【摘要】：溶菌酶(Lysozyme)是一種能夠標記人體器官、組織、細胞等發(fā)生功能改變或病變的蛋白質(zhì),可以作為白血病等疾病診斷的一個潛在生化指標。同時人類還面臨著各種致病菌,如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的危害和侵襲,因此檢測溶菌酶和金黃色葡萄球菌對人類疾病的預防和診斷具有重要的意義和價值。然而目前針對溶菌酶和金黃色葡萄球菌的檢測方法各有不足,如微生物法繁瑣耗時且重復性差;儀器分析法需要昂貴的儀器,且需對樣品預處理;免疫分析法需要依賴昂貴且批次間有差異的抗體;基于納米探針的方法其探針制備復雜。因此迫切需要發(fā)展一種簡單、快速、特異、靈敏、準確、高效檢測溶菌酶和金黃色葡萄球菌的新方法。本工作基于功能化金納米粒子的共振光散射信號檢測溶菌酶;基于抗生素替考拉寧(Teicoplanin,Teico)和核酸適配體(aptamer)對細菌的識別作用構建納米材料表面熒光轉(zhuǎn)移(Nanomaterials surface energy transfer,NSET)傳感器檢測S.aureus。主要內(nèi)容如下:(1)基于肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)穩(wěn)定的金納米粒子(PGN-AuNPs)的共振光散射信號(Plasma resonance light scattering,PRLS)的變化建立了一種簡單、特異、靈敏檢測溶菌酶的新方法。直接以識別分子PGN作為模板,簡單、快速(5 min)制備粒徑均一、穩(wěn)定性好、且具有特定生物功能的肽聚糖-金納米粒子(PGN-AuNPs)。基于溶菌酶對PGN的特異性水解,在1.5 h內(nèi),PGN-AuNPs的PRLS(ΔI_(PRLS),560 nm)由于AuNPs的聚集而顯著性增強,并隨著溶菌酶濃度的增加而增強,呈線性關系,線性范圍5-1600 nmol/L,檢測限2.32 nM,線性方程ΔI_(PRLS)=41.6397+0.5332 c,相關系數(shù)r=0.9961。將該法用于分析人的血清樣本中的溶菌酶含量時,回收率達到106.76-119.32%,相對標準偏差(Relative standard deviation,RSD)0.14-3.11%,表現(xiàn)出良好的可行性。這種基于納米探針PGN-AuNPs檢測溶菌酶的方法簡單、快速、特異、靈敏,有望為溶菌酶相關疾病的臨床診斷提供一種可行的新方法。(2)本工作建立了一種基于NSET傳感器檢測金黃色葡萄球菌的方法。該方法主要應用抗生素和aptamer分子對細菌的同時識別作用構建NSET探針,實現(xiàn)金黃色葡萄球菌靈敏、特異和快速地檢測。本工作以S.aureus為待檢測模型致病菌,以aptamer結(jié)合的量子點(aptamer-QDs)和一鍋法合成功能化的Teico-金納米粒子(Teico-AuNPs)分別作為能量轉(zhuǎn)移的供體和受體,構建NSET傳感器,一步法、在1 h內(nèi)實現(xiàn)了S.aureus的定量檢測,簡單、快速。其線性范圍為10-5×10~8 cfu/mL,檢測限為2 cfu/mL。將該策略用于檢測真實樣品中的S.aureus時,回收率(84.5-110%)較好,相對標準偏差為0.01-0.44%。本工作建立了簡單、方便、特異、靈敏、通用的致病菌檢測方法,對食品安全監(jiān)控和感染性疾病的診斷有著潛在意義。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5;TB383.1
【圖文】：

是基于溶菌酶對菌體的裂解作用，菌體解體后使底物低。但比濁法的準確性和重復性較差38。瓊脂平板菌的繁殖被溶菌酶阻止于有效濃度范圍之內(nèi)，溶菌擴散產(chǎn)生相應大小的圓形透明帶即抑菌圈。其直徑過測量抑菌圈的直徑可以定量溶菌酶的活力。雖然復雜繁瑣耗力，檢測周期長（24~36 h），且干擾因素主要是基于抗原抗體的方法，該技術簡單、特異、金的等離子共振光瑞利散射信號，基于抗原-抗體反體 DNA 吸附金納米粒子表面，通過金納米粒子的等極低的濃度下放大共振信號，檢測溶菌酶的檢測限但是溶菌酶的試劑盒昂貴、抗體重復性差，且還存

第一章 緒論葡萄糖苷酶加入到事先浸泡了人眼淚溶菌酶的濾紙上，基于糖胺的水解和 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶對 p-硝基苯基的發(fā)色加入碳酸鈉終止反應，最后用紫外分光光度計測量光密度值即酶41。此法用酶催化雖然較快（1 h），但是使用的染料有劇的準確性較差，靈敏度較低，線性范圍窄，因而限制了其利用r 誘導金屬環(huán)糊精探針的熒光增強，加入溶菌酶后，基于 apta異性結(jié)合，使 aptamer 從金屬環(huán)糊精上脫落，熒光猝滅，猝的含量呈線性關系，從而檢測溶菌酶。檢測限達到 48 pM（

圖 1-3 釓螯合物標記溶菌酶并用毛細管電泳-電感耦合等離子體質(zhì)譜分析的原理圖Fig. 1-3 The principle diagram of Gd3+chelate labeling of lysozyme and CE-ICP-MS analysis..2.4 基于金納米粒子的方法金納米粒子（Gold nanoparticles，AuNPs）由于其合成簡單，穩(wěn)定性良好，生相容性好，基于其特殊的光學性質(zhì)，如很強的局域表面等離子體共振，被廣泛用于化學傳感器和生物傳感器。近年來，報道了很多基于金納米粒子檢測溶菌30, 32, 44-4647-48

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本文編號：2780765