【摘要】：目的:研究臨床分離的泛耐藥鮑曼不動桿菌與敏感鮑曼不動桿菌的毒力差異以及泛耐藥鮑曼不動桿菌形成生物膜前后毒力的區(qū)別,為臨床管理和控制泛耐藥鮑曼不動桿菌提供理論基礎(chǔ)。方法:用不同濃度的菌液經(jīng)腹足注射至大蠟螟幼蟲體內(nèi),以檢測泛耐藥鮑曼不動桿菌菌株和敏感鮑曼不動桿菌菌株對大蠟螟幼蟲表現(xiàn)出的毒力區(qū)別;采用體外競爭實驗,涂板計數(shù)法計算各組菌落數(shù),分別比較兩菌在體外單獨生長的情況下,以及等濃度混合生長時生長能力的差別;另外,用鮑曼不動桿菌在大蠟螟幼蟲體內(nèi)競爭實驗?zāi)Ｐ?計算各時間點蟲體血淋巴細菌負荷,比較兩菌單獨感染大蠟螟幼蟲及混合后感染大蠟螟幼蟲時對大蠟螟血淋巴載菌量濃度的差別。將巨噬細胞RAW264.7培養(yǎng)后,分別接種泛耐藥鮑曼不動桿菌和敏感鮑曼不動桿菌菌液,酶標儀A450測定各組數(shù)值后,利用公式計算各組巨噬細胞的存活率,比較兩組菌株對巨噬細胞的侵襲能力。分別將浮游狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動桿菌菌液與生物膜狀態(tài)下的鮑曼不動桿菌菌液以最適接種濃度通過腹足注射至大蠟螟幼蟲體內(nèi),檢測浮游狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動桿菌和生物膜狀態(tài)下鮑曼不動桿菌對大蠟螟幼蟲的毒力。將巨噬細胞RAW264.7培養(yǎng)后,接種浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動桿菌菌液,用酶標儀A450測定各組數(shù)值,計算各組巨噬細胞存活率,比較兩組菌株對巨噬細胞的侵襲能力。結(jié)果:經(jīng)菌株最適接種量實驗結(jié)果可得出,隨著感染濃度的增加,幼蟲存活個數(shù)下降的越明顯;對照組接種磷酸緩沖鹽溶液(PBS)的大蠟螟幼蟲96h內(nèi)未見死亡;根據(jù)大蠟螟幼蟲生存曲線,可以確定泛耐藥鮑曼不動桿菌菌株對大蠟螟幼蟲的半數(shù)致死量(LD_(50))為(1.311±0.213)×10~5CFU,敏感鮑曼不動桿菌菌株對大蠟螟幼蟲的半數(shù)致死量(LD_(50))為(1.262±0.112)×10~4CFU,最適接種濃度定為1.×10~5CFU/mL。在不同耐藥性的鮑曼不動桿菌對大蠟螟幼蟲毒力實驗可觀察到,給予最適接種濃度,在24h與72小時時間點觀察到,大蠟螟幼蟲的存活個數(shù)存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),并且泛耐藥鮑曼不動桿菌組的大蠟螟幼蟲存活個數(shù)高于敏感鮑曼不動桿菌組。體外生長競爭實驗,兩菌株混合培養(yǎng)24h后,泛耐藥鮑曼不動桿菌菌液濃度較敏感鮑曼不動桿菌菌液濃度低0.484 Log of CFU/mL,體外環(huán)境下混合培養(yǎng)后,菌液濃度有統(tǒng)計學(xué)差異存在(P0.05)。兩組菌株的混合液感染大蠟螟幼蟲后,第12h時與24h時,敏感鮑曼不動桿菌菌液濃度和泛耐藥鮑曼不動桿菌菌液濃度兩者比較后有統(tǒng)計學(xué)差異存在(CI_(12)=O.813,CI_(24)=0.872,P0.05);不同測量時間及不同菌株在大蠟螟幼蟲體內(nèi)環(huán)境下混合生長后,大蠟螟幼蟲血淋巴細菌負荷濃度有統(tǒng)計學(xué)差異存在(P0.05)。敏感鮑曼不動桿菌和泛耐藥鮑曼不動桿菌單獨感染巨噬細胞后,巨噬細胞的存活率逐漸下降,24小時后,敏感與泛耐藥鮑曼不動桿菌的巨噬細胞成活率比較結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異,并且泛耐藥鮑曼不動桿菌組的巨噬細胞存活率低于敏感鮑曼不動桿菌組。在26株臨床分離的泛耐藥菌株,有16株經(jīng)誘導(dǎo)可產(chǎn)生生物膜,占泛耐藥鮑曼不動桿菌的比例為61.54%。在大蠟螟幼蟲的存活率試驗中可觀察到,浮游狀態(tài)與生物膜狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動桿菌感染大蠟螟幼蟲的存活個數(shù)在統(tǒng)計學(xué)上并無明顯差異。接種PBS的大蠟螟幼蟲96h內(nèi)未見死亡,但將不同時間點的交互作用輸入進統(tǒng)計學(xué)分析軟件后,可得出P=0.000,所以,泛耐藥鮑曼不動桿菌成膜前后在不同測量時間情況下接種后的大蠟螟幼蟲存活個數(shù)之間有統(tǒng)計學(xué)差異存在。浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)菌株分別感染巨噬細胞后,巨噬細胞的存活率逐漸下降,24小時后,結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析可得,浮游組的巨噬細胞成活率為(95.232±1.828)×100%,生物膜組的巨噬細胞存活率為(99.691±1.097)×100%,P=0.0346,可知成膜前后泛耐藥鮑曼不動桿菌的巨噬細胞成活率比較后,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:單獨存在的情況下,泛耐藥鮑曼不動桿菌組的毒力強于敏感鮑曼不動桿菌組,主要表現(xiàn)為感染后使大蠟螟幼蟲及巨噬細胞RAW264.7的存活率下降;混合情況下,泛耐藥鮑曼不動桿菌的生物適合度代價主要表現(xiàn)在該組菌株在體內(nèi)、外生長競爭力下降,并且對大蠟螟幼蟲及巨噬細胞RAW264.7的毒力減弱。浮游狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動桿菌與生物膜狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動桿菌的毒力有統(tǒng)計學(xué)差異存在,在浮游狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動桿菌對大蠟螟幼蟲及巨噬細胞RAW264.7的毒力強于生物膜狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動桿菌。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R446.5
【圖文】：

的生存率均表現(xiàn)出不同程度的明顯下降。在同一時間點上，隨著度的增大，大蠟螟幼蟲的生存力逐漸下降。接種 PBS 的大蠟螟未見死亡。大蠟螟幼蟲的生存曲線顯示（圖 2.1、圖 2.2。），泛耐桿菌對大蠟螟幼蟲的半數(shù)致死量為（1.311±0.213）×105CFU，動桿菌對大蠟螟幼蟲的半數(shù)致死量為（1.262±0.112）×104CFU。果顯示數(shù)據(jù)分布不符合球形檢驗（MauchlyW=0.039,P=0.001），一元方差分析結(jié)果為準。使用 Greenhouse-Geisser 校正后，同一間點內(nèi)不同濃度之間大蠟螟幼蟲的存活數(shù)存在統(tǒng)計學(xué)差異（F=116）。進一步考慮不同時間點與組別之間的交互作用后，不同測量濃度的大蠟螟幼蟲存活數(shù)之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義顯著（F=11.9），根據(jù)生存曲線將最適接種濃度定為 1.0×106CFU/mL。

圖 2.2 不同濃度的敏感鮑曼不動桿菌感染蠟螟幼蟲后的生存曲線Figure 2.2 Survival curve of Acinetobacter baumannii infected with Galleria mellonella larvae different concentrations 不同耐藥性菌株對大蠟螟幼蟲的毒力實驗予最適接種濃度后，不論感染敏感鮑曼不動桿菌菌株還是泛耐藥桿菌菌株，大蠟螟幼蟲的生存率均表現(xiàn)出不同程度的明顯下降。泛不動桿菌與敏感鮑曼不動桿菌感染第 48h 與第 96h，大蠟螟幼蟲的并無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異差異（48h：泛耐藥組 vs. 敏感組，P＞0.99泛耐藥組 vs. 敏感組，P＞0.999）。但在第 24h 與第 72h 時，泛耐藥桿菌組與敏感鮑曼不動桿菌組的大蠟螟幼蟲存活個數(shù)存在統(tǒng)計學(xué)h：泛耐藥組 vs.敏感組，P=0.0131；72h: 泛耐藥組 vs.敏感組，P=0.02.3，表 1）.接種 PBS 的大蠟螟幼蟲 96h 內(nèi)未見死亡（未在圖中標出

臨床分離鮑曼不動桿菌耐藥性和毒力的關(guān)聯(lián)性研究 碩士學(xué)表 1：不同耐藥性菌株對大蠟螟幼蟲的毒力實驗Table The virulence test of different drug resistant strains to the Galleria mellonella larvae菌株 24 小時 48 小時 72 小時 96 小時 P 總泛耐藥 7.11±0.900 5.42±1.027 3.81±0.963 0.27±0.4520.00敏感型 7.23±0.652 5.72±1.179 4.68±0.935 0.33±0.485t 2.856 1.149 3.973 0.246P 0.0131 ＞0.999 0.0029 ＞0.999注：P 值為同一測試時間點用獨立樣本 t 檢驗法兩兩比較之后的結(jié)果，P總為單因素重復(fù)測量析的最終結(jié)果。

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本文編號：2755494