【摘要】：目的:旨在探討人臍帶間充質(zhì)干細胞對腹膜透析大鼠腹膜纖維化的影響以及人臍帶間充質(zhì)干細胞上清液(干細胞因子)對高糖誘導人腹膜間皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響方法:(1)動物實驗:采用6-8周齡的雄性SD大鼠24只,隨機分為鹽水對照組(n=6),腹膜纖維化組(n=6),治療組1(n=6)以及治療組2(n=6)。以腹腔注射腹膜透析液的方法構(gòu)建大鼠腹膜透析模型。除鹽水對照組外各組大鼠均按照100ml/kg的劑量隔日腹腔注射4.25%腹膜透析液,共28天。而鹽水對照組大鼠按100ml/kg的劑量隔日腹腔注射生理鹽水,共28天。治療組1于注射腹膜透析液的第7天以及第14天給予腹腔注射1ml人臍帶間充質(zhì)干細胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCSs)(2×10~6)治療。治療組2于注射腹膜透析液的第14天以及第21天給予腹腔注射1ml MSCs(2×10~6)治療。28天后取各組腹膜透析液進行腹膜平衡試驗,并留取腹膜組織進行HE染色,Masson三色染色和免疫組化染色以觀察大鼠腹膜纖維化程度以及上皮細胞間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)相關(guān)蛋白波形蛋白(Vimentin)以及E-鈣黏蛋白(E-cadherin)的表達量。(2)細胞實驗:正常對照組:采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人腹膜間皮細胞48h。纖維化組:以含2.5%葡萄糖的10%胎牛血清RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人腹膜間皮細胞48小時誘導其纖維化。治療組:同纖維化組相同,以高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)人腹膜間皮細胞24小時,改用分別含有50%、20%、10%、5%人臍帶間充質(zhì)干細胞上清液的高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。采用western-blot方法觀察腹膜細胞中EMT相關(guān)蛋白波形蛋白(Vimentin)以及E-鈣黏蛋白(E-cadherin)表達量的變化。并采用ELISA的方法對細胞培養(yǎng)上清液中纖維化相關(guān)因子轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)及氧化應(yīng)激相關(guān)因子丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的濃度進行檢測。結(jié)果:(1)動物實驗:腹腔注射腹膜透析液28d后,與鹽水對照組相比,纖維化組的腹膜明顯增厚,并出現(xiàn)明顯炎性細胞浸潤;大鼠腹膜超濾量明顯減少,葡萄糖轉(zhuǎn)運量明顯增多,表明腹膜功能降低;E-cadherin表達量降低而Vimentin表達量增高。相反,與腹膜纖維化組相比治療組1、2的腹膜明顯減薄,炎性細胞浸潤減輕;同時大鼠腹膜超濾量明顯增多,葡萄糖轉(zhuǎn)運量明顯降低,腹膜功能得到改善;E-cadherin表達量增高而Vimentin表達量減少。且治療組1的改善程度較治療組2的水平更佳。(2)細胞實驗:與正常對照組細胞相比,加入高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)48h后細胞表現(xiàn)為Vimentin表達明顯增加,而E-cadherin表達減少,提示腹膜間皮細胞出現(xiàn)了明顯的纖維化。細胞培養(yǎng)液中與發(fā)生EMT密切相關(guān)的細胞因子TGF-β1,TNF-α含量增多,氧化應(yīng)激相關(guān)因子MDA含量增多而SOD含量降低。治療組與纖維化組相比表現(xiàn)為Vimentin表達明顯減少,而E-cadherin表達增多,同時細胞培養(yǎng)液中TGF-β1,TNF-α含量在HUC-MSCSs上清液的干預(yù)治療下降低,MDA含量在干預(yù)治療后降低而SOD含量則增高。并且隨著治療組中間充質(zhì)干細胞上清液(干細胞因子)的含量增高,干細胞因子的治療作用增強。結(jié)論:腹腔注射人臍帶間充質(zhì)干細胞能明顯改善腹透相關(guān)性腹膜纖維化;逆轉(zhuǎn)腹膜EMT;改善腹膜轉(zhuǎn)運功能,早期應(yīng)用效果更佳。干細胞因子能明顯改善高糖誘導的人腹膜間皮細胞纖維化;逆轉(zhuǎn)EMT;明顯降低氧化應(yīng)激所致的炎性反應(yīng),并具有濃度依賴性。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R459.5
【圖文】：

圖 1：腹腔注射腹膜透析液可以誘導大鼠腹膜纖維化。（HE 染色 ×100）與鹽水對照組相比，腹膜纖維化組圖中剪頭所示區(qū)域腹膜明顯增厚，且出現(xiàn)了明顯的炎性細胞浸潤，而相反的經(jīng)過人臍帶間充質(zhì)干細胞干預(yù)治療后，治療組 1 與治療組 2，箭頭所示區(qū)域的炎性細胞浸潤明顯減少，且腹膜厚度減薄。

11圖 2：人臍帶間充質(zhì)干細胞能明顯改善腹膜透析液所致的腹膜增厚圖中藍色為膠原纖維，紅色為肌纖維。與鹽水對照組相比，腹膜纖維化組腹膜膠原纖維顯增厚。與腹膜纖維化組相比，治療組 1、2 腹膜膠原纖維厚度明顯減少。（Masson 染色，×100）大鼠腹膜厚度平均值： *與鹽水對照相比，P<0.05，n=6；#與腹膜纖維化組相比，P<0.05，n=61.3 人臍帶間充質(zhì)干細胞對腹膜透析大鼠腹膜功能的影響

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2715949