【摘要】：目的:探討外周血炎癥因子及肺組織MHCⅡ基因在脂多糖(LPS)致急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)模型小鼠體內的表達量改變,通過研究炎癥反應通路探討慢病毒轉染沉默肺組織MHCⅡ基因對內皮祖細胞移植(EPCs)治療ARDS的作用,為治療ARDS提供新思路。方法:選78只昆明白雄性小鼠,隨機分為4組,(1)正常對照組(NC組)(2)膿毒癥模型組(LPS組)(3)內皮祖細胞移植組(LPS+EPCs組)(4)MHCⅡ慢病毒干擾組(LPS+MHCⅡ-+EPCs組)。ARDS模型建立:以12mg/kg向(2)(3)(4)組小鼠尾靜脈注射LPS,建立膿毒模型;1小時后向(3)組小鼠尾靜脈注射200ul EPCs;向(4)組小鼠尾靜脈注射MHCⅡ慢病毒100ul,觀察1小時后,再向(4)組小鼠尾靜脈注射200ul EPCs。模型建立第三天(d3),(3)與(4)組,用10%苯巴比妥淺麻醉后活體成像儀上熒光示蹤;d3及d7各組小鼠麻醉解剖,留取肺組織行HE染色及快速冰凍切片,觀察各組顯微鏡下病理改變及熒光定位情況;外周血酶聯(lián)免疫吸附試驗法(Elisa)方法檢測炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a的表達量;熒光定量PCR(RT-PCR)檢測TLR-4以及MHCⅡ mRNA表達情況;蛋白免疫印跡法(Western blot)方法檢測MHCⅡ蛋白的表達情況。多組間數(shù)據(jù)分析采用方差分析,Pearson法分析相關性。結果:1、組織病理結果:NC組肺組織結構正常,LPS組肺泡及間質結構紊亂無序,炎性浸潤及纖維素樣滲出,肺泡及毛細血管腔出血狹窄,呈現(xiàn)大面積水腫及炎癥細胞浸潤損傷;LPS+EPCs組較LPS組損傷減輕;LPS+MHCⅡ-+EPCs組炎性細胞浸潤減少,肺泡及間質結構基本完整。2、EPCs及MHCⅡ慢病毒示蹤結果:LPS+EPCs組與LPS+MHCⅡ-+EPCs組組肺組織快速冰凍切片均可見標記EPCs及MHCⅡ慢病毒的綠色熒光表達,活體顯像也可見標記EPCs及MHCⅡ慢病毒的熒光主要在胸部表達。3、Elisa法檢測炎性因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a表達,在NC組、LPS組、LPS+EPCs組、LPS+MHCⅡ-+EPCs組表達量d3分別為(1.56±0.111、38.0±11.0、0.244±0.0794、24.9±4.05)pg/m L,(2.98±0.187、273±27.6、5.36±0.658、107±18.1)pg/m L,(2.54±0.182、125±27.3、2.23±0.763、71.4±8.13)pg/m L,(1.81±0.201、59.0±15.6、0.531±0.150、44.1±4.81)pg/m L。d7分別為(1.54±0.129、2.90±0.194、2.33±0.159、1.63±0.166)pg/m L,(36.7±11.7、233±28.9、111±42.0、44.1±13.9)pg/m L,(0.292±0.0510、2.94±0.696、1.57±0.439、0.356±0.0783)pg/m L,(24.0±4.33、85.0±15.6、63.6±11.6、32.7±5.23)pg/m L。LPS組較NC組均表現(xiàn)升高(均P0.0001),而LPS+EPCs組及LPS+MHCⅡ-+EPCs組較LPS組均表現(xiàn)降低(均P0.0001),且LPS+MHCⅡ-+EPCs組較LPS+EPCs組又表現(xiàn)明顯降低(均P0.0001),LPS+MHCⅡ-+EPCs組較NC組無明顯差異(P0.05)。d3與d7無明顯差異(P0.05)。4、RT-PCR檢測TLR-4、MHCⅡ mRNA表達,在NC組、LPS組、LPS+EPCs組、LPS+MHCⅡ-+EPCs組d3分別(89.1±55.6、0.303±0.0821),(2222±924、5.62±0.819),(743±351、2.98±0.773),(174±91.2、0.526±0.0745)。d7分別為(93.9±62.3、0.286±0.0639),(1533±688、4.55±0.697),(592±144、2.88±0.682),(156±85.5、0.464±0.109)。LPS組較NC組表達量均表現(xiàn)升高(均P0.0001),而LPS+EPCs組及LPS+MHCⅡ-+EPCs組較LPS組表達量均表現(xiàn)降低(均P0.0001),且LPS+MHCⅡ-+EPCs組較LPS+EPCs組表達量又明顯降低(均P0.0001),LPS+MHCⅡ-+EPCs組較NC組無明顯差異(P0.05)。5、western blot檢測MHCⅡ蛋白表達,NC組、LPS組、LPS+EPCs組、LPS+MHCⅡ-+EPCs組,d3分別為(0.356±0.0669),(1.49±0.310),(0.924±0.200),(0.544±0.0558)LPS組較NC組MHCⅡ蛋白灰度值均升高(均P0.0001),而LPS+EPCs組及LPS+MHCⅡ-+EPCs組較LPS組MHCⅡ蛋白灰度值均表現(xiàn)降低(均P0.0001),且LPS+MHCⅡ-+EPCs組較LPS+EPCs組MHCⅡ蛋白灰度值又表現(xiàn)明顯降低(均P0.0001),LPS+MHCⅡ-+EPCs組較NC組無明顯差異(P0.05)。6、d3實驗模型中LPS組MHCⅡ與TLR4、NF-κB、TNF-a、IL-12均呈正相關(r2=0.824、0.867、0.763、0.830,且均p0.05),同時TLR4在基因及蛋白水平呈強正相關(r2=0.991,且均p0.001);LPS+EPCs組MHCⅡ基因相對表達量與IL-12、MHCⅡ蛋白、TLR4 mRNA及其蛋白、NF-κB均呈正相關(r2=0.824、0.880、0.978、0.978、0.938,且均p0.05),同時TLR4在基因及蛋白水平呈強正相關(r2=0.998,且p0.001);LPS+MHCⅡ-+EPCs組MHCⅡ基因相對表達量與IL-12、MHCⅡ蛋白、NF-κB、TNF-a、TLR4蛋白均呈正相關(r2=0.965、0.926、0.846、0.795、0.875,且均p0.05),同時TLR4在基因及蛋白水平呈強正相關(r2=0.998,且p0.001)。結論:1、膿毒所致ARDS時炎癥因子TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明顯增高;肺組織MHCⅡ基因及蛋白表達明顯增高,TLR-4基因及蛋白表達明顯增高;MHCⅡ與TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a明顯正相關。2、EPCs移植可以部分減少TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCⅡ的表達;MHCⅡ與TLR-4、NF-KB、IL-12明顯正相關。3、MHCⅡ基因干擾后進行EPCs移植,可以明顯抑制TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a及MHCⅡ的表達;且均較單獨EPCs移植組明顯下降;MHCⅡ與TLR-4、NF-KB、IL-12、TNF-a依然表現(xiàn)為正相關。
【學位授予單位】：內蒙古醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R459.7
【圖文】：

內蒙古醫(yī)科大學碩士研究生學位論文（2019） 212.1 sepsis 模型鑒定向 30g 雄性小鼠體內尾靜脈注射 LPS，經(jīng)過前期造模摸索條件后以 12mg/kg注射效果最佳，光學顯微鏡鏡下病理切片改變可見 d3 及 d7 與正常組對比顯示肺泡上皮以及毛細血管上皮周圍浸潤大量中性粒細胞，淋巴細胞等炎性細胞，并有炎性滲出、充血水腫、透明膜形成，肺泡腔內狹窄及“氣球樣”改變，肺間質正常結構消失，出現(xiàn)彌漫性的肺泡損傷改變，d3 損傷評分為 10 分，d7 損傷評分 20分。

圖 2 4 種病毒轉染巨噬細胞結果注：如圖 2 所示，從左到右分別為 LV3-Ciita-Mus-408、LV3-Ciita-Mus-1057、LV3-Ciita-Mus-2001 、LV3-NC、空白對照。將 4 種病毒侵染后的巨噬細胞提取 RNA，進行 RT-PCR 檢測，由表 5、圖 3可見 LV3-Ciita-Mus-408 沉默效果最好，故選擇其作為后續(xù)實驗的干擾病毒。表 5 4 種病毒在小鼠巨噬細胞 mRNA 表達情況LV3-NC LV3-Ciita-Mus-408LV3-Ciita-Mus-2001LV3-Ciita-Mus-1057mRNA 相對表達量1 0.401±0.026 0.757±0.207 0.653±0.184F 值 7.285P 值 0.025

圖 3 4 種病毒在小鼠巨噬細胞 mRNA 表達情HE 染色結果組模型建立 d3，鏡下可見 LPS 組較 NC 組肺泡及纖維素樣滲出，肺泡及毛細血管腔出血狹窄， LPS 組損傷減輕、較 NC 組損傷減輕更明顯，但PCs 組較 LPS 組炎性浸潤減輕、較 LPS+EPCs 組-+EPCs 組較 NC 組無明顯差異。模型建立 d7，鏡間質水腫、充血明顯，LPS+EPCs 較 LPS 組損顯，但依舊沒有恢復正常。LPS+MHCII-+EPCsPS+EPCs 組又進一步減輕，且 LPS+MHCII-+Ed3 與 d7 各組進行比較，NC 組、LPS 組、LP 組各組均無明顯差異。

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陸騰飛;裴文華;鄔楊楠;馬月輝;關偉軍;;血管干/祖細胞的研究進展[J];生物技術進展;2017年03期

2 陸騰飛;鄔楊楠;裴文華;馬月輝;關偉軍;;內皮祖細胞的生物學特性及其應用[J];生物技術進展;2017年04期

3 蘇成軍;;參麥注射液治療冠心病療效及患者內皮祖細胞的變化[J];中西醫(yī)結合心血管病電子雜志;2015年23期

4 劉云平;劉勇;何延政;;高糖環(huán)境對內皮祖細胞成骨分化能力及其機制探討[J];糖尿病新世界;2016年20期

5 郭媛;彭然;肖乾鳳;李達;趙旺;許丹焰;;心臟康復與內皮祖細胞的關系[J];中國動脈硬化雜志;2014年11期

6 許艷麗;王順清;毛平;杜慶華;;急性白血病患者造血B祖細胞分析及其意義[J];中國實驗血液學雜志;2014年06期

7 王偉;劉德紅;李卓成;羅蓉;許長瓊;楊自華;;轉染VEGF基因對內皮祖細胞生長的影響研究[J];中國實驗診斷學;2015年03期

8 黃志新;蔡晉;朱武生;馬敏敏;;內皮祖細胞與腦動脈粥樣硬化的相關性研究[J];中西醫(yī)結合心腦血管病雜志;2015年09期

9 陳靜園;趙海恩;吳峧;閆君;尹鄲丹;嚴學倩;梁英民;;兩種不同內皮祖細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2015年26期

10 張京臣;謝慧;陳瑩;孫來芳;孔萬權;侯金珍;龔裕強;;內皮祖細胞對兔急性肺損傷血管通透性的影響[J];中華危重癥醫(yī)學雜志(電子版);2014年02期

相關會議論文 前10條

1 熊福銀;陳昭烈;劉紅;劉興茂;;造血干/祖細胞體外的三維培養(yǎng)[A];中國生物工程學會第三次全國會員代表大會暨學術討論會論文摘要集[C];2001年

2 張秋華;尹洪超;張俊華;劉佩毛;張華;佘銘鵬;;血漿高密度脂蛋白對內皮祖細胞生長特性的影響[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

3 沈洋;陳光;李飛;鄭德興;李翔;趙文軍;;內皮祖細胞的研究現(xiàn)狀[A];2015年浙江省外科學學術年會暨國家級肝膽胰疾病診治進展學習班論文匯編[C];2015年

4 吳仁華;徐志鋒;肖葉玉;吳仁華;;核磁共振頻譜技術對神經(jīng)干/祖細胞代謝特征的研究現(xiàn)狀及相關問題[A];中華醫(yī)學會第16次全國放射學學術大會論文匯編[C];2009年

5 唐佩弦;;造血干祖細胞移植的細胞生物學基礎[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

6 趙剛;宋明寶;于學軍;朱光旭;于世勇;董紅梅;康華利;黃嵐;;肝細胞生長因子對低密度脂蛋白損傷內皮祖細胞功能的影響[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

7 陳書艷;許勤;王飛;周卿;顏雪蕓;舒紅;榮燁之;;人外周血內皮祖細胞移植促進裸鼠缺血組織血管新生[A];中華醫(yī)學會心血管病分會第八次全國心血管病學術會議匯編[C];2004年

8 張懷勤;季亢挺;楊德業(yè);黃曉燕;林捷;黃偉劍;徐力辛;;內皮祖細胞培養(yǎng)條件的正交設計研究[A];2004年浙江省心血管病學學術年會論文匯編[C];2004年

9 肖方毅;張懷勤;余華;;兔外周血兩類內皮祖細胞的分離,培養(yǎng)和鑒定[A];2006年浙江省心血管病學學術年會論文匯編[C];2006年

10 王磊;趙倩君;侯玲玲;浦亞斌;白春雨;陸濤峰;關偉軍;馬月輝;;雞胚胎心臟祖細胞生物學特性研究[A];第十二次全國畜禽遺傳標記研討會論文集[C];2010年

相關重要報紙文章 前10條

1 第二軍醫(yī)大學附屬長海醫(yī)院臨床神經(jīng)醫(yī)學中心主任 劉建民;內皮祖細胞影響動脈瘤發(fā)生[N];健康報;2012年

2 張燦燦 楊英莉;內皮祖細胞可促血管新生[N];健康報;2006年

3 項盈；王金福;作用于不同周期 參與細胞增殖分化 中藥多環(huán)節(jié)影響造血干/祖細胞[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 葛秋芳;心臟中“祖細胞”：受刺激后可長成心臟新組織[N];新華每日電訊;2007年

5 唐一塵;新方法將成體細胞轉為類祖細胞[N];中國科學報;2017年

6 ;吸半小時“二手煙”,足以損害非吸煙者血管[N];新華每日電訊;2008年

7 張道生;細胞移植促進肺部毛細血管再生[N];中國醫(yī)藥報;2005年

8 記者 胡德榮;多能干細胞可生成多能心血管祖細胞[N];健康報;2013年

9 馮衛(wèi)東;科學家分離出人類胚胎中胚層祖細胞[N];科技日報;2010年

10 通訊員 王其玲 記者 羅堅梅;干細胞，燃起人類絕處逢生新希望[N];杭州日報;2005年

相關博士學位論文 前10條

1 李航;靶向抑制PAI-1促進內皮祖細胞抗靜脈血栓的作用及機制研究[D];吉林大學;2019年

2 董可帥;TGF-β1與HBx協(xié)同作用通過上調miR-199a-3p表達促進肝臟祖細胞的惡性轉化[D];華中科技大學;2019年

3 劉亞杰;自噬參與心外膜祖細胞向冠狀動脈平滑肌細胞分化的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

4 李郁;1-磷酸神經(jīng)鞘氨醇誘導心外膜祖細胞向平滑肌細胞分化的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

5 李勇;血管生長因子AGGF1通過增強內皮祖細胞功能治療糖尿病小鼠后肢缺血[D];華中科技大學;2019年

6 王夢;內皮祖細胞經(jīng)旁分泌作用調控PDGFR-β陽性的周細胞改善缺血再灌注誘導的腎損傷和纖維化[D];華中科技大學;2019年

7 師瑩;ABCG1通過調控內皮祖細胞的功能改善糖尿病血管病變的作用研究[D];天津醫(yī)科大學;2017年

8 王文榮;有氧運動對絕經(jīng)后女性血管內皮功能和內皮祖細胞轉錄組的影響[D];北京體育大學;2018年

9 孔杰;內皮祖細胞來源的外泌體對大鼠頸動脈球囊拉傷的作用及機制[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2018年

10 袁白銀;WDR1調控的肌動蛋白動態(tài)在小鼠心肌細胞生長與維持以及第二心場祖細胞發(fā)育過程中的功能研究[D];南京大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 張麗萍;MHCⅡ基因對內皮祖細胞移植治療ARDS的影響[D];內蒙古醫(yī)科大學;2019年

2 劉釗;小鼠骨髓淋巴管內皮祖細胞分離培養(yǎng)與鑒定[D];石河子大學;2019年

3 李麗玲;一種新來源的內皮祖細胞提取分離方法及SIRT6對B細胞發(fā)育及BCR信號的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

4 陶星宇;腺相關病毒介導hVEGF165基因和SDF-1基因共轉染小鼠內皮祖細胞的實驗研究[D];南昌大學;2019年

5 柯娩英;硫化氫改善高糖環(huán)境下內皮祖細胞功能活性的機制研究[D];南昌大學;2019年

6 李娜;MiR-129-1-3p和MiR-214-3p在周期性張應變誘導內皮祖細胞分化中的作用[D];上海交通大學;2018年

7 袁芳;cxcl12基因修飾的內皮祖細胞進一步促進少突膠質前體細胞的功能作用研究[D];上海交通大學;2018年

8 艾詩媛;姜黃素對動脈粥樣硬化大鼠血管內皮及血內皮祖細胞的保護作用及其機制[D];西南醫(yī)科大學;2019年

9 常爽;CXCL12單體或二聚體基因修飾的內皮祖細胞功能作用研究[D];上海交通大學;2017年

10 陳江龍;阻塞性黃疸TGR5激活抑制內皮祖細胞成血管活性[D];福建醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2755832