【摘要】：目的 探究甘肅省蘭州市漢族人群CXC型趨化因子配體12(chemokine CXC motif ligand 12,CXCL12)及其受體趨化因子受體4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及冠狀動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性。方法 入選2017年11月至2018年6月在蘭州大學(xué)第二醫(yī)院住院治療的302例無(wú)血緣關(guān)系的CAD患者作為病例組,并以同期年齡、性別與病例組相匹配的302名的體檢者作為健康對(duì)照組。應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR法(Kompetitive Allele Specific PCR,KASP)完成所有選定的易感基因SNPs分型,并以Sanger測(cè)序?qū)Ψ中徒Y(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;根據(jù)臨床冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果采用Gensini評(píng)分對(duì)患者冠狀動(dòng)脈的狹窄程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理使用SPSS進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析CAD組以及對(duì)照組等位基因以及基因型頻率之間的差異,二元Logistic回歸分析和多因素線(xiàn)性回歸分析分析不同遺傳模型下基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及冠狀動(dòng)脈狹窄程度之間的相關(guān)性。另外,采用SHEsis在線(xiàn)軟件以及haploview軟件計(jì)算Hardy-Weinberg遺傳平衡,分析連鎖不平衡和構(gòu)建單倍型。結(jié)果 (1)對(duì)符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測(cè)的4個(gè)SNP(rs2297630 GA、rs2322864 TC、rs266085CT和rs266087 GA)進(jìn)行卡方統(tǒng)計(jì)分析,4個(gè)位點(diǎn)在CAD組與對(duì)照組間基因型頻率以及等位基因頻率比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。(2)在三種遺傳模型下,對(duì)兩組間符合HW平衡的位點(diǎn)進(jìn)行發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)回歸分析。在多因素logistics回歸分析中發(fā)現(xiàn),位點(diǎn)rs2297630除了在共顯性模型中AG基因型與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)(P=0.180),其余遺傳模型均與冠心病的發(fā)病正相關(guān),是CAD發(fā)病的危險(xiǎn)因素(P均0.05)。(A vs G:O R=2.32,95%CI=1.62-3.31;P0.01),攜帶AA基因型與攜帶GG基因型相比會(huì)顯著增加CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(AA vs GG:OR=10.21,95%CI=3.98-26.20;P0.01)。在調(diào)整性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙史、GLU、TG、TC、HDL、L DL多種傳統(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)因素對(duì)關(guān)聯(lián)性分析的影響前后,CXCR4上多態(tài)性位點(diǎn)rs2322864均與CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)(C vs T:OR=1.66,95%CI=1.20-2.30;P=0.002),攜帶CT基因型與攜帶TT基因型相比會(huì)顯著增加CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(CT vs TT:OR=2.03,95%CI=1.35-3.06;P=0.001)位于CXCL12基因上的多態(tài)性位點(diǎn)r s266085和rs266087在單因素和多因素回歸分析控制其他風(fēng)險(xiǎn)因素影響前后均與CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著負(fù)相關(guān)(T vs C:OR=0.71,95%CI=0.55-0.94;P=0.015、A vs G:OR=0.72,95%CI=0.55-0.94;P=0.016),是CAD的保護(hù)因素。(3)通過(guò)秩和檢驗(yàn)分析研究對(duì)象多態(tài)性位點(diǎn)不同基因型之間Gensini評(píng)分的差異;結(jié)果顯示,位點(diǎn)rs2297630純合突變型AA與野生型GG以及雜合突變型AG之間Gensini評(píng)分均值存在顯著性差異(P均0.05),AG基因型與GG基因型之間Gensini評(píng)分無(wú)顯著性差異(P=0.85)。位點(diǎn)rs2322864各基因型之間Gensini評(píng)分不存在顯著性差異(P=0.93)位點(diǎn)rs266085野生純合型CC與突變雜合型TC之間Gen sini評(píng)分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03),總體組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.085);位點(diǎn)rs266087總體不同基因型組間Gensini評(píng)分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.036),野生純合型GG與突變雜合型AG之間Gensini評(píng)分具有顯著性差異(P=0.011),其余基因型之間Gensini評(píng)分不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。(4)在探究SNP位點(diǎn)rs2297630與冠狀動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性分析中,單因素線(xiàn)性回歸分析發(fā)現(xiàn)A等位基因與冠狀動(dòng)脈狹窄程度正相關(guān)(β=0.10,95%CI=0.02-0.17;P=0.012);純合突變AA基因型與野生型GG相比,冠狀動(dòng)脈狹窄程度增加(β=0.16,95%CI=0.04-0.23;P=0.006),同時(shí)在隱性模型中,也與冠脈狹窄程度正相關(guān)。在校正了包括性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙、GLU、TG、TC、HDL、LDL、病變支數(shù)等混雜因素后,A等位基因仍與冠狀動(dòng)脈狹窄程度正相關(guān)(β=0.07,95%CI=0.001-0.13;P=0.048);同時(shí),攜帶AA基因型(β=0.12,95%CI=0.01-0.18;P=0.024)的CAD患者和隱性遺傳模型(AA vs AG+GG:β=0.12,95%CI=0.02-0.18;P=0.020)與冠狀動(dòng)脈的狹窄程度顯著正相關(guān)。其余多態(tài)性位點(diǎn)rs2322864、rs266085和rs266087均與冠脈狹窄程度無(wú)關(guān)(P均0.05)。(5)連鎖不平衡分析顯示CXCL12上多態(tài)性位點(diǎn)rs266087與rs266085能夠構(gòu)建單倍型(D’=0.745,r2=0.529,P0.05);rs2297630與rs266085、rs266087均不能構(gòu)成有效單倍型(D’=0.482,r2=0.056;D’=0.321,r2=0.023,P均0.05);單倍型分析結(jié)果顯示,rs266087和rs266085位點(diǎn)單倍型GT、GC和AC在病例組和對(duì)照組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。單倍型AC和GT均與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)負(fù)相關(guān),是冠心病的保護(hù)因素(OR均1,P均0.05);而GC單倍型與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)正相關(guān),是冠心病的危險(xiǎn)因素(OR1,P0.05)。結(jié)論 (1)甘肅蘭州漢族人群中CXCL12基因多態(tài)性位點(diǎn)rs2297630、rs266085和rs266087與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)。其中位點(diǎn)rs2297630攜帶AA基因型的人群冠狀動(dòng)脈狹窄程度增高,其余多態(tài)性位點(diǎn)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化狹窄程度無(wú)相關(guān)性。(2)甘肅蘭州漢族人群中CXCR4基因多態(tài)性位點(diǎn)rs2322864與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān),但與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化狹窄程度無(wú)相關(guān)性。(3)CXCL12多態(tài)性位點(diǎn)rs266087、rs266085構(gòu)建的單倍型與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R541.4;R440
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 CXCL12和CXCR4基因多態(tài)性與冠心病以及冠狀動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)性研究2.3.1 標(biāo)本收集和保存收集實(shí)驗(yàn)對(duì)象空腹8 h后的外周靜脈血3ml（乙二胺四乙酸二鉀抗凝），并進(jìn)行分組，CAD組和對(duì)照組分別編號(hào)為 H-流水號(hào) 、 C-流水號(hào) ,置于-40℃冰箱內(nèi)保存待用。2.3.2 基因組 DNA 提取2.3 方法

high-density lipoprotein cholesterol; LDL-C: low-density lipoprotein cholesterol.3.2 SNP 位點(diǎn)分型的基本情況利用如圖2所示經(jīng)電泳顯示成功提取的完整基因組DNA進(jìn)行 KASP分型后，根據(jù)圖 3 熒光散點(diǎn)讀取結(jié)果按照如下確定基因的具體基因型：聚集在接近 X 軸的熒光散點(diǎn)所代表的樣本的基因型為突變純合基因型，聚集在接近 Y 軸熒光散點(diǎn)所代表的樣本為野生純合基因型，在中間聚集的熒光散點(diǎn)所代表的樣本基因型為兩種等位基因的雜合型；如有顯示黑色的樣本，可能由于 DNA 濃度過(guò)低，擴(kuò)增產(chǎn)物未被明確分型產(chǎn)生。此外，如圖 4 顯示，經(jīng)隨機(jī)抽樣測(cè)序驗(yàn)證，4 個(gè) SNP的 KASP 基因分型結(jié)果與測(cè)序結(jié)果完全一致。

圖 3 分型熒光散點(diǎn)圖聚集在接近 X 軸的熒光散點(diǎn)所代表的樣本的基因型為突變純合基因型；聚集在接近 Y軸熒光散點(diǎn)所代表的樣本為野生純合基因型；在中間聚集的熒光散點(diǎn)所代表的樣本基因型為兩種等位基因的雜合型。

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本文編號(hào)：2752200