【摘要】：背景多巴胺(DA)是大腦中一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。大腦中DA濃度的異常,能夠引起多種疾病,因此,精確快捷的檢測(cè)血液中DA含量能夠幫助臨床醫(yī)生對(duì)相關(guān)疾病的診斷。DA檢測(cè)方法主要包括HPLC-電化學(xué)法、毛細(xì)管電泳法等。這些方法雖然可實(shí)現(xiàn)DA的靈敏檢測(cè),但大多存在儀器設(shè)備昂貴、使用成本較高、分析時(shí)間長(zhǎng)以及操作過(guò)程繁瑣等不足。因此,研究新型、低成本、簡(jiǎn)單地檢測(cè)DA濃度的方法對(duì)于人體生理功能研究和臨床疾病診斷具有重要應(yīng)用價(jià)值。目的針對(duì)現(xiàn)有多巴胺檢測(cè)方法中存在的特異性差、操作復(fù)雜、成本高、難大規(guī)模推廣等缺點(diǎn),本課題試圖尋找一種新型的具有特異性好、方便、快捷、成本低的多巴胺檢測(cè)方法。方法1、首先通過(guò)水熱合成的方法制備磁性金屬納米顆粒模擬酶Fe_3O_4@MnO_2,并通過(guò)紅外(IR)、透射電鏡(TEM)、掃描電鏡(SEM)、元素分析等方法表征納米粒子。2、以不同的氧化底物{3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺TMB,2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽ABTS}探索Fe_3O_4@MnO_2的模擬氧化酶活性。包括最適溫度、pH、緩沖液等條件。3、在優(yōu)化的溫度、pH等條件下,探索以TMB、ABTS為氧化底物,測(cè)定定量的Fe_3O_4@MnO_2納米顆粒模擬酶活性抑制程度和不同濃度多巴胺之間的關(guān)系,利用線性回歸方程確定多巴胺的線性范圍和檢測(cè)限。4、測(cè)定高效液相法檢測(cè)多巴胺的線性范圍,并使用該實(shí)驗(yàn)方法和HPLC法同時(shí)測(cè)定多巴胺針劑中的含量,驗(yàn)證該方法的可靠性。5、使用該實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤)所分泌多巴胺的量,以及人體血液中多巴胺的含量。結(jié)果1、利用紅外、透射電鏡、掃描電鏡、元素分析等方法進(jìn)行了表征,結(jié)果表明成功制備了Fe_3O_4@MnO_2。2、用ABTS、TMB為氧化底物成功證實(shí)了具有很高的模擬氧化酶活性。當(dāng)以ABTS為氧化底物時(shí),Fe_3O_4@MnO_2氧化的最適溫度為80℃、最適緩沖液是枸櫞酸緩沖液、最適pH 2.0。以TMB為氧化底物時(shí),Fe_3O_4@MnO_2氧化的最適溫度為40℃、最適緩沖液是乙酸乙酸鈉緩沖液、最適pH 4.5。3、以ABTS為氧化底物時(shí),檢測(cè)多巴胺的線性范圍為5-125nM,檢測(cè)限為5nM,以TMB為氧化底物時(shí),檢測(cè)多巴胺的線性范圍為40-900nM,檢測(cè)限為40nM。4、HPLC方法測(cè)得多巴胺的線性范圍在10-200μg/ml。并通過(guò)HPLC和該實(shí)驗(yàn)方法分別測(cè)定0.025mg/ml多巴胺注射針劑的濃度,HPLC方法測(cè)得0.0273mg/ml,實(shí)驗(yàn)方法測(cè)得0.0205mg/ml,P0.01,實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、通過(guò)該方法成功檢測(cè)出PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤)所分泌多巴胺的量,以及人體血液中多巴胺的含量。測(cè)得平均單個(gè)細(xì)胞分泌0.5fmol多巴胺的量,血液中多巴胺的濃度約30nM,其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的保持一致。結(jié)論本課題成功制備了磁性金屬納米顆粒模擬酶Fe_3O_4@MnO_2,用ABTS、TMB為氧化底物證實(shí)了磁性金屬納米模擬酶具有很高的酶活性,并探究出Fe_3O_4@MnO_2氧化底物時(shí)的最適pH值、最適緩沖液和最適溫度。成功測(cè)定了以不同氧化底物檢測(cè)多巴胺的線性范圍和檢測(cè)限,并通過(guò)與HPLC相比,證實(shí)了該方法的可行性和可靠性。通過(guò)該方法成功檢測(cè)出PC12細(xì)胞所分泌多巴胺的量,以及人體血液中多巴胺的含量。相對(duì)于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法而言,本方法具有成本低、可行性好等優(yōu)點(diǎn),能更好地應(yīng)用于臨床血液樣品中多巴胺快速的檢測(cè)。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R446.6
【圖文】：

圖 1 Fe3O4@MnO2的合成路線圖Fig.1 Synthesis road map of Fe3O4@MnO2我們首先用檸檬酸鐵銨和聚丙烯酸（PAA）通過(guò)水熱法合成帶有羧基的納米顆Fe3O4@PAA，再吸附過(guò)量的 Mn2+，然后使用 NaBH4將 Mn2+還原成單質(zhì)錳，最后 280高溫煅燒過(guò)程中將單質(zhì)錳氧化生成二氧化錳，即得 Fe3O4@MnO2，如圖 1 所示2.1.2 Fe3O4@MnO2的掃描電鏡圖為了能夠更加清楚的了解所制備的 Fe3O4@MnO2的表觀形態(tài)，我們對(duì)其進(jìn)行了掃描電鏡。如圖 2

圖 1 Fe3O4@MnO2的合成路線圖Fig.1 Synthesis road map of Fe3O4@MnO2我們首先用檸檬酸鐵銨和聚丙烯酸（PAA）通過(guò)水熱法合成帶有羧基的納米顆粒Fe3O4@PAA，再吸附過(guò)量的 Mn2+，然后使用 NaBH4將 Mn2+還原成單質(zhì)錳，最后 280℃高溫煅燒過(guò)程中將單質(zhì)錳氧化生成二氧化錳，即得 Fe3O4@MnO2，如圖 1 所示2.1.2 Fe3O4@MnO2的掃描電鏡圖為了能夠更加清楚的了解所制備的 Fe3O4@MnO2的表觀形態(tài)，我們對(duì)其進(jìn)行做了掃描電鏡。如圖 2

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本文編號(hào)：2718724