【摘要】：目的:評估新亞甲基藍(NMB)及甲基化嗎嚀硅肽菁(MLSiPcI4)介導的光動力治療對多重耐藥鮑曼不動桿菌的體外抑制效果并探討其作用機制。方法:1、設置實驗組E(有光敏劑有光照,即PS+L+)、單純光敏劑組PS(有光敏劑無光照,即PS+L-)、單純光照組L(無光敏劑有光照,即PS-L+)、空白對照組C(無光敏劑無光照,即PS-L-),E及PS組將多重耐藥鮑曼不動桿菌與不同濃度的NMB或MLSiPcI4共哺育各30分鐘,L與C組以0.9%氯化鈉代替光敏劑與多重耐藥鮑曼不動桿菌共哺育各30分鐘;NMB實驗中的E和L組給予波長660nm、能量密度42J/cm~2的紅外光照240s;MLSiPcI4實驗中的E和L組給予波長660nm、能量密度720J/cm~2的紅外光照1200s;PS及C組不給予光照。各組菌液經(jīng)連續(xù)稀釋后各取10μl接種于血瓊脂平板培養(yǎng)24h,計算各組菌落數(shù),應用方差分析法分析各組菌落數(shù)差異性。2、透射電子顯微鏡下觀察處理后4組細菌的形態(tài)學變化。3、應用相應試劑盒分別檢測4組菌懸液中肽聚糖、AKP、鎂離子、鉀離子的含量,統(tǒng)計學方法分析4組差異性。4、DNA試劑盒提取多重耐藥鮑曼不動桿菌的DNA均分為E、PS、L及C4組,E及PS組的DNA與NMB共哺育30分鐘,L及C組以1xPBS代替NMB與DNA共哺育30分鐘,E及L組給予波長660nm、能量密度42J/cm~2的紅外光照240s,PS及C組不給予光照,之后通過凝膠電泳形成條帶并分析各組條帶差異性。結果:1、NMB濃度為5μM時,E組的菌落數(shù)較其他3組顯著減少(E組147±35,PS組318±103,L組349±91,C組336±85,P0.05);NMB濃度為10μM時,E組的菌落數(shù)較其他3組顯著減少(E組88±39,PS組202±65,L組195±49,C組245±84,P0.05);兩種濃度下,PS組、L組、C組3組間菌落數(shù)兩兩比較均無統(tǒng)計學差異(P0.05);在MLSiPcI4濃度為0.5μM時,E組、PS組的菌落數(shù)較L組、C組顯著減少(E組16±17,PS組19±14,L組219±166,C組196±120,P0.05);E組與PS組菌落數(shù)比較沒有統(tǒng)計學差異(p=0.964),L組與C組菌落數(shù)比較沒有統(tǒng)計學差異(p=0.726);在MLSiPcI4濃度為0.25μM時,4組菌落數(shù)兩兩比較均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。2、透射電子顯微鏡顯示NMB實驗中的E組細胞壁結構破壞較其他3組明顯。3、NMB實驗中E組菌懸液中肽聚糖含量顯著高于其他3組(E組6.8294±1.2456,PS組5.9623±0.9698,L組5.6738±0.7346,C組5.6778±1.0667,P0.05),PS組、L組、C組3組間肽聚糖含量兩兩比較均無統(tǒng)計學差異(P0.05);AKP、鉀離子、鎂離子含量各組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、凝膠電泳顯示NMB實驗中E組條帶較其他3組模糊,調(diào)整靈敏度為75%時,E組條帶檢測不到,其他三組均顯示條帶。結論:1、NMB介導的光動力治療對多重耐藥鮑曼不動桿菌具有體外抑制效果;本研究未發(fā)現(xiàn)MLSiPcI4介導的光動力治療對多重耐藥鮑曼不動桿菌具有體外抑制效果。2、NMB介導的光動力治療通過破壞細菌細胞壁對多重耐藥鮑曼不動桿菌起到體外抑制作用;對是否通過直接破壞細菌DNA起體外抑制作用需要更進一步的研究證實。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R454.2
【圖文】：

圖 2.1 多重耐藥鮑曼不動桿菌橫切面電鏡圖注：圖中 A 代表實驗組，B 代表光敏劑組，C 代表光照組，D 代表空白對照組，A 中明顯可以看出細胞壁幾乎消失殆盡，而 B、C、D 均可見到較完整的細菌細胞壁結構（A 中藍色箭頭指示消失的細胞壁，黃色箭頭指示胞質(zhì)中分布的 NMB）。

圖 2.2 多重耐藥鮑曼不動桿菌縱切面電鏡圖注：圖 A 代表實驗組，B 代表光敏劑組，C 代表光照組，D 代表空白對照組，圖 A 中細菌細胞壁破壞范圍及程度也較圖 B、C、D 明顯。圖 A 中藍色箭頭指示細胞壁顯示不清，紅色箭頭指示細胞壁斷裂。圖 B 中黃色箭頭所示胞壁附近分布的 NMB。2.4.2 10μM 濃度 NMB 介導的光動力治療后對菌懸液肽聚糖含量的測定結果為了評估 10μM 濃度 NMB 介導的光動力治療對多重耐藥鮑曼不動桿菌細胞壁的損傷效果，通過對 4 組菌懸液中的肽聚糖含量進行測定，共得到 10 組數(shù)據(jù)，對數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗顯示符合正態(tài)分布，均數(shù)比較采用單因素方差分析，得到統(tǒng)計結果見表 2.3，發(fā)現(xiàn) P<0.05，組間差異有統(tǒng)計學意義；進一步進行兩兩比較，如表 2.4 所示，發(fā)現(xiàn) E 組肽聚糖含量相較其他三組顯著增高，P<0.05，差異均有統(tǒng)計學意義，而 PS、L、C 三組肽聚糖含量兩兩比較，P>0.05 差異無統(tǒng)計學意義，即E 組肽聚糖含量顯著增高，而其他三組肽聚糖差異無統(tǒng)計學意義。此結果間接提示NMB 介導的光動力治療嚴重破壞了多重耐藥鮑曼不動桿菌的細胞壁，導致釋放到菌

【參考文獻】

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本文編號：2725775