【摘要】：溶菌酶(Lysozyme)是一種能夠標(biāo)記人體器官、組織、細(xì)胞等發(fā)生功能改變或病變的蛋白質(zhì),可以作為白血病等疾病診斷的一個(gè)潛在生化指標(biāo)。同時(shí)人類還面臨著各種致病菌,如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的危害和侵襲,因此檢測(cè)溶菌酶和金黃色葡萄球菌對(duì)人類疾病的預(yù)防和診斷具有重要的意義和價(jià)值。然而目前針對(duì)溶菌酶和金黃色葡萄球菌的檢測(cè)方法各有不足,如微生物法繁瑣耗時(shí)且重復(fù)性差;儀器分析法需要昂貴的儀器,且需對(duì)樣品預(yù)處理;免疫分析法需要依賴昂貴且批次間有差異的抗體;基于納米探針的方法其探針制備復(fù)雜。因此迫切需要發(fā)展一種簡(jiǎn)單、快速、特異、靈敏、準(zhǔn)確、高效檢測(cè)溶菌酶和金黃色葡萄球菌的新方法。本工作基于功能化金納米粒子的共振光散射信號(hào)檢測(cè)溶菌酶;基于抗生素替考拉寧(Teicoplanin,Teico)和核酸適配體(aptamer)對(duì)細(xì)菌的識(shí)別作用構(gòu)建納米材料表面熒光轉(zhuǎn)移(Nanomaterials surface energy transfer,NSET)傳感器檢測(cè)S.aureus。主要內(nèi)容如下:(1)基于肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)穩(wěn)定的金納米粒子(PGN-AuNPs)的共振光散射信號(hào)(Plasma resonance light scattering,PRLS)的變化建立了一種簡(jiǎn)單、特異、靈敏檢測(cè)溶菌酶的新方法。直接以識(shí)別分子PGN作為模板,簡(jiǎn)單、快速(5 min)制備粒徑均一、穩(wěn)定性好、且具有特定生物功能的肽聚糖-金納米粒子(PGN-AuNPs)�；谌芫笇�(duì)PGN的特異性水解,在1.5 h內(nèi),PGN-AuNPs的PRLS(ΔI_(PRLS),560 nm)由于AuNPs的聚集而顯著性增強(qiáng),并隨著溶菌酶濃度的增加而增強(qiáng),呈線性關(guān)系,線性范圍5-1600 nmol/L,檢測(cè)限2.32 nM,線性方程ΔI_(PRLS)=41.6397+0.5332 c,相關(guān)系數(shù)r=0.9961。將該法用于分析人的血清樣本中的溶菌酶含量時(shí),回收率達(dá)到106.76-119.32%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(Relative standard deviation,RSD)0.14-3.11%,表現(xiàn)出良好的可行性。這種基于納米探針PGN-AuNPs檢測(cè)溶菌酶的方法簡(jiǎn)單、快速、特異、靈敏,有望為溶菌酶相關(guān)疾病的臨床診斷提供一種可行的新方法。(2)本工作建立了一種基于NSET傳感器檢測(cè)金黃色葡萄球菌的方法。該方法主要應(yīng)用抗生素和aptamer分子對(duì)細(xì)菌的同時(shí)識(shí)別作用構(gòu)建NSET探針,實(shí)現(xiàn)金黃色葡萄球菌靈敏、特異和快速地檢測(cè)。本工作以S.aureus為待檢測(cè)模型致病菌,以aptamer結(jié)合的量子點(diǎn)(aptamer-QDs)和一鍋法合成功能化的Teico-金納米粒子(Teico-AuNPs)分別作為能量轉(zhuǎn)移的供體和受體,構(gòu)建NSET傳感器,一步法、在1 h內(nèi)實(shí)現(xiàn)了S.aureus的定量檢測(cè),簡(jiǎn)單、快速。其線性范圍為10-5×10~8 cfu/mL,檢測(cè)限為2 cfu/mL。將該策略用于檢測(cè)真實(shí)樣品中的S.aureus時(shí),回收率(84.5-110%)較好,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01-0.44%。本工作建立了簡(jiǎn)單、方便、特異、靈敏、通用的致病菌檢測(cè)方法,對(duì)食品安全監(jiān)控和感染性疾病的診斷有著潛在意義。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.5;TB383.1
【圖文】：

是基于溶菌酶對(duì)菌體的裂解作用，菌體解體后使底物低。但比濁法的準(zhǔn)確性和重復(fù)性較差38。瓊脂平板菌的繁殖被溶菌酶阻止于有效濃度范圍之內(nèi)，溶菌擴(kuò)散產(chǎn)生相應(yīng)大小的圓形透明帶即抑菌圈。其直徑過(guò)測(cè)量抑菌圈的直徑可以定量溶菌酶的活力。雖然復(fù)雜繁瑣耗力，檢測(cè)周期長(zhǎng)（24~36 h），且干擾因素主要是基于抗原抗體的方法，該技術(shù)簡(jiǎn)單、特異、金的等離子共振光瑞利散射信號(hào)，基于抗原-抗體反體 DNA 吸附金納米粒子表面，通過(guò)金納米粒子的等極低的濃度下放大共振信號(hào)，檢測(cè)溶菌酶的檢測(cè)限但是溶菌酶的試劑盒昂貴、抗體重復(fù)性差，且還存

第一章 緒論葡萄糖苷酶加入到事先浸泡了人眼淚溶菌酶的濾紙上，基于糖胺的水解和 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶對(duì) p-硝基苯基的發(fā)色加入碳酸鈉終止反應(yīng)，最后用紫外分光光度計(jì)測(cè)量光密度值即酶41。此法用酶催化雖然較快（1 h），但是使用的染料有劇的準(zhǔn)確性較差，靈敏度較低，線性范圍窄，因而限制了其利用r 誘導(dǎo)金屬環(huán)糊精探針的熒光增強(qiáng)，加入溶菌酶后，基于 apta異性結(jié)合，使 aptamer 從金屬環(huán)糊精上脫落，熒光猝滅，猝的含量呈線性關(guān)系，從而檢測(cè)溶菌酶。檢測(cè)限達(dá)到 48 pM（

圖 1-3 釓螯合物標(biāo)記溶菌酶并用毛細(xì)管電泳-電感耦合等離子體質(zhì)譜分析的原理圖Fig. 1-3 The principle diagram of Gd3+chelate labeling of lysozyme and CE-ICP-MS analysis..2.4 基于金納米粒子的方法金納米粒子（Gold nanoparticles，AuNPs）由于其合成簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性良好，生相容性好，基于其特殊的光學(xué)性質(zhì)，如很強(qiáng)的局域表面等離子體共振，被廣泛用于化學(xué)傳感器和生物傳感器。近年來(lái)，報(bào)道了很多基于金納米粒子檢測(cè)溶菌30, 32, 44-4647-48

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本文編號(hào)：2780765