【摘要】：目的1.檢測(cè)Tenascin-X與CD34在載脂蛋白E基因敲除(Apo E~(-/-))小鼠高脂肪飼養(yǎng)后主動(dòng)脈斑塊形成過(guò)程中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及探討兩者的相關(guān)性。2.探討Tenascin-X靶向USPIO分子探針在主動(dòng)脈斑塊中的MR體內(nèi)成像的可行性,為分子成像的擴(kuò)展進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)研究。材料和方法1.高脂飼養(yǎng)雄性Apo E~(-/-)小鼠建立動(dòng)脈粥樣硬化(AS)動(dòng)物模型為實(shí)驗(yàn)組,普通飼料喂養(yǎng)的雄性C57BL/6小鼠為對(duì)照組,兩組研究數(shù)量均為25只。兩組分別于喂養(yǎng)第8、12、20、28、36周時(shí)各取5只測(cè)其血脂水平,然后采集主動(dòng)脈血管標(biāo)本。油紅O染色和蘇木素-伊紅染色(HE)觀察主動(dòng)脈斑塊的病理學(xué)形態(tài)并進(jìn)行計(jì)量組織學(xué)、Tenascin-X(TNX)與CD34免疫組織化學(xué)表達(dá)分析。2.高脂飼養(yǎng)雄性40只ApoE~(-/-)小鼠建立動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型,分別于喂養(yǎng)的第30周進(jìn)行7.0磁共振掃描,掃描前隨機(jī)將其分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組各20只,每組小鼠在未打藥前均進(jìn)行首次腹主動(dòng)脈掃描。掃描結(jié)束后實(shí)驗(yàn)組通過(guò)尾靜脈注射由化學(xué)偶聯(lián)法合成的靶向TNX的磁共振成像探針(anti-TNX-USPIO),對(duì)照組注射單純的超微超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)。于注射12h后再次進(jìn)行MR成像,采用標(biāo)準(zhǔn)化相對(duì)信號(hào)改變率來(lái)計(jì)算斑塊相對(duì)信號(hào)改變量。成像結(jié)束后取出小鼠腹主動(dòng)脈標(biāo)本進(jìn)行TNX免疫組化染色和普魯士藍(lán)染色,觀察斑塊內(nèi)TNX的表達(dá)和鐵顆粒的沉積并分析斑塊的信號(hào)改變。結(jié)果1.血脂水平分析顯示低密度脂蛋白(LDL)、總膽固醇(TC)水平在實(shí)驗(yàn)組各期中均高于對(duì)照組(P0.05),而實(shí)驗(yàn)組中的高密度脂蛋白(HDL)和甘油三酯(TG)僅在28周和32周高于對(duì)照組。隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)組的斑塊面積及斑塊面積/正常管腔面積比值不斷增加(斑塊面積:F=313.914,p0.001;斑塊面積/正常管腔面積:F=213.215,P0.001)。斑塊內(nèi)TNX與CD34的表達(dá)量隨著飼養(yǎng)時(shí)間的增加而增多,兩者均在36周時(shí)表達(dá)最多(TNX:0.541±0.074 vs 0.054±0.006、0.146±0.024、0.213±0.011、0.322±0.029;CD34:0.411±0.032 vs 0.150±0.033、0.198±0.013、0.220±0.013、0.387±0.055),并且TNX與CD34陽(yáng)性微血管均在纖維帽及脂質(zhì)核心周圍高表達(dá)且呈正相關(guān)(r=0.87,P0.001)。而對(duì)照組各期中斑塊形成不明顯。2.實(shí)驗(yàn)組打藥后12h斑塊信號(hào)降低較對(duì)照組明顯,并且斑塊信號(hào)改變率較對(duì)照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組12h:-24.98±13.54%vs對(duì)照組12h:-4.88±3.08%,F=23.152,P0.001)。免疫組化染色顯示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組斑塊中均存在Tenascin-X表達(dá)及普魯士藍(lán)鐵顆粒沉積,并且普魯士藍(lán)染鐵顆粒在實(shí)驗(yàn)組斑塊中明顯高于對(duì)照組。結(jié)論1.Tenascin-X和CD34的表達(dá)量隨著斑塊進(jìn)展而增多,且兩者在斑塊中的表達(dá)區(qū)域相似。TNX可能與斑塊中新生血管的形成密切相關(guān)。2.anti-TNX-USPIO探針可活體檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中Tenascin-X的表達(dá),且斑塊的相對(duì)信號(hào)改變率為斑塊中TNX的吸收提供一種定量的評(píng)估方法。為動(dòng)脈粥樣硬化分子成像進(jìn)一步奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 SPSS18.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以組間比較采用單因素方差分析,多組中的兩兩比significance difference，LSD-t），利用 pearson 做相關(guān)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。二、結(jié)果2.1 實(shí)驗(yàn)組小鼠不同時(shí)期體重變化（圖 1）總體而言，小鼠體重在飼養(yǎng)前 4 月中為體重增重維持在 30.92±0.55 g，在飼養(yǎng) 6 月時(shí)稍降低。（135，30，25，25，19，18，12，10），測(cè)量數(shù)量根自然死亡數(shù)量決定。

36周 對(duì)照組 28周 36周圖 2.ApoE 基因敲除小鼠主動(dòng)脈 HE 染色和油紅 O 染色 (x 100 )。實(shí)驗(yàn)組飼養(yǎng) 8 周時(shí)內(nèi)膜局部脂質(zhì)沉積增厚； 12 周時(shí)斑塊內(nèi)膠原纖維增生，出現(xiàn)少許脂質(zhì)核心； 20 周時(shí)纖維帽局部變薄，連續(xù)性中斷；28 周時(shí)斑塊局部斷裂，局部可見(jiàn)膽固醇結(jié)晶堆積；36 周時(shí)斑塊體積明顯變大，壞死核心增大，管腔明顯狹窄，甚至閉塞；對(duì)照組血管內(nèi)膜細(xì)胞排列整齊，無(wú)斑塊形成。28 周和 36 周的油紅 0 染色(x 200)：斑塊中紅色代表脂質(zhì)成分，36 周時(shí)斑塊中脂質(zhì)成分較 28 周增多。2.4 實(shí)驗(yàn)組小鼠各時(shí)期 AS 斑塊面積（表 2）實(shí)驗(yàn)組自喂養(yǎng) 8 周起開(kāi)始有斑塊形成，隨著飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，LA 差異未見(jiàn)明顯變化（F=0.033,P=0.998），而斑塊面積 PA 和斑塊狹窄率，即 PA/LA 比值隨著飼養(yǎng)時(shí)間的增加而不斷增加（PA：F=313.914，P<0.001；PA/LA：F=213.215，P<0.001），LSD 比較 PA 和 PA/LA，任意兩時(shí)期比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 均<0.05），，而對(duì)照組各時(shí)期主動(dòng)脈未見(jiàn)明顯斑塊形成。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R543.5;R445.2

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1 周明;Tenascin-X與CD34在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過(guò)程中的表達(dá)及MR靶向斑塊中Tenascin-X體內(nèi)成像的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2711695