【摘要】：研究背景及目的泌尿道感染(尿路感染)是社區(qū)人群和住院患者最常見的細(xì)菌感染之一,定量尿細(xì)菌培養(yǎng)仍是診斷尿路感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。然而,在疑似尿路感染的病人中,大部分定量尿細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果為陰性,陰性率可以高達(dá)60%,甚至更高。此外,尿細(xì)菌培養(yǎng)程序至少需要24小時,并且需要臨床實驗室工作人員的大量手工操作。在臨床實際操作中,當(dāng)一名疑似尿路感染的病人就診時,臨床實驗室無法快速提供尿細(xì)菌培養(yǎng)的病原體信息,因此,許多醫(yī)生基于其自身的技術(shù)和經(jīng)驗,采用經(jīng)驗性抗生素用藥方法,可引起抗生素的過度使用,增加尿路感染細(xì)菌的耐藥性風(fēng)險。近十多年來,自動尿液有形成分分析儀,如UF-1000i(Sysmex Corporation,Kobe,Japan),基于流式細(xì)胞術(shù)原理,在篩選尿培養(yǎng)陰性標(biāo)本時或是一種快速篩查方法,這些方法已廣泛用于評估疑似尿路感染的患者。自2018年,UF系列尿有形成分分析儀的升級版UF-5000開始推出,采用488nm波長的新型藍(lán)色半導(dǎo)體激光器,同樣基于熒光流式細(xì)胞術(shù)的檢測原理。UF-5000內(nèi)部分兩個檢測室,無核(SFch)通道和有核(CRch)通道,使用前向散射光、側(cè)向散射光、側(cè)向熒光和消偏振側(cè)向散射光參數(shù),可快速計數(shù)、識別和分類尿有形成分顆粒。UF-5000是一種新型、非常實用的尿分析儀,可根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同,其熒光染色液結(jié)合力不同,利用其熒光信號來區(qū)分革蘭陽性和革蘭陰性細(xì)菌,從而提供極其有價值的尿細(xì)菌學(xué)信息,為指導(dǎo)尿路感染患者抗生素的使用提供重要依據(jù)。最新的一些研究表明,UF-5000在檢測尿有形成分顆粒計數(shù)、分類方面展現(xiàn)出良好的性能,但用于評估其在篩查疑似尿路感染患者的性能方面鮮有報道。本研究旨在評估新型自動化尿有形分析儀UF-5000在篩查疑似尿路感染患者尿培養(yǎng)陰性的分析性能,并研究新細(xì)菌革蘭染色信息(Bact-info)用于評估尿路感染細(xì)菌革蘭染色陰/陽性與尿培養(yǎng)結(jié)果的相關(guān)性。方法研究對象來自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2018年1月至2018年3月間,共566名疑似尿路感染的患者入組。其中82.7%(468/566)為住院患者,17.3%(98/566)為門診患者。本研究由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(倫理號:2017-703號)。所有樣本均來自16-94歲的成年人(平均年齡:60歲),其中220例樣本來自女性,346例來自男性患者。用無菌容器收集患者的潔尿或者清潔中段尿,并在2小時內(nèi)完成各項檢測。將每個樣本分成兩個無菌管,一管用于尿培養(yǎng),另一管用UF-5000尿有形成分儀分析。為提高標(biāo)本的一致性,本研究排除孕婦、兒童、嬰兒和導(dǎo)尿患者標(biāo)本,同時也排除了肉眼可見的含顆粒標(biāo)本,以避免出現(xiàn)不穩(wěn)定的結(jié)果干擾本次研究。尿路感染的排除診斷:細(xì)菌生長104CFU/mL,則判定為培養(yǎng)陰性。培養(yǎng)結(jié)果超過兩種菌落生長且沒有優(yōu)勢菌落生長的樣本,則判定為培養(yǎng)污染,無需進(jìn)一步做鑒定,樣本中如果有優(yōu)勢菌生長則通過鑒定來區(qū)別。收集患者檢測結(jié)果數(shù)據(jù)資料,分析UF-5000在快速篩查疑似尿路感染病人的中的應(yīng)用價值。結(jié)果在566例尿培養(yǎng)中,161例為陽性(28.4%),405例為陰性(71.6%)。在161例陽性樣本中,排除了 30例真菌陽性樣本,其余131例為細(xì)菌陽性。在131例細(xì)菌陽性樣本中,87例為單一菌生長,6例樣本中分離出2種菌生長,38例樣本有3種及以上菌生長,且未分離到優(yōu)勢菌。依據(jù)尿路感染細(xì)菌的感染率,從高到低分別是:大腸桿菌(n=33),肺炎克雷伯菌(n=16),奇異變形桿菌(n=14),糞腸球菌(n=8),金黃色葡萄球菌(n=5),屎腸球菌(n=5),銅綠假單胞菌(n=5),表皮葡萄球菌(n=2),無乳鏈球菌(n=2),咽峽炎鏈球菌(n=2),陰道加德納菌(n=2),弗氏檸檬酸桿菌(n=1),緩癥鏈球菌(n=1)和其他細(xì)菌(n=3);對于真菌(總共30例),分別為:白色念珠菌(n=14),光滑念珠菌(n=8),熱帶假絲酵母菌(n=4),季也蒙念珠菌(n=2)和其他念珠菌屬(n=2)。在評估UF5000尿有形成分分析儀快速篩查疑似尿路感染病人的性能方面,首先將尿定量細(xì)菌培養(yǎng)菌落生長104CFU/mL定義為尿培養(yǎng)陰性結(jié)果。以尿培養(yǎng)結(jié)果為參考標(biāo)準(zhǔn),采用ROC曲線分析細(xì)菌計數(shù)(BACT)和白細(xì)胞(WBC)計數(shù)值,并進(jìn)行比較。結(jié)果顯示,BACT曲線下面積(AUC)為0.961(95%可信區(qū)間[CI]=0.940-0.976),遠(yuǎn)大于 WBC(AUC=0.769,95%CI=0.729-0.805)。此外,無論是采用任何臨界值,BACT的相應(yīng)靈敏度和特異性均高于WBC計數(shù)值。鑒于篩查試驗首先應(yīng)當(dāng)著重考慮低假陰性(FN)率,以及傳統(tǒng)WBC計數(shù)值在診療尿路感染中的重要作用,采用BACT30/μL和/或WBC200/μL的邏輯規(guī)則時為最佳臨床實踐操作,其靈敏度為97.8%,特異性為74.6%,陽性預(yù)測值為46.9%,陰性預(yù)測值為99.3%,且與尿培養(yǎng)方法的一致性為78.9%,可減少61%不必要的尿培養(yǎng)。在鑒別細(xì)菌革蘭陰和革蘭陽性的能力方面,93例培養(yǎng)陽性標(biāo)本中,UF-5000給出的BACT-info分類信息分別是:革蘭陽性菌19例,革蘭陰性菌50例,革蘭陽性/陰性(Gram Pos/Neg?)14 例,未分類(Unclassified)10 例。使用 UF-5000的 BACT-info 信息正確識別了 67.7%(63/93)的病例,Cohen's kappa一致性為 0.775(x2=31.65,p0.001)。在14例革蘭陽性/陰性標(biāo)本中,其中只有一例為革蘭陽性,13例為革蘭陰性;在10個未分類的標(biāo)本中,6例為革蘭陽性,4例為革蘭陰性。在分析UF5000細(xì)菌計數(shù)(/μL)與尿定量培養(yǎng)(CFU/mL)結(jié)果相關(guān)性方面,兩者結(jié)果之間呈現(xiàn)較好等級相關(guān)性。將尿培養(yǎng)菌落計數(shù)分為4個等級,分別為:102～103CFU/mL,103～104CFU/mL,104～105CFU/mL,105CFU/mL。在 UF-5000上,當(dāng)菌落計數(shù)102～103CFU/ml時,細(xì)菌計數(shù)中位數(shù)為2.0/μL(95%CI=1.6-23.0);當(dāng)菌落計數(shù)103～104CFU/ml時,細(xì)菌計數(shù)中位數(shù)為7.8/μL(95%CI=2.2-40.7);當(dāng)菌落計數(shù)104～1O5CFU/ml時,細(xì)菌計數(shù)中位數(shù)為47.1/μL(95%CI=39.5-303.3);當(dāng)菌落計數(shù)大于1O5CFU/ml時,細(xì)菌計數(shù)中位數(shù)為8022.0/μL(95%CI=16110.9-25996.1),呈現(xiàn)出一定的等級相關(guān)性。結(jié)論UF-5000在快速篩查疑似尿路感染病人有較高的應(yīng)用價值,可減少61%不必要的尿培養(yǎng),在鑒別培養(yǎng)陰性標(biāo)本中敏感性及陰性預(yù)測值極高,且可以提供革蘭陰陽性細(xì)菌信息,對臨床尿路感染治療具有一定指導(dǎo)意義。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R691.3;R446.12
【圖文】：

３結(jié)果逡逑３．１尿培養(yǎng)結(jié)果逡逑在５６６例尿培養(yǎng)中，１６１例為陽性（２８．４％），邋４０５例為陰性（７１．６％），見圖１。逡逑在１６１例陽性樣本中，排除了邋３０例真菌陽性樣本，其余１３１例為細(xì)菌陽性。在逡逑１３１例細(xì)菌陽性樣本中，８７例為單一菌生長，６例樣本中分離出２種菌生長，３８逡逑例樣本有３種及以上菌生長，且未分離到優(yōu)勢菌。依據(jù)尿路感染細(xì)菌的感染率，逡逑從高到低分別是：大腸桿菌（ｎ＝３３），肺炎克雷伯菌（ｎ＝１６），奇異變形＋桿菌（ｎ＝１４），逡逑糞腸球菌（ｎ＝８），金黃色葡萄球菌（ｎ＝５），屎腸球菌（ｎ＝５），銅綠假單胞菌（ｎ＝５），逡逑表皮葡萄球菌（ｎ＝２），無乳鏈球菌（ｎ＝２），咽峽炎鏈球菌（ｎ＝２），陰道加德納菌逡逑（ｎ＝２），弗氏桿檬酸桿菌（ｎ＝ｌ），緩癥鏈球菌（ｎ＝ｌ）和其他細(xì)菌（ｎ＝３）；對于逡逑真菌（總共３０例）

（ｎ＝２），弗氏桿檬酸桿菌（ｎ＝ｌ），緩癥鏈球菌（ｎ＝ｌ）和其他細(xì)菌（ｎ＝３）；對于逡逑真菌（總共３０例），分別為：白色念珠菌（ｎ＝１４），光滑念珠菌＜；ｎ＝８），熱帶假逡逑絲酵母菌（ｎ＝４），季也蒙念珠菌（ｎ＝２）和其他念珠菌屬（ｎ＝２），見圖２。逡逑尿培養(yǎng)結(jié)果逡逑■培養(yǎng)陽性■培養(yǎng)陰性逡逑圖１．尿培養(yǎng)陰陽性結(jié)果占比逡逑６逡逑

數(shù)１０４？１０５ＣＦＵ／ｍｌ時，細(xì)菌計數(shù)中位數(shù)為４７．１／ｎＬ邋（９５％ＣＩ邋＝邋３９－５－３０３．３）；當(dāng)菌逡逑落計數(shù)大于ｌ0５ＣＦＵ／ｍｌ時，細(xì)菌計數(shù)中位數(shù)為８０２２．＜ＶｐＬ邋（邋９５％ＣＩ邋＝逡逑１６１１０．９－２５９９６．１），結(jié)果見表６。由圖４可見，ＵＦ５０００細(xì)菌計數(shù)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)尿培逡逑養(yǎng)結(jié)果之間呈現(xiàn)較好等級相關(guān)性。逡逑表６．邋ＵＦ－５０００尿細(xì)菌計數(shù)與培養(yǎng)菌落計數(shù)的關(guān)系逡逑尿細(xì)菌菌落計數(shù)逡逑ＵＦ５０００邋細(xì)菌邐１０４－１０５逡逑１０２－１０３ＣＦＵ／ｍｌ邐１邋0Ｍ邋０４邋ＣＦＵ／ｍｌ邐＞１０５邋ＣＦＵ／ｍｌ逡逑計數(shù)／ｐＬ邐ＣＦＵ／ｍｌ逡逑ｎ＝３７邐ｎ＝１６邐ｎ＝１８邐ｎ＝７６逡逑平均值邐１２．３邐２１．４邐１７１．４邐２２０４４．５逡逑中位數(shù)邐２．０邐７．８邐４７．１邐８０２２．０逡逑１６１１０．９邋？逡逑９５％邋可信區(qū)間邐１．６邋？２３．０邐２．２－４０．７邐３９．５邋？３０３．３逡逑２７９７８．１逡逑標(biāo)準(zhǔn)差邐３２．０邐３６．２邐２６５．３邐２５９９６．１逡逑１２逡逑

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