【摘要】：目的藥物成癮作為一種慢性、復(fù)發(fā)性腦病,已成為全球普遍存在的公共衛(wèi)生問題,復(fù)吸作為藥物依賴的重要特征,治療藥物成癮的關(guān)鍵是防治脫毒后復(fù)吸。因此,本課題通過建立甲基苯丙胺戒斷大鼠模型,將海馬作為研究重點,探究海馬中慢性甲基苯丙胺大鼠戒斷后稽延性癥狀與GSK-3β及其磷酸化形式和節(jié)律基因Bmal1的關(guān)系,從時間生物學(xué)角度為開發(fā)有效的防復(fù)吸治療提供新思路。方法1.選取體重介于200-250g的SD大鼠,在12h/12h晝夜循環(huán)的環(huán)境下飼養(yǎng)7天,隨機分為甲基苯丙胺戒斷組和生理鹽水組并進行曠場和CPP測試。利用條件位置性偏愛箱隔天對甲基苯丙胺組大鼠腹腔注射甲基苯丙胺(3mg/kg)建立成癮模型,生理鹽水組大鼠則每天注射生理鹽水(1ml/kg),共14天。之后進行曠場及CPP后測試。隨后進行戒斷,10天后,將兩組大鼠斷頭取腦(ZT4),取出海馬(Hip),用Western Blot方法檢測GSK-3β及p-GSK3β和節(jié)律分子Bmal1的蛋白表達量。2.將SD大鼠經(jīng)過7天的12h/12h光暗循環(huán)飼養(yǎng)之后,隨機分為4組(甲基苯丙胺抑制劑組、甲基苯丙胺溶媒組、生理鹽水抑制劑組與生理鹽水溶媒組),在慢性甲基苯丙胺大鼠成癮模型建立之后,用腦立體定位給藥的方法在海馬腦區(qū)給予GSK-3β抑制劑SB216763,戒斷10天之后測曠場及CPP,并取出海馬(Hip),用Western Blot檢測Bmal1蛋白表達量。結(jié)果1.甲基苯丙胺組大鼠條件位置偏愛效應(yīng)顯著增強(p0.05),表明甲基苯丙胺成癮大鼠模型建立。2.曠場實驗統(tǒng)計結(jié)果顯示甲基苯丙胺依賴大鼠自主運動的總路程與中央活動路程均顯著低于生理鹽水組(p0.05),表明甲基苯丙胺成癮大鼠的探究性行為減少。3.與生理鹽水組相比,甲基苯丙胺戒斷后大鼠的GSK-3β與p-GSK3β的表達量降低(p0.05),Bmal1的表達量降低(p0.05)。4.進行腦立體定位手術(shù)之后,在生理鹽水組中,抑制劑組與溶媒組中的Bmal1表達量無明顯變化;而在甲基苯丙胺組中,抑制劑組大鼠海馬(Hip)中Bmal1較溶媒組大鼠相比,Bmal1表達量升高(p0.05)。結(jié)論GSK-3β與節(jié)律基因Bmal1參與甲基苯丙胺大鼠戒斷后稽延性癥狀的產(chǎn)生,在海馬中注射GSK-3β特異性抑制劑后,促進了大鼠成癮的消退,使節(jié)律基因的表達量發(fā)生變化。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R749.64
【圖文】：

NaCl、10mlTris-HCl7.5、加ddH2O定容至1L，4℃保存；BS液中加入1mlTween-20;10mlTBST液中加0.5g脫脂奶粉。置偏愛（conditioned place preference,CPP）置偏愛系統(tǒng)放置于具有隔音、照明、通風(fēng)的房間內(nèi)。其兩個大小一致的條件訓(xùn)練箱70cm×30cm×34cm（長×寬cm×22cm×27cm）組成。隔板放入后可將動物限制于某物可自由穿梭于整個穿梭箱內(nèi)，箱壁上安裝有高清晰探。通過紅外線感應(yīng)大鼠在各個箱內(nèi)的穿梭次數(shù)，停留時析大鼠的位置偏愛情況。

側(cè)值相比升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。提示甲基苯丙胺成癮大鼠模型建立成功，大鼠產(chǎn)生條件性位置偏愛效應(yīng)。圖2 甲基苯丙胺成癮大鼠條件性位置偏愛效應(yīng)增強對照組大鼠和甲基苯丙胺成癮組大鼠前測階段與后測階段偏愛分值統(tǒng)計圖，每組n=12,與前測值比較，*:p<0.05。Figure 2 Meth significantly enhanced the effect of conditioned place preference inrats.The statistical chart of pretest CPP score and posttest CPP score in control rats andmethwithdrawal rats. n=12, *:p<0.05, vs pretest CPP score.

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本文編號：2742301