發(fā)布時間：2020-06-13 20:43

【摘要】：阿片成癮是一種復發(fā)性的腦病,其特點是強迫性的使用藥物,并伴隨負面的情緒和復吸的行為。慢性腦缺血是由多種原因?qū)е碌拇竽X長期處于血流灌注不足的狀態(tài)。盡管阿片成癮與腦缺血的病理過程并不相同,但是它們具有共同的特征,即均存在學習和認知功能的障礙。研究發(fā)現(xiàn)他克莫司(FK506)具有增加樹突棘的密度、調(diào)節(jié)學習記憶、神經(jīng)保護等作用。因此,本文擬研究FK506對嗎啡誘導的大鼠復吸行為和腦缺血大鼠學習記憶的影響及作用機制。第一部分FK506對嗎啡誘導的大鼠條件性位置偏愛復燃的影響及作用機制目的:研究FK506對嗎啡誘導的大鼠條件性位置偏愛復燃的影響,并探討其作用是否與調(diào)節(jié)大鼠成癮相關腦區(qū)骨架肌動蛋白重構(gòu)有關。方法:條件位置偏愛(CPP)模型:60只清潔級SD雄性大鼠,按隨機分組原則分為6組,生理鹽水組(NS)、嗎啡組(M)、FK506小劑量組(FKL)、FK506中劑量組(FKM)、FK506大劑量組(FKH)和單獨給予FK506組(FK)。每組10只。適應期:1-3天,每組動物每日進行15min的CPP監(jiān)測,把無偏愛的那側(cè)作為給藥箱,2-3天的CPP測試結(jié)果為基值。訓練期:4-11天,M、FKL、FKM和FKH組大鼠,連續(xù)7天上午腹腔注射嗎啡10 mg/kg,放入給藥箱中,訓練40 min;下午注射等量的生理鹽水,并將其放置在非給藥箱中40 min。NS組和FK組,每天上午腹腔注射生理鹽水和FK506(1 mg/kg),下午注射等量生理鹽水,執(zhí)行同樣的訓練。獲得期:第12天,測試方法同適應期,CPP評分為測試期停留在給藥箱時間與適應期停留在給藥箱時間的差值。消退期:停止給藥,隔5天測試一次,直到與適應期的評分無明顯差別。復吸期:NS組和FK組動物,分別注射生理鹽水和FK506(1mg/kg);M、FKL、FKM和FKH組,分別腹腔注射生理鹽水、FK506(0.2 mg/kg、1 mg/kg、5 mg/kg)30 min后,再腹腔注射10 mg/kg嗎啡,進行CPP測試,評分為復吸期停留在給藥箱時間與適應期的差值。在完成測試后,戊巴比妥麻醉后解剖大腦以分離相關腦區(qū):前額葉皮質(zhì)(Pfc),海馬(Hip)和伏隔核(NAc);以Western Blot檢測不同腦區(qū)的相關蛋白:G-actin、F-actin、drebrin、鈣調(diào)磷酸酶(calcineurin,CaN)、cofilin和p-cofilin蛋白表達。結(jié)果:1 CPP結(jié)果獲得期:與NS組相比,FK組無顯著差異,其余四組均有顯著差異(P0.05)。消退期:與NS組相比,各組均無顯著差異。復吸期:與NS組相比,M組有顯著升高(P0.001);與M組相比,FKL組沒有顯著差異,FKM組、FKH組及FK組均有明顯降低(P0.01)。2 Western-blot檢測不同腦區(qū)蛋白的表達2.1 F-actin/G-actin比值的變化在皮質(zhì)、海馬和伏隔核中,與NS組相比,M組有顯著減少(P0.001);與M組相,FKL組沒有顯著差異,FKM組和FKH組明顯升高(P0.001)。2.2 drebrin的變化總蛋白中drebrin:皮質(zhì)、海馬和伏隔核中各組均無明顯差異。胞漿中drebrin(G-drebrin):在皮質(zhì)、伏隔核中,與NS組相比,M組顯著減少(P0.001);與M組相比,FKM組和FKH組明顯升高(P0.001)。在海馬中,各組之間沒有顯著差別。F-actin結(jié)合的drebrin(F-drebrin):在皮質(zhì)、海馬及伏隔核中,與NS組相比,M組顯著減少(P0.001);與M組相比,FKM組和FKH組明顯升高(P0.001)。F-drebrin/G-drebrin:在皮質(zhì)、海馬及伏隔核中,與NS組相比,M組顯著減少(P0.001);與M組相比,FKM組和FKH組明顯升高(P0.001)。2.3 Cofilin和P-cofilin的變化總蛋白中的cofilin:皮質(zhì)、海馬和伏隔核中各組均無明顯差異�？偟鞍字械腜-cofilin:在皮質(zhì)、海馬及伏隔核中,與NS組相比,M組及FKL組有顯著下降(P0.05);與M組相比,FKM組和FKH組明顯增多(P0.05)。P-cofilin/Cofilin:在皮質(zhì)、海馬及伏隔核中,與NS組相比,M組顯著下降(P0.001);與M組相比,FKM組和FKH組明顯增多(P0.001)。2.4 CaN的變化在皮質(zhì)、海馬及伏隔核中,與NS組相比,M組表達量顯著增多(P0.05);與M組相比,FKM組和FKH組的CaN表達量明顯降低(P0.05)。結(jié)論:FK506可以抑制嗎啡誘導的成癮大鼠條件位置偏愛的復燃,其機制可能與抑制大鼠成癮相關腦區(qū)CaN的活性,促進cofilin磷酸化,增加drebrin與F-actin的結(jié)合,抑制肌動蛋白重構(gòu)有關。第二部分FK506對腦缺血大鼠學習記憶的影響及其作用機制目的:探討FK506對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎所致腦缺血大鼠學習和記憶的影響,并探討其作用是否與調(diào)節(jié)大鼠海馬骨架肌動蛋白重構(gòu)有關。方法:按照隨機分組的原則,分為假手術組(sham)、模型組(NaCl)、FK506低劑量組(FKL)、中劑量組(FKM)、高劑量組(FKH),術后灌胃給藥。雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎制備腦缺血模型,假手術組僅分離迷走和頸總動脈;以Morris水迷宮檢測大鼠的學習記憶能力,Western Blot檢測肌動蛋白、G-actin、F-actin、drebrin、CaN。結(jié)果:1.Morris水迷宮模型在定位巡航實驗中,與假手術組比,模型組潛伏時間明顯延長(P0.001);與模型組比,FK506中、高劑量組潛伏時間明顯減少(P0.05);在空間探索實驗中,與模型組相比,FK506高劑量組穿越平臺次數(shù)明顯增加(P0.05)。各組之間游泳速度均沒有顯著性差異(P0.05)。2.HE染色結(jié)果假手術組海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整;模型組海馬結(jié)構(gòu)疏松紊亂且神經(jīng)元丟失;與模型組比FK506中劑量組結(jié)構(gòu)紊亂較輕。3.Western Blot檢測相關蛋白與假手術組相比,模型組F-drebrin與G-drebrin的比值在海馬中的表達明顯降低(P0.05);與模型組相比,FK506中、高劑量組明顯增多(P0.05)。與假手術組相比,模型組CaN表達水平明顯升高(P0.05);與模型組相比,FK506中、高劑量組中其表達水平明顯減少(P0.05)。結(jié)論:雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎導致大鼠腦缺血,大鼠的學習記憶能力明顯下降,FK506可以改善大鼠腦缺血后學習記憶能力,其作用機制可能與抑制CaN表達,增加drebrin與F-actin的結(jié)合,抑制海馬肌動蛋白重構(gòu)有關。
【圖文】：

圖 1 不同時期的 CPP 評分Fig. 1 The score of CPP in different periods.A: Acquisition phase. B: Extinction phase. C: reinstatement phase. NS:repeated NS/ acute NS. M: repeated morphine/injection of NS/ acute morphine.FKL: repeated morphine/ Injection of FK506 (0.2 mg/kg)/ acute morphine.FKM: repeated morphine/ Injection of FK506 (1 mg/kg)/ acute morphine.FKH: repeated morphine/ Injection of FK506 (5 mg/kg)/ acute morphine. FK:repeated FK506 (1 mg/kg)/ acute FK506 (1 mg/kg). The data were observedas mean±SE, N=10.*P＜0.05, **P＜0.01 , ***P＜0.001vs NS;##P<0.01,###P<0.001vs M.

圖 2 不同腦區(qū) F-actin/ G-actin 比值的變化Fig. 2 Changes of F-actin/ G-actin in different brain regions of rats.A: Pfc; B: Hip; C: NAc. **P ＜ 0.01,***P ＜ 0.001vs NS;#P<0.05,###P<0.001vs M.
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R749.64;R743

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 張少華;蘇玉慧;;鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶與AD的關系研究及運動干預[J];基層醫(yī)學論壇;2010年04期

相關碩士學位論文 前1條

1 李俊雪;嗎啡戒斷、復吸大鼠不同腦區(qū)肌動蛋白重構(gòu)及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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本文編號：2711719