【摘要】：基因治療是指通過核酸載體、病毒或其他基因改造過的微生物將一段特定的核酸序列轉(zhuǎn)入細胞或插入細胞基因組上,并通過這段基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物達到治療目的。遺傳核酸序列向靶細胞的特異且高效轉(zhuǎn)導(dǎo)是基因治療過程中最主要的障礙之一。病毒作為一種非細胞生物,必須通過感染宿主細胞,并利用宿主細胞內(nèi)物質(zhì)和能量,完成其生命周期。因此基因治療發(fā)展初期主要應(yīng)用重組病毒將核酸序列轉(zhuǎn)入細胞內(nèi),應(yīng)用較多的病毒包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、皰疹病毒,它們作為基因治療載體的優(yōu)勢在于其擁有相對簡單的結(jié)構(gòu)、較小的基因組以及較強的進化可塑性等。由于腺病毒無致癌性,容易制備,并且具有轉(zhuǎn)染效率高、組織選擇性廣等優(yōu)點,是基因治療臨床研究中應(yīng)用最廣泛的載體。腺病毒用于基因治療載體的主要缺點是腺病毒免疫原性強,容易引起強烈炎癥反應(yīng)。另外,由于多數(shù)成年人感染過腺病毒,因此體內(nèi)存在的中和抗體會降低轉(zhuǎn)染效率。因此,如何提高轉(zhuǎn)染效率,降低宿主對病毒的免疫應(yīng)答反應(yīng)是腺病毒載體能否成功用于臨床治療的關(guān)鍵問題。腺病毒-2和-5(Ad2,Ad5)主要利用柯薩奇病毒-腺病毒受體(Coxsackievirus adenovirus receptor,CAR)粘附于易感細胞,然后通過病毒penton base蛋白與整合素結(jié)合激活細胞入侵信號而感染細胞。腺病毒感染受宿主細胞因子調(diào)控。最近研究報道組蛋白去乙酰化抑制劑可以增加腺病毒感染效率。組蛋白去乙�；^程首先由溴結(jié)構(gòu)域(bromodomain;BD)家族蛋白BRD4(Bromodomain-containing protein 4)等識別(reader),引起特定殘基去乙酰化。研究發(fā)現(xiàn)BRD4在多種病毒感染細胞的過程中發(fā)揮作用。本文旨在研究組蛋白乙酰化“Reader”蛋白BRD4在腺病毒感染過程中的作用。本文發(fā)現(xiàn)BRD4小分子抑制劑JQ1可促進腺病毒感染,進一步研究發(fā)現(xiàn)JQ1可通過競爭性地與BRD4結(jié)合,使得與染色體組蛋白乙�；馁嚢彼釟埢Y(jié)合的BRD4從染色體上解離下來,游離的BRD4通過C端功能結(jié)構(gòu)域招募和活化細胞內(nèi)正性轉(zhuǎn)錄延伸因子(Positive transcription elongation factor,P-TEFb)形成具有轉(zhuǎn)錄活性的復(fù)合物,可增加病毒基因表達,從而促進病毒感染。CDK9是P-TEFb的一個組成成分,BRD4的敲低以及CDK9小分子抑制劑均可抵消JQ1對腺病毒感染的促進作用�；蛑委煏r主要應(yīng)用復(fù)制缺失型病毒,此類病毒缺失的E1A蛋白對于基因表達起關(guān)鍵性作用。在探究JQ1在復(fù)制缺失型病毒基因治療時的應(yīng)用研究中,我們選擇了E1A基因缺陷型病毒Ad5-EGFP作為研究對象。研究發(fā)現(xiàn)JQ1可在上皮細胞A549或淋巴細胞Jurkat T內(nèi)增加復(fù)制缺餡型病毒Ad5-EGFP的異源蛋白的表達。這表明JQ1可以無細胞依賴性地增加復(fù)制缺失型病毒的基因表達。小鼠異體腫瘤模型實驗中,首先將體外感染相同劑量復(fù)制缺餡型病毒載體的P388D1腫瘤注射小鼠腹腔,經(jīng)不同濃度JQ1或溶劑對照處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn)JQ1劑量依賴性增加腹腔內(nèi)腺病毒異源基因的表達。本研究證明JQ1可促進腺病毒基因表達,從而促進腺病毒感染,并探究了其分子機制。在腫瘤治療應(yīng)用方面研究發(fā)現(xiàn)JQ1可在體內(nèi)促進小鼠腫瘤細胞內(nèi)復(fù)制缺陷性病毒的基因表達。提示我們在應(yīng)用復(fù)制缺餡型病毒治療腫瘤時,可通過JQ1調(diào)控目的基因的表達,增強腫瘤治療效果。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R450
【圖文】：

療神經(jīng)退行性疾�。ǎ茫欤椋睿椋悖幔欤裕颍椋幔欤螅纾铮觯哄澹危茫裕埃保叮玻保担福保┑取＝刂沟剑玻埃保改辏苍�，逡逑據(jù)全球基因治療臨床實驗網(wǎng)站統(tǒng)計，共有２９３０例基因治療臨床實驗在進行。其逡逑中９０％是處于臨床Ｉ、ＩＩ期，只有０．２％處于臨床ＩＶ期（圖２．２）。這些臨床實逡逑驗中主要由美國（約６１％）發(fā)起。針對癌癥的臨床試驗占６６．６％，針對單基因疾逡逑病的臨床實驗占１１．５％，還有６％臨床實驗是針對感染性疾病的，以及６％臨床逡逑實驗是針對心血管疾病的（圖２．３）。逡逑近十年ＣＡＲ－Ｔ細胞通過改造免疫效應(yīng)細胞，調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫反應(yīng)，在治療晚逡逑期腫瘤患者時發(fā)揮了史無前例的效果［４７］。２０１７年，諾華公司用于治療急性淋巴逡逑白血病（ＡＬＬ）的ｋｙｍｒｉａｈ在美國批準上市。該藥的臨床數(shù)據(jù)顯示，參與臨床實逡逑驗的６３名急性淋巴細胞白血病患者有５２人（８２．５％）病情得到緩解，對于這種逡逑難治且復(fù)發(fā)性極高的惡性病，這是已是極其高的救治率。逡逑基因治療概念提出己有５０年

基因治療臨床實驗中臨床階段分布

基因治療臨床實驗中疾病類型分布

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