【摘要】：目的:研究臨床分離的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌與敏感鮑曼不動(dòng)桿菌的毒力差異以及泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌形成生物膜前后毒力的區(qū)別,為臨床管理和控制泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌提供理論基礎(chǔ)。方法:用不同濃度的菌液經(jīng)腹足注射至大蠟螟幼蟲(chóng)體內(nèi),以檢測(cè)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌株和敏感鮑曼不動(dòng)桿菌菌株對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)表現(xiàn)出的毒力區(qū)別;采用體外競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn),涂板計(jì)數(shù)法計(jì)算各組菌落數(shù),分別比較兩菌在體外單獨(dú)生長(zhǎng)的情況下,以及等濃度混合生長(zhǎng)時(shí)生長(zhǎng)能力的差別;另外,用鮑曼不動(dòng)桿菌在大蠟螟幼蟲(chóng)體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)蟲(chóng)體血淋巴細(xì)菌負(fù)荷,比較兩菌單獨(dú)感染大蠟螟幼蟲(chóng)及混合后感染大蠟螟幼蟲(chóng)時(shí)對(duì)大蠟螟血淋巴載菌量濃度的差別。將巨噬細(xì)胞RAW264.7培養(yǎng)后,分別接種泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌和敏感鮑曼不動(dòng)桿菌菌液,酶標(biāo)儀A450測(cè)定各組數(shù)值后,利用公式計(jì)算各組巨噬細(xì)胞的存活率,比較兩組菌株對(duì)巨噬細(xì)胞的侵襲能力。分別將浮游狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌液與生物膜狀態(tài)下的鮑曼不動(dòng)桿菌菌液以最適接種濃度通過(guò)腹足注射至大蠟螟幼蟲(chóng)體內(nèi),檢測(cè)浮游狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌和生物膜狀態(tài)下鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的毒力。將巨噬細(xì)胞RAW264.7培養(yǎng)后,接種浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌液,用酶標(biāo)儀A450測(cè)定各組數(shù)值,計(jì)算各組巨噬細(xì)胞存活率,比較兩組菌株對(duì)巨噬細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果:經(jīng)菌株最適接種量實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出,隨著感染濃度的增加,幼蟲(chóng)存活個(gè)數(shù)下降的越明顯;對(duì)照組接種磷酸緩沖鹽溶液(PBS)的大蠟螟幼蟲(chóng)96h內(nèi)未見(jiàn)死亡;根據(jù)大蠟螟幼蟲(chóng)生存曲線,可以確定泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌株對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的半數(shù)致死量(LD_(50))為(1.311±0.213)×10~5CFU,敏感鮑曼不動(dòng)桿菌菌株對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的半數(shù)致死量(LD_(50))為(1.262±0.112)×10~4CFU,最適接種濃度定為1.×10~5CFU/mL。在不同耐藥性的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)毒力實(shí)驗(yàn)可觀察到,給予最適接種濃度,在24h與72小時(shí)時(shí)間點(diǎn)觀察到,大蠟螟幼蟲(chóng)的存活個(gè)數(shù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),并且泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌組的大蠟螟幼蟲(chóng)存活個(gè)數(shù)高于敏感鮑曼不動(dòng)桿菌組。體外生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn),兩菌株混合培養(yǎng)24h后,泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌液濃度較敏感鮑曼不動(dòng)桿菌菌液濃度低0.484 Log of CFU/mL,體外環(huán)境下混合培養(yǎng)后,菌液濃度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在(P0.05)。兩組菌株的混合液感染大蠟螟幼蟲(chóng)后,第12h時(shí)與24h時(shí),敏感鮑曼不動(dòng)桿菌菌液濃度和泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌液濃度兩者比較后有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在(CI_(12)=O.813,CI_(24)=0.872,P0.05);不同測(cè)量時(shí)間及不同菌株在大蠟螟幼蟲(chóng)體內(nèi)環(huán)境下混合生長(zhǎng)后,大蠟螟幼蟲(chóng)血淋巴細(xì)菌負(fù)荷濃度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在(P0.05)。敏感鮑曼不動(dòng)桿菌和泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌單獨(dú)感染巨噬細(xì)胞后,巨噬細(xì)胞的存活率逐漸下降,24小時(shí)后,敏感與泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的巨噬細(xì)胞成活率比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,并且泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌組的巨噬細(xì)胞存活率低于敏感鮑曼不動(dòng)桿菌組。在26株臨床分離的泛耐藥菌株,有16株經(jīng)誘導(dǎo)可產(chǎn)生生物膜,占泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的比例為61.54%。在大蠟螟幼蟲(chóng)的存活率試驗(yàn)中可觀察到,浮游狀態(tài)與生物膜狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染大蠟螟幼蟲(chóng)的存活個(gè)數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上并無(wú)明顯差異。接種PBS的大蠟螟幼蟲(chóng)96h內(nèi)未見(jiàn)死亡,但將不同時(shí)間點(diǎn)的交互作用輸入進(jìn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件后,可得出P=0.000,所以,泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌成膜前后在不同測(cè)量時(shí)間情況下接種后的大蠟螟幼蟲(chóng)存活個(gè)數(shù)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在。浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)菌株分別感染巨噬細(xì)胞后,巨噬細(xì)胞的存活率逐漸下降,24小時(shí)后,結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可得,浮游組的巨噬細(xì)胞成活率為(95.232±1.828)×100%,生物膜組的巨噬細(xì)胞存活率為(99.691±1.097)×100%,P=0.0346,可知成膜前后泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的巨噬細(xì)胞成活率比較后,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:單獨(dú)存在的情況下,泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌組的毒力強(qiáng)于敏感鮑曼不動(dòng)桿菌組,主要表現(xiàn)為感染后使大蠟螟幼蟲(chóng)及巨噬細(xì)胞RAW264.7的存活率下降;混合情況下,泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的生物適合度代價(jià)主要表現(xiàn)在該組菌株在體內(nèi)、外生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)力下降,并且對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)及巨噬細(xì)胞RAW264.7的毒力減弱。浮游狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌與生物膜狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的毒力有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在,在浮游狀態(tài)下泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)及巨噬細(xì)胞RAW264.7的毒力強(qiáng)于生物膜狀態(tài)下的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5
【圖文】：

的生存率均表現(xiàn)出不同程度的明顯下降。在同一時(shí)間點(diǎn)上，隨著度的增大，大蠟螟幼蟲(chóng)的生存力逐漸下降。接種 PBS 的大蠟螟未見(jiàn)死亡。大蠟螟幼蟲(chóng)的生存曲線顯示（圖 2.1、圖 2.2。），泛耐桿菌對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的半數(shù)致死量為（1.311±0.213）×105CFU，動(dòng)桿菌對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的半數(shù)致死量為（1.262±0.112）×104CFU。果顯示數(shù)據(jù)分布不符合球形檢驗(yàn)（MauchlyW=0.039,P=0.001），一元方差分析結(jié)果為準(zhǔn)。使用 Greenhouse-Geisser 校正后，同一間點(diǎn)內(nèi)不同濃度之間大蠟螟幼蟲(chóng)的存活數(shù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=116）。進(jìn)一步考慮不同時(shí)間點(diǎn)與組別之間的交互作用后，不同測(cè)量濃度的大蠟螟幼蟲(chóng)存活數(shù)之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（F=11.9），根據(jù)生存曲線將最適接種濃度定為 1.0×106CFU/mL。

圖 2.2 不同濃度的敏感鮑曼不動(dòng)桿菌感染蠟螟幼蟲(chóng)后的生存曲線Figure 2.2 Survival curve of Acinetobacter baumannii infected with Galleria mellonella larvae different concentrations 不同耐藥性菌株對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的毒力實(shí)驗(yàn)予最適接種濃度后，不論感染敏感鮑曼不動(dòng)桿菌菌株還是泛耐藥桿菌菌株，大蠟螟幼蟲(chóng)的生存率均表現(xiàn)出不同程度的明顯下降。泛不動(dòng)桿菌與敏感鮑曼不動(dòng)桿菌感染第 48h 與第 96h，大蠟螟幼蟲(chóng)的并無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異差異（48h：泛耐藥組 vs. 敏感組，P＞0.99泛耐藥組 vs. 敏感組，P＞0.999）。但在第 24h 與第 72h 時(shí)，泛耐藥桿菌組與敏感鮑曼不動(dòng)桿菌組的大蠟螟幼蟲(chóng)存活個(gè)數(shù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)h：泛耐藥組 vs.敏感組，P=0.0131；72h: 泛耐藥組 vs.敏感組，P=0.02.3，表 1）.接種 PBS 的大蠟螟幼蟲(chóng) 96h 內(nèi)未見(jiàn)死亡（未在圖中標(biāo)出

臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性和毒力的關(guān)聯(lián)性研究 碩士學(xué)表 1：不同耐藥性菌株對(duì)大蠟螟幼蟲(chóng)的毒力實(shí)驗(yàn)Table The virulence test of different drug resistant strains to the Galleria mellonella larvae菌株 24 小時(shí) 48 小時(shí) 72 小時(shí) 96 小時(shí) P 總泛耐藥 7.11±0.900 5.42±1.027 3.81±0.963 0.27±0.4520.00敏感型 7.23±0.652 5.72±1.179 4.68±0.935 0.33±0.485t 2.856 1.149 3.973 0.246P 0.0131 ＞0.999 0.0029 ＞0.999注：P 值為同一測(cè)試時(shí)間點(diǎn)用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)法兩兩比較之后的結(jié)果，P總為單因素重復(fù)測(cè)量析的最終結(jié)果。

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本文編號(hào)：2755494