【摘要】：造血干細(xì)胞治療是目前最成熟的一門干細(xì)胞移植醫(yī)療技術(shù),已經(jīng)證明可以治療多種血液性疾病,如白血病、血友病、血癌等。目前臨床應(yīng)用的造血干細(xì)胞主要來源于成年人的外周血、骨髓和嬰兒出生后的臍帶血,但是有許多原因限制了這些來源物的造血干細(xì)胞臨床使用。因此尋找含量更充足的造血干細(xì)胞來源物成為目前造血干細(xì)胞臨床使用急需解決的問題。近年來,研究發(fā)現(xiàn)胎盤中含有豐富的造血干細(xì)胞,其特征與臍帶血中造血干細(xì)胞相同,可以作為臨床使用的造血干細(xì)胞理想的新來源。本研究采用灌洗和酶消化相結(jié)合作用的方法從20份胎盤中分離出有核細(xì)胞及CD34~+造血干細(xì)胞,并擬構(gòu)建胎盤造血干細(xì)胞庫對(duì)分離出來的細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期低溫保存。得到結(jié)果如下:1.通過灌洗收集得到的有核細(xì)胞平均數(shù)為(16.82±6.08)×10~8,而追加的酶消化還可以再分離出有核細(xì)胞平均數(shù)為(7.79±3.13)×10~8,占到本實(shí)驗(yàn)分離得到有核細(xì)胞平均總數(shù)的32%。說明了灌洗的方法并不能夠有效分離出胎盤有核細(xì)胞,在灌洗的基礎(chǔ)上追加酶消化來分離胎盤中剩余的有核細(xì)胞是必要的。2.從山東臍帶血庫2001年發(fā)布的文章可知,胎盤中收集得到的有核細(xì)胞和CD34~+造血干細(xì)胞的平均數(shù)分別為(24.65±6.50)×10~8和(22.60±7.29)×10~6,是臍帶血中收集得到有核細(xì)胞和CD34~+造血干細(xì)胞的平均數(shù)至少2倍以上。對(duì)從胎盤中分離得到的造血干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí),胎盤來源的造血干細(xì)胞在體外培養(yǎng)中具有良好的集落形成能力,即具有良好的造血分化和增殖能力。結(jié)果說明了胎盤造血干細(xì)胞和臍帶血造血干細(xì)胞一樣符合臨床使用的要求,完全符合構(gòu)建造血干細(xì)胞庫要求,為建立胎盤造血干細(xì)胞庫提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。3.對(duì)18份在擬構(gòu)建的胎盤造血干細(xì)胞庫經(jīng)過長(zhǎng)期超低溫保存的胎盤有核細(xì)胞復(fù)蘇后進(jìn)行細(xì)胞活率檢測(cè)和細(xì)胞增殖檢測(cè),發(fā)現(xiàn)凍存的胎盤有核細(xì)胞復(fù)蘇后的活性基本都維持在80%以上,符合目前臍帶血庫對(duì)凍存后細(xì)胞活性的要求;而復(fù)蘇后的胎盤有核細(xì)胞能夠在有利于有核細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)體系中增殖,說明復(fù)蘇后的有核細(xì)胞并沒有發(fā)生生物學(xué)特征改變。因此,本研究方法擬建立的胎盤造血干細(xì)胞庫對(duì)胎盤有核細(xì)胞的長(zhǎng)期保存是可行可靠的。綜上所述,說明了胎盤中含有豐富的造血干細(xì)胞,從胎盤中分離得到的造血干細(xì)胞可以作為臍帶血造血干細(xì)胞的可靠新來源,較好解決臍帶血中臨床應(yīng)用的造血干細(xì)胞數(shù)量不足的問題,建立起類似于臍帶血庫的胎盤造血干細(xì)胞庫具有極其重要的意義。最后本研究展望了胎盤造血干細(xì)胞庫的建庫要求及運(yùn)行情況。
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R457.7;R318
【圖文】：

.5.1 與臍帶血造血干細(xì)胞具有相近性研究證實(shí)，來自胎兒后期胎盤－臍帶血血液中的血細(xì)胞具有不同于出生后骨髓血中的造血干細(xì)胞及免疫活性細(xì)胞的生物學(xué)特性，它富含可重建長(zhǎng)期造血系統(tǒng)的造血干細(xì)胞，具有高增生和長(zhǎng)期骨髓重建的能力[36]。圖 1-1 胎盤的結(jié)構(gòu)Fig.1-1 The structure of placenta：胎盤的結(jié)構(gòu)分為 3 層，分別是羊膜、葉狀絨毛膜(也稱叢密絨毛膜)和底蛻膜。羊膜和葉膜構(gòu)成胎盤的胎兒部分，底蛻膜構(gòu)成胎盤母體部分。胎盤內(nèi)有母體和胎兒兩套血循環(huán)，胎體血液之間并不直接接觸，胎兒面血液循環(huán)過程是通過臍動(dòng)脈到達(dá)胎盤絨毛小葉內(nèi)的毛細(xì)，與母體血液進(jìn)行物質(zhì)交換后再回到臍靜脈。

4.29 0.9 94.34.15 0.5 98.2有核細(xì)胞數(shù)量對(duì)比 可以看出，20 份胎盤經(jīng)過灌洗液沖洗后，追加酶消化的有核細(xì)胞，收集得到的胎盤灌洗有核細(xì)胞和胎盤酶消化.08）×108和（7.79±3.13）×108，其中 2 號(hào)胎盤樣本酶消灌洗出來的有核細(xì)胞數(shù)量還多，而 8、9 和 18 號(hào)胎盤樣近，其他大部分胎盤樣本灌洗得到的有核細(xì)胞遠(yuǎn)多于酶次收集到的有核細(xì)胞的平均值作比例圖，可得圖 2-1 。

第二章 胎盤有核細(xì)胞分離的研究2.4.2 兩次收集到有核細(xì)胞活率對(duì)比本實(shí)驗(yàn)采用 7-AAD 流式方法對(duì)兩次收集到的胎盤有核細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活率檢測(cè)，其結(jié)果如圖 2-2 所示。由表 2-3 和 2-4 可以看出，20 份胎盤樣本利用酶消化得到有核細(xì)胞的細(xì)胞活率都大于利用灌洗方法得到有核細(xì)胞的活率，兩者的細(xì)胞活率平均值分別為（96.5±1.96）%和（90.9±1.25）%。說明了用灌洗的方法對(duì)胎盤有核細(xì)胞進(jìn)行分離時(shí)由于對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了物理力，對(duì)有核細(xì)胞造成了一定物理損害，而利用酶對(duì)胎盤進(jìn)行消化分離時(shí)對(duì)細(xì)胞的物理作用相對(duì)溫和，對(duì)胎盤有核細(xì)胞損害更小。

【參考文獻(xiàn)】

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