發(fā)布時間：2020-06-30 16:50

【摘要】：目的:探討經(jīng)靜脈注射USPIO標記兔BMSCs的可行性,并觀察USPIO對BMSCs的增殖性和多向分化性等生理特性的影響以及磁標記細胞的MRI信號變化,為下一步MRI活體示蹤外源性BMSCs修復軟骨缺損提供實驗基礎。方法:(1)實驗組以組為單位(12只新西蘭白兔完全隨機分4組,每組3只)經(jīng)耳緣靜脈注射不同劑量USPIO,對照組不作任何處理,48小時后處死各組兔,并分離、培養(yǎng)其BMSCs,每天用倒置相差顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學變化,選取各組第三代BMSCs作為實驗對象;(2)普魯士藍染色測量BMSCs的磁標記率,增強型cck-8試劑盒觀察BMSCs的增殖性強弱,尋找出安全、有效的最佳USPIO標記劑量;(3)選取上述(2)中得到的最佳劑量USPIO標記的BMSCs,對磁標記BMSCs進行多向分化誘導實驗,誘導約2周后,茜素紅染色鑒定成骨誘導形成的鈣結節(jié),油紅O染色鑒定成脂誘導形成的脂肪滴,番紅O染色鑒定成軟骨誘導形成的細胞外硫酸軟骨素;磁標記BMSCs和未標記BMSCs按不同數(shù)量重懸于微離心管后行MR掃描成像,觀察其信號的變化。(4)收集數(shù)據(jù),進行統(tǒng)計學分析。結果:(1)注射USPIO前,MR掃描兔長骨,FSE序列T2加權成像可觀察到其骨髓呈均勻中高信號,注射USPIO 48小時后,兔長骨呈明顯均勻低信號,表明USPIO已進入骨髓腔。隨后立即處死兔,全骨髓貼壁法培養(yǎng)得到的混合細胞懸液,10天左右倒置相差顯微鏡可觀察到大量貼壁生長的梭形細胞,表明此時的細胞大部分為BMSCs;(2)普魯士藍染色,干細胞胞質內(nèi)可見大量藍染顆粒,表明BMSCs已吞噬了USPIO,隨USPIO劑量增加,BMSCs磁標記率相應增加。增強型cck-8試劑盒反應,用自動酶標儀測得吸光度值繪制的增殖曲線顯示,低劑量(15、30mg Fe/kg)USPIO對BMSCs增殖性無影響,而高劑量(60、120mg Fe/kg)USPIO移植BMSCs增殖;(3)劑量為30mg Fe/kg的USPIO標記兔BMSCs,多向分化誘導后染色實驗顯示,磁標記BMSCs的多向分化能力未受到USPIO的影響。在FSE序列T2加權成像上,對照組BMSCs呈均勻高信號,不同數(shù)量的磁標記BMSCs表現(xiàn)為不同程度的均勻低信號;(4)統(tǒng)計學分析結果顯示,各實驗組與對照組的BMSCs磁標記率有統(tǒng)計學差異(P0.01),而30、60、120mg Fe/kg三組間BMSCs磁標記率統(tǒng)計學差異(P0.01)。各標記組BMSCs的SI與對照組BMSCs的SI相比,具有統(tǒng)計學差異(P0.01);5×105(標記細胞)SI與1×105(標記細胞)SI相比,無統(tǒng)計學差異(P0.01)。結論:(1)兔BMSCs可被USPIO標記;(2)劑量為30mg Fe/kg的USPIO標記兔BMSCs時,標記率高且對BMSCs的生理性能無影響,是相對適宜的標記劑量;(3)FSE序列T2WI上,1×105個磁標記細胞即可表現(xiàn)特征性低信號。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R445.2;R68

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本文編號：2735557