發(fā)布時間：2020-06-18 05:53

【摘要】：目的:通過抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能,監(jiān)測膿毒癥大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)及腸道樹突狀細(xì)胞的變化,進(jìn)一步探討其發(fā)生機(jī)制,為探究膿毒癥發(fā)生發(fā)展中肝-腸互作機(jī)制,及膿毒癥的救治新策略的提出奠定理論基礎(chǔ)。第一部分:不同劑量氯化釓抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能對膿毒癥大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)及腸粘膜固有層樹突狀細(xì)胞的影響方法:60只SD大鼠隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組、氯化釓預(yù)處理假手術(shù)組、膿毒癥組和氯化釓預(yù)處理膿毒癥組,每組6只大鼠。氯化釓預(yù)處理組分別于術(shù)前48小時和24小時通過尾靜脈注射5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的氯化釓(GdCl_3),假手術(shù)組大鼠注射等量生理鹽水。采用盲腸結(jié)扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)復(fù)制膿毒癥模型。術(shù)后24小時處死大鼠,利用ELISA法檢測各組大鼠外周血清及腸組織炎癥因子TNF-α、IL-6和IL-10表達(dá)。組織病理學(xué)評價大鼠腸組織損傷。采用四型膠原酶消化的方法得到各組大鼠腸粘膜固有層樹突狀細(xì)胞(LPDCs)。采用流式細(xì)胞技術(shù)單標(biāo)法檢測各組大鼠LPDCs的CD103抗體陽性率,計算LPDCs數(shù)量。流式細(xì)胞技術(shù)雙標(biāo)法檢測各組大鼠LPDCs表面主要組織相容性復(fù)合體(MHC)II及共刺激分子CD86的表達(dá)。結(jié)果:(1)血清及腸組織中,5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg GdCl_3抑制組促炎因子TNF-α和IL-6的表達(dá)相比膿毒癥組顯著下調(diào)(P0.05),而抑炎因子IL-10的表達(dá)顯著上調(diào),40 mg/kg GdCl_3組促炎因子TNF-α和IL-6的表達(dá)顯著高于其他組。(2)腸組織病理學(xué)評價,膿毒癥組相較于假手術(shù)組腸組織炎癥損傷顯著加重。而5 mg/kg、10 mg/kg、20mg/kg的GdCl_3能顯著減輕腸組織的炎癥損傷,40 mg/kg的GdCl_3組腸組織損傷較膿毒癥組顯著加重(P0.05)。(3)LPDCs的數(shù)量在CLP術(shù)后24小時顯著減少(P0.05),5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg組均能顯著增加LPDCs的數(shù)量(P0.05),40 mg/kg組的LPDCs數(shù)量較CLP組無顯著差異。(4)相比于假手術(shù)組,CLP組MHC-II和CD86的表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05),而20 mg/kg GdCl_3預(yù)處理組MHC-II以及CD86的表達(dá)較膿毒癥組顯著下調(diào)(P0.05)。第二部分:抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能對膿毒癥大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)及腸道樹突狀細(xì)胞影響的時相性變化方法:72只SD大鼠隨機(jī)分為4組,假手術(shù)組、GdCl_3預(yù)處理假手術(shù)組、膿毒癥組和GdCl_3預(yù)處理膿毒癥組,每組18只大鼠。GdCl_3預(yù)處理組,分別于術(shù)前48小時和24小時通過尾靜脈注射20 mg/kg的GdCl_3,對照組大鼠注射同等劑量生理鹽水。采用盲腸結(jié)扎穿孔法復(fù)制膿毒癥模型,各組分別于術(shù)后6 h、12 h及24 h處死6只大鼠。利用ELISA法檢測各組大鼠外周血清及腸組織炎癥因子TNF-α、IL-6及IL-10的表達(dá)。組織病理學(xué)評價大鼠腸組織炎癥損傷。采用四型膠原酶消化的方法得到各組大鼠LPDCs,采用流式細(xì)胞技術(shù)單標(biāo)法檢測各組大鼠LPDCs的CD103抗體陽性率,計算LPDCs數(shù)量。流式細(xì)胞技術(shù)雙標(biāo)法檢測各組大鼠LPDCs表面MHC-II及CD86的表達(dá),檢測LPDCs的凋亡率。Western Blot技術(shù)檢測各組大鼠LPDCs自噬相關(guān)蛋白的LC3-II的表達(dá)。結(jié)果:(1)血清及腸組織中,CLP術(shù)后6 h開始TNF-α、IL-6及IL-10的表達(dá)較假手術(shù)組顯著上調(diào)(P0.05),24 h達(dá)到最高。GdCl_3抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能使促炎因子TNF-α和IL-6的表達(dá)在各時間點較膿毒癥組顯著下調(diào)(P0.05),抑炎因子IL-10的表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)。(2)腸組織炎癥損傷評價,在6 h、12 h、24 h膿毒癥組相比于Sham組腸組織炎癥損傷顯著加重,GdCl_3抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能顯著減輕了膿毒癥大鼠各時間點的腸組織損傷。(3)CLP術(shù)后6 h LPDCs的數(shù)量顯著增加,12 h達(dá)到最大(P0.05),24 h顯著減少,GdCl_3抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能在各時間點顯著增加了膿毒癥大鼠LPDCs的數(shù)量。(4)GdCl_3抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能明顯抑制了各時間點膿毒癥大鼠LPDCs表面MHC-II以及CD86的表達(dá)(P0.05)。(5)GdCl_3抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能顯著降低了膿毒癥大鼠各時間點LPDCs的自噬相關(guān)蛋白表達(dá)并下調(diào)其凋亡率(P0.05)。結(jié)論:(1)GdCl_3可抑制膿毒癥大鼠肝臟庫普弗細(xì)胞功能,其抑制程度呈劑量依賴。20mg/kg的GdCl_3可抑制膿毒癥大鼠肝臟庫普弗細(xì)胞功能,且不會加重膿毒癥大鼠機(jī)體過度炎癥反應(yīng)和腸組織損傷。(2)GdCl_3抑制膿毒癥大鼠肝臟庫普弗細(xì)胞功能,可減輕膿毒癥大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)及腸組織損傷。其機(jī)制可能與抑制膿毒癥大鼠機(jī)體促炎因子TNF-α和IL-6的表達(dá)有關(guān)。(3)GdCl_3抑制膿毒癥大鼠肝臟庫普弗細(xì)胞功能,可降低LPDCs抗原提呈以及激活T細(xì)胞的能力,并可通過促進(jìn)膿毒癥大鼠外周DCs向腸道遷移并下調(diào)其自噬和凋亡水平從而維持LPDCs數(shù)量的穩(wěn)定。其機(jī)制可能與促進(jìn)抑炎因子IL-10的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R459.7
【圖文】：

圖 1. 各組大鼠血清炎癥因子的表達(dá)量柱狀圖Figure 1.Expression of the groups of rat serum inflammatory cytokine注：結(jié)果采用x±s 表示，* 代表與 Sham 組相比 (P<0.05)；#代表與 CLP 組相比(P<0.05)；^代表與 CLP+GdCl3（5mg/kg）組相比(P<0.05)；▲代表與 CLP+GdCl3（20mg/kg）相比(P<0.05)。1.2 為了解使用不同劑量的 GdCl3抑制肝臟庫普弗細(xì)胞功能對膿毒癥大鼠的腸組織炎癥反應(yīng)的影響，我們檢測了各組大鼠腸組織中的促炎因子 TNF-α、IL-6 及抗炎因子 IL-10表達(dá)。結(jié)果顯示，相對于 Sham 組，Sham+GdCl3組的劑量從 5mg/kg 逐漸增加至 20mg/kg，對于假手術(shù)組大鼠的 TNF-α、IL-6 以及 IL-10 的表達(dá)無顯著影響，但劑量增加至 40mg/kg時血清中的促炎因子 TNF-α、IL-6 的表達(dá)量顯著上升（P<0.05），而抗炎因子 IL-10 的表達(dá)無影響。CLP 組術(shù)后 24h 相對于 Sham 組 TNF-α、IL-6 以及 IL-10 的表達(dá)均顯著增加（P<0.05）。CLP+ GdCl3組的 TNF-α 以及 IL-6 的表達(dá)在濃度從 5 mg/kg 逐漸增加至20mg/kg 過程中逐漸減少（P<0.05），劑量增加到 40mg/kg 時這兩種促炎因子的表達(dá)反而大幅增加（P<0.05）。CLP+GdCl3干預(yù)組的抗炎細(xì)胞因子 IL-10 的表達(dá)隨著藥物濃度

表 2. 各組大鼠腸組織炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)Table2.Expression of the groups of rat intestinal tissues inflammatory cytokine分組 均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差TNF-α（pg/ml） IL-6（pg/ml） IL-10（pg/ml）Sham 630.01±22.80 1411.56±22.53 85.70±3.56Sham+GdCl3（5mg/kg） 638.26±61.20 1466.30±50.39 82.65±1.96Sham+GdCl3（10mg/kg） 641.81±50.33 1429.87±44.32 81.34±1.77Sham+GdCl3（20mg/kg） 632.73±30.52 1399.80±49.77 86.61±1.43Sham+GdCl3（40mg/kg） 699.31±11.52*1890.11±15.89*88.20±2.48CLP 1568.59±12.65*3824.80±75.36*201.12±1.99*CLP+GdCl3（5mg/kg） 1412.36±15.22#3199.30±69.25#225.31±2.44#CLP+GdCl3（10mg/kg） 1190.32±15.54#^2893.23±50.10#^259.30±2.28#^CLP+GdCl3（20mg/kg） 1169.80±9.63#2770.26±90.66#270.77±2.57#CLP+GdCl3（40mg/kg） 1715.78±18.71#▲4240.76±90.45#▲219.80±1.52▲注：結(jié)果采用x±s 表示，* 代表與 Sham 組相比 (P<0.05)；#代表與 CLP 組相比(P<0.05)；^代表與 CLP+GdCl3（5mg/kg）組相比(P<0.05)；▲代表與 CLP+GdCl3（20mg/kg）相比(P<0.05)。

【參考文獻(xiàn)】

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2 王震平;劉東擘;梁華平;;樹突狀細(xì)胞與膿毒癥——兩者的關(guān)系及新的治療策略[J];免疫學(xué)雜志;2006年S1期

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本文編號：2718799