因。未檢測到bla KPC、bla VIM、bla GES、bla IMP、bla GIM及bla OXA碳青霉烯類耐藥基因陰性。6株碳青霉烯類耐藥大腸埃希菌均未發(fā)現(xiàn)出qnrA、qnrB、qnrS等喹諾酮類藥物耐藥基因。3株攜帶blaNDM的大腸埃希菌MLST結(jié)果顯示為3個不同ST型,分別為ST744、ST167和ST7219,eBURST軟件分析示ST744和ST167屬于CC10克隆群,ST7912屬于CC131克隆群。這3株攜帶bla NDM的大腸埃希菌經(jīng)PFGE成功分型為A、B、C三種不同的克隆型。結(jié)論:1、本研究所收集本地區(qū)耐碳青霉烯類大腸埃希菌均為多重耐(MDR)菌,對替加環(huán)素和阿米卡星均敏感,耐藥現(xiàn)象嚴重,其中3株為產(chǎn)blaNDM型的大腸埃希菌,另外3株未檢出碳青霉烯類耐藥基因。2、首次在中國發(fā)現(xiàn)1株產(chǎn)blaNDM-3的大腸埃希菌,并且該菌株同時攜帶blaTEM-1和blaCTX-M-15基因。另2株產(chǎn)blaNDM型的大腸埃希菌中,1株僅攜帶blaNDM-1基因,1株同時攜帶blaNDM-1和bla TEM-1基因。3、通過MLST和PFGE的方法同時對3株產(chǎn)blaNDM型的大腸埃希菌進行遺傳相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),3株實驗菌無克隆相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5
【圖文】：

DC10、DC52改良Hodge試驗結(jié)果陽性，DC9為陰性結(jié)果，S為陰性對照

圖 4 EDTA 協(xié)同試驗 DC44 號菌株為陽性結(jié)果因的 PCR 檢測及測序結(jié)果碳青霉烯類大腸埃希菌中檢測出 blaNDM 基因 3 株（見 株為 blaNDM-1，其中 1 株同時攜帶 blaTEM-1；1 株產(chǎn)laTEM-1 和 blaCTX-M-15。另外 3 株未檢測到產(chǎn)金屬 β中，1 株僅攜帶 blaCTX-M-65 基因，1 株僅攜帶 blaTEM bla CTX-M-15 基因。6 株耐碳青霉烯大腸埃希菌患者相未檢測出 KPC、VIM、GES、IMP、GIM 及 OXA 等其他均未檢測出 qnrA、qnrB、qnrS 等喹諾酮類藥物耐藥基因

注：M：DNAmaker圖 5 NDM 基因陽性株電泳圖譜，DC10、DC44、DC52 為 ND表 5 6 株耐碳青霉烯大腸埃希菌患者相關(guān)資料信息Table 5 Information about Carbapene-resistant E.coli patientsTA同驗碳青酶烯基因 β-內(nèi)酰胺酶基因序列分型標本類型 科室 + blaNDM-1 744 膿液 肝膽外科膽blaNDM-1+ blaNDM-3 TEM-1 CTX-M-15 7219 膿液 骨科 blaNDM-3 CTX-M-15+ blaNDM-1 TEM-1 167 膿液 胃腸外科 急blaNDM-1- CTX-M-65 血液 神經(jīng)外科 大

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何建業(yè);曹在秋;代志峰;;耐碳青霉烯類抗菌藥物腸桿菌科細菌的耐藥基因分析[J];檢驗醫(yī)學(xué);2017年11期

2 虞春華;丁嵐;柯慧;馬Z

本文編號：2787420