發(fā)布時(shí)間：2020-08-06 19:27

【摘要】：背景與目的遺傳性異常纖維蛋白原血癥(Congenital dysfibrinogenemia,CD)是由編碼纖維蛋白原基因發(fā)生突變而引起纖維蛋白原結(jié)構(gòu)和功能異常的遺傳性疾病。該病一般為常染色體顯性遺傳或共顯性遺傳,少數(shù)為常染色體隱性遺傳。CD患者臨床表現(xiàn)異質(zhì)性顯著,大部分患者無任何臨床表現(xiàn),部分患者表現(xiàn)為血栓或出血,極少數(shù)患者表現(xiàn)為出血與血栓并存,部分女性患者可表現(xiàn)為月經(jīng)過多、反復(fù)流產(chǎn)及胎盤早剝等癥狀。典型的CD實(shí)驗(yàn)室檢查可發(fā)現(xiàn)凝血酶時(shí)間(TT)延長,Clauss法纖維蛋白原顯著降低,而PT-演算法或免疫法纖維蛋白原濃度在正常范圍內(nèi)。但也有極少數(shù)患者的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果與上述不一致。曾有學(xué)者報(bào)道CD患者的TT可在正常范圍,甚至低于正常范圍。因此,需要對CD進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查與基因突變分析以明確突變位點(diǎn),為產(chǎn)前診斷與優(yōu)生優(yōu)育提供信息來源,通過臨床表型分析判斷其預(yù)后并對治療進(jìn)行指導(dǎo)。方法(1)收集四例CD先證者及家系成員的血液標(biāo)本、病例資料并做好家系調(diào)查,繪制系譜圖。(2)提取外周血白細(xì)胞DNA,設(shè)計(jì)并合成特異性引物,采用PCR擴(kuò)增編碼纖維蛋白原基因的所有外顯子及其側(cè)翼序列,通過測序儀檢測擴(kuò)增目的片段的核苷酸序列,與NCBI基因數(shù)據(jù)庫內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對,查找先證者的基因突變類型,再對家系其他成員進(jìn)行相關(guān)基因突變位點(diǎn)的篩查。(3)提取及純化先證者及其家系成員的血漿纖維蛋白原,通過Western blot分析纖維蛋白原肽鏈的相對分子量及相對表達(dá)量,以明確纖維蛋白原缺陷類型;通過基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜儀分析,確定血漿中是否存在突變肽段。(4)對四例先證者及正常對照血漿纖維蛋白原的聚集進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測,以了解CD患者的纖維蛋白原聚集功能。(5)通過掃描電子顯微鏡觀察纖維蛋白凝塊中的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)及纖維直徑。(6)運(yùn)用血栓彈力圖儀監(jiān)測先證者的凝血功能,并預(yù)測先證者發(fā)生出血或血栓的風(fēng)險(xiǎn)。(7)對比分析四例先證者及其家系成員與近10年有相同突變位點(diǎn)的其他先證者的臨床表現(xiàn)。結(jié)果(1)經(jīng)基因突變分析,先證者Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的FGG基因第8號外顯子發(fā)生C.902GA錯(cuò)義突變,導(dǎo)致P.Arg275His(缺乏信號肽)雜合突變;先證者ⅡFGA基因第2號外顯子發(fā)生C.104GA錯(cuò)義突變,導(dǎo)致P.Arg16His(缺乏信號肽)雜合突變。(2)Western blot分析這四例先證者相對應(yīng)的纖維蛋白原Aα或γ鏈,未發(fā)現(xiàn)其遷移率及相對表達(dá)量發(fā)生改變;通過質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)這四例先證者纖維蛋白原均含有正常肽段與突變肽段,符合雜合突變。(3)四例先證者的纖維蛋白原聚集均發(fā)生明顯改變,在聚集曲線上的停滯期延長,其最大的OD值均低于正常對照。(4)掃描電子顯微鏡下觀察四例先證者的纖維蛋白凝塊結(jié)構(gòu),先證者Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)疏松,孔徑增大,纖維排列不規(guī)則且粗細(xì)不均,纖維絲末端卷曲成團(tuán),先證者Ⅱ的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)比較致密,網(wǎng)絡(luò)孔徑較小,纖維粗細(xì)較一致,纖維節(jié)點(diǎn)較正常對照多。(5)血栓彈力圖顯示先證者Ⅰ和Ⅲ的Angle值減小,其相應(yīng)的k值增大,MA值降低;先證者Ⅱ和Ⅳ的血栓彈力圖結(jié)果在正常范圍內(nèi)。(6)四例先癥者及發(fā)生相同位點(diǎn)突變的家系成員均無任何臨床表現(xiàn)。結(jié)論(1)基因分析明確先證者Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ發(fā)生Arg275His突變,先癥者Ⅱ發(fā)生Arg16His突變,均為纖維蛋白原的突變熱點(diǎn),與其他報(bào)道一致。(2)血栓彈力圖顯示先證者Ⅰ和Ⅲ的Angle值減小,其相應(yīng)的k值增大,MA值降低,表示其纖維蛋白原功能低下,但殘存的正常纖維蛋白原仍具備止血功能;先證者Ⅱ和Ⅳ的血栓彈力圖結(jié)果在正常范圍內(nèi)。這四例先證者均無出血或血栓風(fēng)險(xiǎn)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R596;R440
【圖文】：

圖1.家系Ⅰ的系譜圖Figure 1. pedigree of familyⅠ男性， 正常女性， 男性雜合子， 女性雜合表 1. 家系Ⅰ先證者及其他成員的凝血檢時(shí)間(s) 纖維蛋白原(g/l) 凝APTT PTClauss法PT-演算法Ⅷ Ⅸ

圖 2.家系Ⅱ的系譜圖Figure 2. pedigree of familyⅡ常男性， 正常女性， 男性雜合子， 女性雜表 2. 家系Ⅱ先證者及其他成員的凝血時(shí)間(s) 纖維蛋白原(g/l) 凝APTT PTClauss法PT-演算法Ⅷ Ⅸ

家系Ⅲ的系譜圖

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2782860