【摘要】：目的人類許多復(fù)雜疾病的發(fā)生和發(fā)展都和機(jī)體多種分子改變密切相關(guān),包括影響代謝相關(guān)的小分子、調(diào)控生理功能相關(guān)蛋白、遺傳調(diào)控的基因等。而這些分子的改變在疾病的早期是非常微小的。目前也有很多檢測平臺用于這些生物標(biāo)記物的檢測,例如:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)等。但是這些檢測方法或需要昂貴的設(shè)備,或樣本預(yù)處理程序復(fù)雜,或程序操作復(fù)雜需專業(yè)人員進(jìn)行,最重要的是,這些方法都只能對單一分子水平的生物標(biāo)記物進(jìn)行檢測。目前,單一分子標(biāo)記物的檢測不能準(zhǔn)確的診斷疾病的發(fā)生發(fā)展。從基因組學(xué),蛋白組學(xué),代謝組學(xué)的角度看,一些復(fù)雜的疾病(例如:腫瘤)發(fā)生與復(fù)雜多系統(tǒng)改變有關(guān)。因此,一種用于多分子水平的快速、易操作,低成本,超靈敏的檢測平臺對疾病的早期診斷和精準(zhǔn)醫(yī)療具有非常重要的意義。方法在本研究中,首次將DNA修飾在裝載了阿霉素(DOX)的多孔鉑(MPN)上形成核酸功能化的納米信號探針(MPNs@DOX@DNA2)。MPN在傳感器中一方面充當(dāng)了DOX和功能化核酸的納米載體,另一方面作為催化導(dǎo)電性能的材料大大增加了檢測分析的靈敏度。采用DNA walker策略可以讓核酸在分子電極表面自主反應(yīng),在切刻內(nèi)切酶(NtBbvCI)的輔助下,Walker探針可以在電極表面自主切割。通過逐步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)原理,成功構(gòu)建了一種基于多孔鉑納米復(fù)合物和切刻內(nèi)切酶輔助的DNA步行策略的通用“signal-off-on”比率電化學(xué)傳感器,可對小分子、蛋白、核酸進(jìn)行分析。亞甲藍(lán)(Mb)標(biāo)記的發(fā)夾探針(MB-HPs)作為“signal-off”探針,MPNs@DOX@DNA2作為“signal-on”探針。在MPNs@DOX@DNA2和Nt.BbvCI介導(dǎo)的DNA walker策略的輔助下實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物特異性檢測與信號放大。結(jié)果在最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件下,構(gòu)建的比率電化學(xué)傳感器具有超高的靈敏性和更寬的檢測范圍。此外,改變傳感器的適配體核酸識別探針序列可實(shí)現(xiàn)對小分子ATP,蛋白VEGF,以及rpoB基因的定量檢測。在血清樣本中用該方法對分析物進(jìn)行檢測,也得到很好的分析結(jié)果。結(jié)論通過層層優(yōu)化電化學(xué)生物傳感器的原理,一方面,把兩種核酸探針同時固定在電極表面,通過NtBbvCI酶驅(qū)動的DNA Walking策略自主剪切,不需要認(rèn)為操作和復(fù)雜的熱力學(xué)循環(huán),副反應(yīng)少,背景信號低。另一方面,采用多孔鉑納米球作為信號的載體連接反應(yīng)探針,大大增加檢測的靈敏度。在最優(yōu)的條件下,構(gòu)建的生物傳感對小分子、蛋白、基因都具有非常好的分析性能。且在復(fù)雜的血清樣本中檢測仍具有良好的準(zhǔn)確性。該方法對臨床的生物分析和診斷具有很大的應(yīng)用潛能。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：TP212;R446.1
【圖文】：

圖 1 材料反應(yīng)過程顏色變化圖Fig.1 Photographs of H2PtCl6-KBr solution taken at different reaction times at 70oC 2.5 mL 制備好的 MPN 溶液，加入 DNA2 和 DOX，使 DNA2 的終，DOX 終濃度為 1 mM，靜置過夜。然后加入 0.1 M 的 NaCl 和 10 m

原理 1 基于線性探針的 signal-off 檢測系統(tǒng)示意圖Scheme.1 Principle of the signal-off sensing system based on linear probes.2.1.1 CV 表征

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本文編號：2721775