【摘要】：目的1.檢測Tenascin-X與CD34在載脂蛋白E基因敲除(Apo E~(-/-))小鼠高脂肪飼養(yǎng)后主動脈斑塊形成過程中的動態(tài)表達及探討兩者的相關(guān)性。2.探討Tenascin-X靶向USPIO分子探針在主動脈斑塊中的MR體內(nèi)成像的可行性,為分子成像的擴展進一步提供實驗研究。材料和方法1.高脂飼養(yǎng)雄性Apo E~(-/-)小鼠建立動脈粥樣硬化(AS)動物模型為實驗組,普通飼料喂養(yǎng)的雄性C57BL/6小鼠為對照組,兩組研究數(shù)量均為25只。兩組分別于喂養(yǎng)第8、12、20、28、36周時各取5只測其血脂水平,然后采集主動脈血管標本。油紅O染色和蘇木素-伊紅染色(HE)觀察主動脈斑塊的病理學形態(tài)并進行計量組織學、Tenascin-X(TNX)與CD34免疫組織化學表達分析。2.高脂飼養(yǎng)雄性40只ApoE~(-/-)小鼠建立動脈粥樣硬化動物模型,分別于喂養(yǎng)的第30周進行7.0磁共振掃描,掃描前隨機將其分為實驗組和對照組,每組各20只,每組小鼠在未打藥前均進行首次腹主動脈掃描。掃描結(jié)束后實驗組通過尾靜脈注射由化學偶聯(lián)法合成的靶向TNX的磁共振成像探針(anti-TNX-USPIO),對照組注射單純的超微超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)。于注射12h后再次進行MR成像,采用標準化相對信號改變率來計算斑塊相對信號改變量。成像結(jié)束后取出小鼠腹主動脈標本進行TNX免疫組化染色和普魯士藍染色,觀察斑塊內(nèi)TNX的表達和鐵顆粒的沉積并分析斑塊的信號改變。結(jié)果1.血脂水平分析顯示低密度脂蛋白(LDL)、總膽固醇(TC)水平在實驗組各期中均高于對照組(P0.05),而實驗組中的高密度脂蛋白(HDL)和甘油三酯(TG)僅在28周和32周高于對照組。隨著飼養(yǎng)時間的延長,實驗組的斑塊面積及斑塊面積/正常管腔面積比值不斷增加(斑塊面積:F=313.914,p0.001;斑塊面積/正常管腔面積:F=213.215,P0.001)。斑塊內(nèi)TNX與CD34的表達量隨著飼養(yǎng)時間的增加而增多,兩者均在36周時表達最多(TNX:0.541±0.074 vs 0.054±0.006、0.146±0.024、0.213±0.011、0.322±0.029;CD34:0.411±0.032 vs 0.150±0.033、0.198±0.013、0.220±0.013、0.387±0.055),并且TNX與CD34陽性微血管均在纖維帽及脂質(zhì)核心周圍高表達且呈正相關(guān)(r=0.87,P0.001)。而對照組各期中斑塊形成不明顯。2.實驗組打藥后12h斑塊信號降低較對照組明顯,并且斑塊信號改變率較對照組具有統(tǒng)計學意義(實驗組12h:-24.98±13.54%vs對照組12h:-4.88±3.08%,F=23.152,P0.001)。免疫組化染色顯示實驗組和對照組斑塊中均存在Tenascin-X表達及普魯士藍鐵顆粒沉積,并且普魯士藍染鐵顆粒在實驗組斑塊中明顯高于對照組。結(jié)論1.Tenascin-X和CD34的表達量隨著斑塊進展而增多,且兩者在斑塊中的表達區(qū)域相似。TNX可能與斑塊中新生血管的形成密切相關(guān)。2.anti-TNX-USPIO探針可活體檢測動脈粥樣硬化斑塊中Tenascin-X的表達,且斑塊的相對信號改變率為斑塊中TNX的吸收提供一種定量的評估方法。為動脈粥樣硬化分子成像進一步奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

3. 統(tǒng)計學分析采用 SPSS18.0 軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以組間比較采用單因素方差分析,多組中的兩兩比significance difference，LSD-t），利用 pearson 做相關(guān)有統(tǒng)計學意義。二、結(jié)果2.1 實驗組小鼠不同時期體重變化（圖 1）總體而言，小鼠體重在飼養(yǎng)前 4 月中為體重增重維持在 30.92±0.55 g，在飼養(yǎng) 6 月時稍降低。（135，30，25，25，19，18，12，10），測量數(shù)量根自然死亡數(shù)量決定。

36周 對照組 28周 36周圖 2.ApoE 基因敲除小鼠主動脈 HE 染色和油紅 O 染色 (x 100 )。實驗組飼養(yǎng) 8 周時內(nèi)膜局部脂質(zhì)沉積增厚； 12 周時斑塊內(nèi)膠原纖維增生，出現(xiàn)少許脂質(zhì)核心； 20 周時纖維帽局部變薄，連續(xù)性中斷；28 周時斑塊局部斷裂，局部可見膽固醇結(jié)晶堆積；36 周時斑塊體積明顯變大，壞死核心增大，管腔明顯狹窄，甚至閉塞；對照組血管內(nèi)膜細胞排列整齊，無斑塊形成。28 周和 36 周的油紅 0 染色(x 200)：斑塊中紅色代表脂質(zhì)成分，36 周時斑塊中脂質(zhì)成分較 28 周增多。2.4 實驗組小鼠各時期 AS 斑塊面積（表 2）實驗組自喂養(yǎng) 8 周起開始有斑塊形成，隨著飼養(yǎng)時間延長，LA 差異未見明顯變化（F=0.033,P=0.998），而斑塊面積 PA 和斑塊狹窄率，即 PA/LA 比值隨著飼養(yǎng)時間的增加而不斷增加（PA：F=313.914，P<0.001；PA/LA：F=213.215，P<0.001），LSD 比較 PA 和 PA/LA，任意兩時期比較均有統(tǒng)計學意義（P 均<0.05），，而對照組各時期主動脈未見明顯斑塊形成。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R543.5;R445.2

【相似文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 周明;Tenascin-X與CD34在動脈粥樣硬化斑塊形成過程中的表達及MR靶向斑塊中Tenascin-X體內(nèi)成像的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學;2019年

本文編號：2711695