【摘要】：目的 探究甘肅省蘭州市漢族人群CXC型趨化因子配體12(chemokine CXC motif ligand 12,CXCL12)及其受體趨化因子受體4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險以及冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性。方法 入選2017年11月至2018年6月在蘭州大學(xué)第二醫(yī)院住院治療的302例無血緣關(guān)系的CAD患者作為病例組,并以同期年齡、性別與病例組相匹配的302名的體檢者作為健康對照組。應(yīng)用競爭性等位基因特異性PCR法(Kompetitive Allele Specific PCR,KASP)完成所有選定的易感基因SNPs分型,并以Sanger測序?qū)Ψ中徒Y(jié)果進行驗證;根據(jù)臨床冠狀動脈造影結(jié)果采用Gensini評分對患者冠狀動脈的狹窄程度進行評價。數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理使用SPSS進行卡方檢驗分析CAD組以及對照組等位基因以及基因型頻率之間的差異,二元Logistic回歸分析和多因素線性回歸分析分析不同遺傳模型下基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險以及冠狀動脈狹窄程度之間的相關(guān)性。另外,采用SHEsis在線軟件以及haploview軟件計算Hardy-Weinberg遺傳平衡,分析連鎖不平衡和構(gòu)建單倍型。結(jié)果 (1)對符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測的4個SNP(rs2297630 GA、rs2322864 TC、rs266085CT和rs266087 GA)進行卡方統(tǒng)計分析,4個位點在CAD組與對照組間基因型頻率以及等位基因頻率比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。(2)在三種遺傳模型下,對兩組間符合HW平衡的位點進行發(fā)病風(fēng)險回歸分析。在多因素logistics回歸分析中發(fā)現(xiàn),位點rs2297630除了在共顯性模型中AG基因型與冠心病的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)(P=0.180),其余遺傳模型均與冠心病的發(fā)病正相關(guān),是CAD發(fā)病的危險因素(P均0.05)。(A vs G:O R=2.32,95%CI=1.62-3.31;P0.01),攜帶AA基因型與攜帶GG基因型相比會顯著增加CAD的發(fā)病風(fēng)險(AA vs GG:OR=10.21,95%CI=3.98-26.20;P0.01)。在調(diào)整性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙史、GLU、TG、TC、HDL、L DL多種傳統(tǒng)風(fēng)險因素對關(guān)聯(lián)性分析的影響前后,CXCR4上多態(tài)性位點rs2322864均與CAD的發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān)(C vs T:OR=1.66,95%CI=1.20-2.30;P=0.002),攜帶CT基因型與攜帶TT基因型相比會顯著增加CAD的發(fā)病風(fēng)險(CT vs TT:OR=2.03,95%CI=1.35-3.06;P=0.001)位于CXCL12基因上的多態(tài)性位點r s266085和rs266087在單因素和多因素回歸分析控制其他風(fēng)險因素影響前后均與CAD的發(fā)病風(fēng)險顯著負相關(guān)(T vs C:OR=0.71,95%CI=0.55-0.94;P=0.015、A vs G:OR=0.72,95%CI=0.55-0.94;P=0.016),是CAD的保護因素。(3)通過秩和檢驗分析研究對象多態(tài)性位點不同基因型之間Gensini評分的差異;結(jié)果顯示,位點rs2297630純合突變型AA與野生型GG以及雜合突變型AG之間Gensini評分均值存在顯著性差異(P均0.05),AG基因型與GG基因型之間Gensini評分無顯著性差異(P=0.85)。位點rs2322864各基因型之間Gensini評分不存在顯著性差異(P=0.93)位點rs266085野生純合型CC與突變雜合型TC之間Gen sini評分差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.03),總體組間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.085);位點rs266087總體不同基因型組間Gensini評分差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.036),野生純合型GG與突變雜合型AG之間Gensini評分具有顯著性差異(P=0.011),其余基因型之間Gensini評分不具有統(tǒng)計學(xué)差異(P均0.05)。(4)在探究SNP位點rs2297630與冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性分析中,單因素線性回歸分析發(fā)現(xiàn)A等位基因與冠狀動脈狹窄程度正相關(guān)(β=0.10,95%CI=0.02-0.17;P=0.012);純合突變AA基因型與野生型GG相比,冠狀動脈狹窄程度增加(β=0.16,95%CI=0.04-0.23;P=0.006),同時在隱性模型中,也與冠脈狹窄程度正相關(guān)。在校正了包括性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙、GLU、TG、TC、HDL、LDL、病變支數(shù)等混雜因素后,A等位基因仍與冠狀動脈狹窄程度正相關(guān)(β=0.07,95%CI=0.001-0.13;P=0.048);同時,攜帶AA基因型(β=0.12,95%CI=0.01-0.18;P=0.024)的CAD患者和隱性遺傳模型(AA vs AG+GG:β=0.12,95%CI=0.02-0.18;P=0.020)與冠狀動脈的狹窄程度顯著正相關(guān)。其余多態(tài)性位點rs2322864、rs266085和rs266087均與冠脈狹窄程度無關(guān)(P均0.05)。(5)連鎖不平衡分析顯示CXCL12上多態(tài)性位點rs266087與rs266085能夠構(gòu)建單倍型(D’=0.745,r2=0.529,P0.05);rs2297630與rs266085、rs266087均不能構(gòu)成有效單倍型(D’=0.482,r2=0.056;D’=0.321,r2=0.023,P均0.05);單倍型分析結(jié)果顯示,rs266087和rs266085位點單倍型GT、GC和AC在病例組和對照組間存在統(tǒng)計學(xué)差異(P均0.05)。單倍型AC和GT均與冠心病發(fā)病風(fēng)險負相關(guān),是冠心病的保護因素(OR均1,P均0.05);而GC單倍型與冠心病發(fā)病風(fēng)險正相關(guān),是冠心病的危險因素(OR1,P0.05)。結(jié)論 (1)甘肅蘭州漢族人群中CXCL12基因多態(tài)性位點rs2297630、rs266085和rs266087與冠心病的發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān)。其中位點rs2297630攜帶AA基因型的人群冠狀動脈狹窄程度增高,其余多態(tài)性位點與冠狀動脈粥樣硬化狹窄程度無相關(guān)性。(2)甘肅蘭州漢族人群中CXCR4基因多態(tài)性位點rs2322864與冠心病的發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān),但與冠狀動脈粥樣硬化狹窄程度無相關(guān)性。(3)CXCL12多態(tài)性位點rs266087、rs266085構(gòu)建的單倍型與冠心病的發(fā)病風(fēng)險相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R541.4;R440
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 CXCL12和CXCR4基因多態(tài)性與冠心病以及冠狀動脈狹窄程度相關(guān)性研究2.3.1 標(biāo)本收集和保存收集實驗對象空腹8 h后的外周靜脈血3ml（乙二胺四乙酸二鉀抗凝），并進行分組，CAD組和對照組分別編號為 H-流水號 、 C-流水號 ,置于-40℃冰箱內(nèi)保存待用。2.3.2 基因組 DNA 提取2.3 方法

high-density lipoprotein cholesterol; LDL-C: low-density lipoprotein cholesterol.3.2 SNP 位點分型的基本情況利用如圖2所示經(jīng)電泳顯示成功提取的完整基因組DNA進行 KASP分型后，根據(jù)圖 3 熒光散點讀取結(jié)果按照如下確定基因的具體基因型：聚集在接近 X 軸的熒光散點所代表的樣本的基因型為突變純合基因型，聚集在接近 Y 軸熒光散點所代表的樣本為野生純合基因型，在中間聚集的熒光散點所代表的樣本基因型為兩種等位基因的雜合型；如有顯示黑色的樣本，可能由于 DNA 濃度過低，擴增產(chǎn)物未被明確分型產(chǎn)生。此外，如圖 4 顯示，經(jīng)隨機抽樣測序驗證，4 個 SNP的 KASP 基因分型結(jié)果與測序結(jié)果完全一致。

圖 3 分型熒光散點圖聚集在接近 X 軸的熒光散點所代表的樣本的基因型為突變純合基因型；聚集在接近 Y軸熒光散點所代表的樣本為野生純合基因型；在中間聚集的熒光散點所代表的樣本基因型為兩種等位基因的雜合型。

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本文編號：2752200