【摘要】：弱激光療法(LLLT)作為一種安全可靠的物理干預(yù)手段,低能量激光照射機(jī)體組織后,激活特定光受體,引起光熱效應(yīng)、光化反應(yīng)、光敏反應(yīng)等生物調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)微環(huán)境,調(diào)整細(xì)胞恢復(fù)至正常水平。一方面,LLLT可以提高細(xì)胞增殖能力,另一方面,在特定波長下激活干細(xì)胞多向分化的潛能。干細(xì)胞移植成為藥物治療、手術(shù)治療之后的新一輪醫(yī)療技術(shù)革命。當(dāng)前,生物因子誘導(dǎo)干細(xì)胞神經(jīng)方向分化是最為安全的手段,但誘導(dǎo)周期長,細(xì)胞活性大大減弱;化學(xué)誘導(dǎo)干細(xì)胞神經(jīng)方向分化效率高,但細(xì)胞易受到化學(xué)毒性的影響,危險(xiǎn)性是其最大的弊端。基于當(dāng)前研究現(xiàn)狀,本文從細(xì)胞分子角度探討LLLT聯(lián)合生物誘導(dǎo)劑的干預(yù)手段對干細(xì)胞定向神經(jīng)分化的引導(dǎo)調(diào)控作用,為LLLT的臨床應(yīng)用提供理論支持。體外提取、鑒定及培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs),流式細(xì)胞儀對提取細(xì)胞的表面抗原CD31、CD34、CD73、CD90、CD105表達(dá)量檢測,結(jié)果表明提取細(xì)胞為hUCMSCs。MTT法篩選光學(xué)參量635 nm波長、3、4 J/m2能量密度和20 mW/cm2功率密度可以促進(jìn)hUCMSCs增殖。hUCMSCs誘導(dǎo)神經(jīng)分化過程以LLLT聯(lián)合腦脊液(CSF/iCSF)為誘導(dǎo)方案,對干細(xì)胞形態(tài)、神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志蛋白(nestin、neuN、GFAP)、上清分泌物(BDNF、NT-3、GDNF)進(jìn)行定性定量分析。誘導(dǎo)3d,808 nm組神經(jīng)前體細(xì)胞標(biāo)志蛋白nestin高表達(dá),808 nm更有利于hUCMSCs向神經(jīng)方向分化。繼續(xù)誘導(dǎo)7 d,808 nm聯(lián)合CSF/iCSF組神經(jīng)元標(biāo)志蛋白neuN表達(dá)明顯,而星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白GFAP組間差異小,說明808 nm聯(lián)合誘導(dǎo)劑可以提高h(yuǎn)UCMSCs向神經(jīng)元分化的比率。上清分泌物ELISA結(jié)果表明神經(jīng)元細(xì)胞特有分泌物NT-3蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng),尤其是808 nm聯(lián)合iCSF組,其表達(dá)量要優(yōu)于單純生物誘導(dǎo)組;而LLLT聯(lián)合誘導(dǎo)劑組的BDNF、GDNF蛋白濃度均低于陽性對照組。LLLT聯(lián)合誘導(dǎo)劑的干預(yù)手段可以有效促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)前體細(xì)胞分化。808 nm聯(lián)合CSF可以促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞向神經(jīng)元方向繼續(xù)分化,提高神經(jīng)元分化比率。
【學(xué)位授予單位】：天津工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R454
【圖文】：

邐天津工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑光受體吸收光子能量，改變細(xì)胞分子狀態(tài)，即初級反應(yīng)階段，如圖１－１所示。對逡逑此，學(xué)術(shù)上存在多種理論學(xué)說，如單重氧假說、一氧化氮假說、氧化還原性質(zhì)改逡逑變假說、超氧陰離子假說等。對比紅光、近紅外光譜Ｎ線粒體酶物質(zhì)的反應(yīng)程度，逡逑發(fā)現(xiàn)環(huán)氧酶（Ｃｏｘ）是該光譜下的主要光受體［ｕ］。弱激光作用到細(xì)胞后，ＮＯ氣逡逑體分子從ＣＣＯ解離，濃度恢復(fù)至正常水平，即一氧化氮假說，如圖１－２所示＂２］。逡逑生物組織對光譜吸收峰值各不相同，可以激活細(xì)胞器屮其他類型的光受體。逡逑４９５－５７０邋ｎｍ的綠光照射下亞鐵血紅素被激活，４７６－４９５邋ｎｍ的藍(lán)光照射后黃素蛋逡逑白（ＮＡＤＨ脫氫酶）吸收光子能量，激活信號通路，調(diào)整細(xì)胞氧化應(yīng)激至動(dòng)態(tài)逡逑平衡狀態(tài)。此外，其他光譜也可激活ＮＡＤＰＨ氧化酶、ＮＯ合酶、黃素等細(xì)胞質(zhì)逡逑膜光受體，但其機(jī)理并未展開深入研宄。逡逑激激光逡逑

逡逑光受體吸收光子能量，改變細(xì)胞分子狀態(tài)，即初級反應(yīng)階段，如圖１－１所示。對逡逑此，學(xué)術(shù)上存在多種理論學(xué)說，如單重氧假說、一氧化氮假說、氧化還原性質(zhì)改逡逑變假說、超氧陰離子假說等。對比紅光、近紅外光譜Ｎ線粒體酶物質(zhì)的反應(yīng)程度，逡逑發(fā)現(xiàn)環(huán)氧酶（Ｃｏｘ）是該光譜下的主要光受體［ｕ］。弱激光作用到細(xì)胞后，ＮＯ氣逡逑體分子從ＣＣＯ解離，濃度恢復(fù)至正常水平，即一氧化氮假說，如圖１－２所示＂２］。逡逑生物組織對光譜吸收峰值各不相同，可以激活細(xì)胞器屮其他類型的光受體。逡逑４９５－５７０邋ｎｍ的綠光照射下亞鐵血紅素被激活，４７６－４９５邋ｎｍ的藍(lán)光照射后黃素蛋逡逑白（ＮＡＤＨ脫氫酶）吸收光子能量，激活信號通路，調(diào)整細(xì)胞氧化應(yīng)激至動(dòng)態(tài)逡逑平衡狀態(tài)。此外

第一章緒論宄。本研究展開ｌｌｌｔ聯(lián)合誘導(dǎo)劑的實(shí)驗(yàn)方案，引導(dǎo)調(diào)控干細(xì)胞定向神經(jīng)分化技逡逑術(shù)路線圖如１－４所示。該聯(lián)合誘導(dǎo)方法可以有效促進(jìn)ｈＵＣＭＳＣｓ向神經(jīng)前體細(xì)胞逡逑分化；８０８邋ｎｍ聯(lián)合腦脊液可以促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞向神經(jīng)元方向繼續(xù)分化。相比逡逑當(dāng)前常用的干預(yù)方法，該聯(lián)合作用方法一方面可以提供神經(jīng)細(xì)胞分化所需微環(huán)引導(dǎo)干細(xì)胞向神經(jīng)分化；另一方面弱激光調(diào)節(jié)細(xì)胞狀態(tài)，調(diào)控細(xì)胞活性表達(dá)，體外誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化以及體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞提供安全有效方法。論文主要研宄逡逑內(nèi)容如下：逡逑１．邐ＬＬＬＴ調(diào)控ｈＵＣＭＳＣｓ細(xì)胞活性的可行性實(shí)驗(yàn)，篩選最佳波長、能量密度、逡逑功率密度主要光學(xué)參量。２．邐ＬＬＬＴ聯(lián)合ＣＳＦ調(diào)控ｈＵＣＭＳＣｓ定向神經(jīng)方向分化過程中標(biāo)志蛋白和分泌逡逑因子的檢測。逡逑３．初步探討ＬＬＬＴ聯(lián)合ＣＳＦ調(diào)控ｈＵＣＭＳＣｓ定向神經(jīng)分化的作用機(jī)理。逡逑ＬＬＬＴ逡逑

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本文編號：2746007